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      一種環(huán)境水體中高致病性細菌多重PCR定量檢測方法與流程

      文檔序號:40279686發(fā)布日期:2024-12-11 13:17閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.同時檢測多種微生物的組合物,其特征在于,所述組合物包括12對引物對,所述12對引物對的核苷酸序列如seq?id?no.1-seq?id?no.24所示。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述組合物還包括12個探針,所述12個探針的核苷酸序列如seq?id?no.25-seq?id?no.36所示。

      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物,其特征在于,所述探針的5’端標記熒光基團,3’端標記淬滅基團。

      4.同時檢測多種微生物的試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括權(quán)利要求1-3中任一所述的組合物。

      5.同時檢測多種微生物的dna芯片,其特征在于,所述dna芯片包括權(quán)利要求1-3中任一所述的組合物。

      6.權(quán)利要求1-3中任一所述的組合物、權(quán)利要求4所述的試劑盒或權(quán)利要求5所述的dna芯片在檢測環(huán)境樣本中12種微生物中的應(yīng)用,所述12種微生物為鮑氏不動桿菌、嗜水氣單胞菌、空腸彎曲桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌、阪崎腸桿菌、糞腸球菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、堪薩斯分枝桿菌、邦戈沙門氏菌、痢疾志賀氏菌和/或創(chuàng)傷弧菌。

      7.權(quán)利要求1-3中任一所述的組合物在制備用于檢測權(quán)利要求6中所述的12種微生物的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

      8.一種同時檢測多種微生物的方法,其特征在于,所述方法包括如下步驟:

      9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于,所述多重實時熒光定量pcr的反應(yīng)程序為:25℃溶解2min;50℃溶解15min;95℃預(yù)變性10min;40個循環(huán),每個循環(huán)包括95℃變性3s,60℃退火延伸1min。

      10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法,其特征在于,所述多重實時熒光定量pcr的反應(yīng)體系中,每個引物的濃度為900nm,探針的濃度為250nm。


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明公開了一種環(huán)境水體中高致病性細菌多重PCR定量檢測方法。具體地公開了同時檢測多種微生物的組合物,所述組合物包括12對引物對和12個探針,所述12對引物對的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1?SEQ?ID?No.24所示,所述12個探針的核苷酸序列如SEQ?ID?No.25?SEQ?ID?No.36所示。本發(fā)明的組合物能夠同時檢測水體中常見的12種主要致病菌,可以開發(fā)成檢測試劑盒或DNA芯片,可高覆蓋率、高通量、低成本地快速檢測多個樣本,具有靈敏度高、特異性好的特點。本發(fā)明的檢測方法不僅極大地提高了檢測效率,還解決了定量檢測的難題,具有廣泛的應(yīng)用潛力,能夠更好地滿足飲用水監(jiān)測的需要。

      技術(shù)研發(fā)人員:張嵐,張曉,邢方瀟,王園媛,韓嘉藝,張良
      受保護的技術(shù)使用者:中國疾病預(yù)防控制中心環(huán)境與健康相關(guān)產(chǎn)品安全所
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/10
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