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      羰基還原酶突變體及其催化合成高濃度玻色因的方法

      文檔序號(hào):40279531發(fā)布日期:2024-12-11 13:16閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種羰基還原酶突變體,其特征在于,所述突變體為,將氨基酸序列如seq?id?no.1所示的羰基還原酶的第37位,第87位,第98位,第200位,第208位,第295位中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸進(jìn)行突變后得到的。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羰基還原酶突變體,其特征在于,所述突變體為:

      3.編碼權(quán)利要求1或2所述突變體的基因或攜帶所述基因的重組載體。

      4.表達(dá)權(quán)利要求1或2所述突變體或攜帶權(quán)利要求3所述基因或所述重組載體的重組細(xì)胞。

      5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組細(xì)胞,其特征在于,所述重組細(xì)胞是以細(xì)菌或真菌為表達(dá)宿主。

      6.一種含有權(quán)利要求1或2所述羰基還原酶突變體序列的重組酶催化劑,其特征在于,所述重組酶催化劑是以下形式中的任意一種:

      7.一種提高羰基還原酶催化合成產(chǎn)物的非對(duì)映體選擇性和/或底物轉(zhuǎn)化率和/或產(chǎn)率的方法,其特征在于,所述方法為,將氨基酸序列如seq?id?no.1所示的羰基還原酶的第37位的苯丙氨酸突變?yōu)楸彼峄虬腚装彼幔?/p>

      8.一種制備玻色因的方法,其特征在于,所述方法為,以β-丙酮木糖苷為底物,采用權(quán)利要求1或2所述的羰基還原酶突變體或權(quán)利要求4或5所述的重組細(xì)胞或權(quán)利要求6所述的重組酶催化劑,以緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系,轉(zhuǎn)化制備得到玻色因;

      9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系的反應(yīng)條件為,溫度為25-35℃,150-300rpm條件下反應(yīng)6-10h;

      10.權(quán)利要求1或2所述的突變體,或權(quán)利要求3所述的基因或重組載體,或權(quán)利要求4或5所述的重組細(xì)胞,或權(quán)利要求6所述的重組酶催化劑,或權(quán)利要求8或9所述的制備方法在制備玻色因或含有玻色因的產(chǎn)品中的應(yīng)用;


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明公開(kāi)了羰基還原酶突變體及其催化合成高濃度玻色因的方法,屬于生物催化領(lǐng)域。本發(fā)明采用一鍋法催化β?丙酮木糖苷合成高濃度玻色因,以羰基還原酶CnMDR編碼的酶,理性設(shè)計(jì)底物口袋關(guān)鍵結(jié)合多位點(diǎn),將有益突變進(jìn)行組合,以優(yōu)勢(shì)突變酶重組菌為催化劑,以β?丙酮木糖苷為底物,同時(shí)引入甲酸脫氫酶變體和NAD<supgt;+</supgt;激酶,驅(qū)動(dòng)NADP<supgt;+</supgt;?NADPH輔酶循環(huán),合成玻色因的產(chǎn)量為200g/L,轉(zhuǎn)化率>99%,產(chǎn)物ee值>99%,均為目前公開(kāi)報(bào)道的最高水平,本發(fā)明提供了一種一鍋法高效低成本合成玻色因的方法,僅需要添加微量(0.3mM)輔酶,反應(yīng)體系中副產(chǎn)物易于分離,為工業(yè)化放大生產(chǎn)提供了極大的便利。

      技術(shù)研發(fā)人員:張榮珍,饒志明,盧健
      受保護(hù)的技術(shù)使用者:江南大學(xué)
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/10
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