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      一種高產琥珀酸大腸桿菌的構建方法及其應用

      文檔序號:40399526發(fā)布日期:2024-12-20 12:23閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.高產率琥珀酸的重組大腸桿菌,其特征在于,在出發(fā)菌株的基礎上過表達谷氨酸棒桿菌來源的葡萄糖轉運蛋白ptsg,并過表達gadbc基因。

      2.根據(jù)權利要求1所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述重組大腸桿菌還將gadbc的啟動子替換為pj23119,并將gadbc的rbs序列替換為rbs34。

      3.根據(jù)權利要求1或2所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述gadbc基因整合在ilvg和/或rph位點上。

      4.根據(jù)權利要求3所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述過表達是分別在ilvg和rph位點整合gadbc。

      5.根據(jù)權利要求1~4任一所述的重組大腸桿菌,其特征在于,所述出發(fā)菌株包括但不限于大腸桿菌fmme-n-5。

      6.一種發(fā)酵生產琥珀酸的方法,其特征在于,將權利要求1~5任一所述的重組大腸桿菌在發(fā)酵培養(yǎng)基中進行有氧-厭氧兩階段發(fā)酵。

      7.根據(jù)權利要求6所述的方法,其特征在于,用于發(fā)酵的培養(yǎng)基含有:葡萄糖40-45g/l,玉米漿10-15g/l,(nh4)2so4?2-4g/l,k2hpo4?1~3g/l,kh2po4?0.5~0.9g/l,mgso4·7h2o0.5~0.9g/l。

      8.根據(jù)權利要求6或7所述的方法,其特征在于,所述有氧-厭氧兩階段發(fā)酵是先在有氧環(huán)境下發(fā)酵直至發(fā)酵培養(yǎng)基中葡萄糖耗盡,且od600達到40~55時,轉為厭氧發(fā)酵。

      9.根據(jù)權利要求8所述的方法,其特征在于,在厭氧階段控制葡萄糖濃度不超過5g/l。

      10.權利要求1~5任一所述的重組大腸桿菌或權利要求6~9任一所述方法在生產琥珀酸或含琥珀酸的產品中的應用。


      技術總結
      本發(fā)明公開了一種高產琥珀酸大腸桿菌的構建方法及其應用,屬于生物工程技術領域。本發(fā)明將大腸桿菌中的葡萄糖轉運蛋白基因ptsG替換為來自谷氨酸棒狀桿菌的同源基因,并上調谷氨酸脫羧酶依賴性耐酸系統(tǒng)gadBC的表達,以增強菌株的耐酸性能。并通過優(yōu)化RBS序列和啟動子,實現(xiàn)了對ptsG、gadBC系統(tǒng)的精確調控。本發(fā)明構建的重組大腸桿菌無需抗生素抗性基因,展現(xiàn)出良好的耐低pH環(huán)境和高效琥珀酸生產特性。采用兩階段發(fā)酵策略,36小時內琥珀酸產量可達104.23g/L,全階段琥珀酸產率達到0.90g/g葡萄糖,生產強度為2.89g/L/h,具有顯著的工業(yè)化生產潛力。

      技術研發(fā)人員:陳修來,唐永圣,顧子蘊,陶雨萱,李瑩瑩
      受保護的技術使用者:江南大學
      技術研發(fā)日:
      技術公布日:2024/12/19
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