本發(fā)明屬于環(huán)肽的合成及應(yīng)用，具體涉及環(huán)九肽-1及其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、多肽是由氨基酸通過脫水縮合組成的，這些氨基酸本身都帶有羧基和氨基，一般都是親水性化合物，其組成的多肽一般都具有明顯的親水性和離子性，尤其是一些小分子多肽由于無毒、易被皮膚吸收、吸收后所具有的特殊生理活性作用，能由表及里在本質(zhì)上改善皮膚的某些問題，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于美容化妝品配方中。目前市面上具有各種各樣的化妝品或護(hù)膚品，但大多數(shù)護(hù)膚品只添加某一類功效的多肽作為護(hù)膚品的功效活性物，因此皮膚獲得的效果較單一，且見效慢；再者，目前市面上的大部分以多肽為活性功效物的護(hù)膚品，都是將多肽或者多肽原液直接添加在常規(guī)護(hù)膚品基質(zhì)中，基于對(duì)整個(gè)配方的制作和穩(wěn)定性考慮，多肽的添加量會(huì)受到局限。

2、在常規(guī)的多肽修飾中，都會(huì)采用棕櫚酰修飾或者是肉豆蔻等修飾的方法來完成，這種用棕櫚酰來修飾或肉豆蔻來修飾的多肽一般都會(huì)具有親水性和親油性，往往在分離純化過程中會(huì)大大增加溶劑的耗用，增加成本。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種保濕效果好、抗皺效果好、緊致效果好、舒緩效果好、抑制神經(jīng)遞質(zhì)釋放效果好、美白效果好的功能性環(huán)肽及其制備方法及應(yīng)用。

2、采用多肽環(huán)化的方式，將線性多肽進(jìn)行環(huán)化，從而得到環(huán)化后的多肽。而這種多肽的環(huán)化就將本屬于多肽的羧基和氨基脫水縮合形成了新的酰胺鍵，增加了多肽的脂溶性，又不會(huì)明顯的增加溶劑耗用。環(huán)化的多肽相對(duì)比線性肽具有更好的穩(wěn)定性，同時(shí)，將羧基和氨基或羥基進(jìn)行縮合，得到的多肽具有更好的脂溶性，具備更好的皮膚滲透性。

3、本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：

4、功能性環(huán)肽在保濕產(chǎn)品和/或抗皺產(chǎn)品和/或緊致產(chǎn)品和/或舒緩產(chǎn)品和/或抑制神經(jīng)遞質(zhì)釋放產(chǎn)品和/或美白產(chǎn)品和/或抗糖化產(chǎn)品和/或抗氧化產(chǎn)品中的用途，功能性環(huán)肽具有下式結(jié)構(gòu)：

5、，其中，1≤n，rm的數(shù)目為n個(gè)，r1、r2、r3或rm選自h、脂肪烴、取代脂肪烴、芳基、取代芳基、咪唑基、取代咪唑基、吲哚基、取代吲哚基、胍基、取代胍基、金屬烷基或與鄰近氮原子形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基。

6、優(yōu)選地，n≤6；或，1≤n≤6；或，n=2；或，n=3；或，n=4；或，n=5。

7、優(yōu)選地，r1、r2、r3和rm中任2個(gè)以上的基團(tuán)相同；或，r1、r2、r3和rm中任意相鄰的基團(tuán)相同；當(dāng)r1、r2、r3或rm選自-ch2-ch2-ch2-基團(tuán)時(shí)，r1、r2、r3或rm與相鄰的n相連而成環(huán)；或，r1、r2、r3或rm選自氫原子基團(tuán)、甲基、-ch2-ch2-ch2-基團(tuán)、丙基、丁基、羥甲基、羥乙基、乙酰胺基、丙酰胺基、ch3-s-ch2-ch2-基團(tuán)、hs-ch2-基團(tuán)、ph-ch2-基團(tuán)、對(duì)羥苯甲基、乙酸基、丙酸基、se-ch2-基團(tuán)、丁胺基、吲哚基、咪唑甲基和取代胍基中任1種。

8、優(yōu)選地，功能性環(huán)肽為如下任一種：

9、。

10、功能性環(huán)肽的制備方法，包括：將線性肽與環(huán)化試劑混合于溶劑中進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)，后處理制備得到功能性環(huán)肽；功能性環(huán)肽具有下式結(jié)構(gòu)：

11、，其中，1≤n，rm的數(shù)目為n個(gè)，r1、r2、r3或rm選自h、脂肪烴、取代脂肪烴、芳基、取代芳基、咪唑基、取代咪唑基、吲哚基、取代吲哚基、胍基、取代胍基、金屬烷基或與鄰近氮原子形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)的烷基。

12、優(yōu)選地，功能性環(huán)肽為如下任一種：

13、。

14、優(yōu)選地，線性肽的制備方法為固相合成法；或，環(huán)化試劑為hbtu；或，溶劑為dmf、dcm和diea中至少1種；或，后處理包括環(huán)化后處理、切割處理和切割后處理。

15、更優(yōu)選地，環(huán)化后處理中，向環(huán)化反應(yīng)完成的試液中加入冰水或dcm，分離得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽；或，切割處理中的切割液包括e液或f液，e液由tfa、茴香硫醚、edt、phoh和水混合而成，tfa、茴香硫醚、edt、phoh和水以體積比為75-95：2-10：1-5：1-5：1-5的比例混合，f液由tfa、tis和水混合而成，tfa、tis和水以體積比為80-96：2-10：2-10的比例混合；或，切割后處理中，將切割處理完成的試液加入冰乙醚中，分離純化得到功能性環(huán)肽。

16、更優(yōu)選地，后處理中包括液相色譜法純化功能性環(huán)肽；或，環(huán)化反應(yīng)中，將線性肽加入溶劑中混合得到線性肽溶液，然后將線性肽溶液與環(huán)化試劑混合，在30-50℃下進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)；或，后處理中，環(huán)化反應(yīng)完成后，進(jìn)行環(huán)化后處理，得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽，加入切割液處理，最后進(jìn)行切割后處理，得到環(huán)肽。

17、更優(yōu)選地，環(huán)化后處理中，向環(huán)化反應(yīng)完成的試液中加入冰水，析出固體，攪拌過濾，固體采用ea溶解，然后依次采用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干，得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽；或，環(huán)化后處理中，向環(huán)化反應(yīng)完成的試液中加入dcm，分層萃取，然后依次采用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干，得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽；或，切割后處理中，將切割處理完成的試液加入冰乙醚中，析出固體，離心洗滌，固體蒸干，純化，得到環(huán)肽；或，環(huán)化反應(yīng)中采用lc-ms監(jiān)測(cè)；或，溶劑為dmf、dcm和diea中至少1種，溶劑以其中dmf為計(jì)量基準(zhǔn)，線性肽與dmf的使用量的關(guān)系為0.1-30mg/ml。

18、優(yōu)選地，氨基酸活化液的制備中，將氨基酸試劑和hobt混合，在2-8℃的溫度下加入dmf和dic，靜置反應(yīng)10-30min，得到氨基酸活化液。

19、更優(yōu)選地，氨基酸活化液的制備中，hobt的使用摩爾量為氨基酸試劑的使用摩爾量的50-200%。

20、更優(yōu)選地，氨基酸活化液的制備中，dic的使用摩爾量為氨基酸試劑的使用摩爾量的50-200%，dmf與氨基酸試劑的使用量的關(guān)系為0.1-4.5ml/mmol。

21、更優(yōu)選地，氨基酸活化液的制備中，氨基酸試劑包括如下試劑中任1種：fmoc-pro-oh、fmoc-tyr（tbu）-oh、fmoc-phe-oh、fmoc-lys（boc）-oh、fmoc-val-oh、fmoc-asp（otbu）-oh、fmoc-ser（tbu）-oh、fmoc-thr（tbu）-oh、fmoc-arg（pbf）-oh、fmoc-met-oh、fmoc-glu（otbu）-oh、fmoc-gln（trt）-oh、fmoc-ala-oh、fmoc-d-trp（boc）-oh、fmoc-d-phe-oh。

22、優(yōu)選地，線性肽的制備中，將首個(gè)氨基酸試劑與ctc樹脂混合，然后加入二氯甲烷（dcm）和diea，在20-40℃下反應(yīng)2-5h，然后加入甲醇，反應(yīng)3-30min，反應(yīng)完成后過濾，洗滌，加入脫保護(hù)液處理；依次按線性肽的順序?qū)被峄罨号c鍵合首個(gè)氨基酸的ctc樹脂混合，反應(yīng)0.5-3h，每次氨基酸活化液反應(yīng)后脫保護(hù)液處理，最后一個(gè)氨基酸試劑反應(yīng)完后，加入切割液處理，得到線性肽。

23、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，ctc樹脂中總?cè)〈葹槿〈扰cctc樹脂質(zhì)量的積，即總?cè)〈葹閏tc樹脂的總活性反應(yīng)位點(diǎn)的摩爾量，首個(gè)氨基酸試劑的使用摩爾量為ctc樹脂中總?cè)〈鹊?0-250%。

24、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，二氯甲烷與首個(gè)氨基酸試劑的使用量的關(guān)系為1-65ml/mmol。

25、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，diea與首個(gè)氨基酸試劑的使用量的關(guān)系為0.1-5ml/mmol。

26、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，甲醇與首個(gè)氨基酸試劑的使用量的關(guān)系為0.1-6.5ml/mmol。

27、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，氨基酸活化液的使用量以其中氨基酸試劑的摩爾量為計(jì)量基準(zhǔn)，則氨基酸試劑的使用摩爾量為ctc樹脂中總?cè)〈鹊?00-350%。

28、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，首個(gè)氨基酸試劑包括如下任1種：fmoc-pro-oh、fmoc-tyr（tbu）-oh、fmoc-ser（tbu）-oh、fmoc-arg（pbf）-oh、fmoc-met-oh。脫保護(hù)液為10-30%pip/dmf溶液。切割液為30%tfe/dcm溶液。

29、線性肽包括h-phe-phe-tyr（tbu）-pro-oh、h-asp（otbu）-val-lys（boc）-tyr（tbu）-oh、h-lys（boc）-thr（tbu）-thr（tbu）-lys（boc）-ser（tbu）-oh、h-arg（pbf）-lys（boc）-asp（otbu）-val-tyr（tbu）-oh、h-thr（tbu）-ser（tbu）-val-val-val-arg（pbf）-oh、h-gln（trt）-arg（pbf）-arg（pbf）-glu（otbu）-glu（otbu）-met-oh、h-gln（trt）-arg（pbf）-arg（pbf）-ala-glu（otbu）-glu（otbu）-met-oh、h-gln（trt）-arg（pbf）-arg（pbf）-ala-asp（otbu）-glu（otbu）-glu（otbu）-met-oh和h-val-met-pro-{d-phe}-arg（pbf）-{d-trp}（boc）-phe-lys（boc）-pro-oh中任1種。

30、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，首個(gè)氨基酸與ctc樹脂反應(yīng)后的洗滌中，依次采用二氯甲烷（dcm）、甲醇和dmf洗滌。

31、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，按環(huán)肽的線性肽的順序加入氨基酸活化液反應(yīng)時(shí)，在每次氨基酸活化液反應(yīng)后洗滌中，采用dmf洗滌。

32、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，脫保護(hù)液處理中，將鍵合氨基酸試劑后的ctc樹脂采用dmf洗滌，然后加入脫保護(hù)液，攪拌處理10-60min，處理完成后抽濾除去脫保護(hù)液，dmf洗滌，抽干。脫保護(hù)液適量使用。

33、更優(yōu)選地，線性肽的制備中，切割液處理中，將切割液加入鍵合完氨基酸試劑的ctc樹脂中，在20-40℃下處理0.5-5h，處理完成后過濾，除去樹脂，得到濾液，濾液拉干得到線性肽。切割液適量使用。

34、優(yōu)選地，環(huán)肽的制備中，將線性肽加入溶劑中混合得到線性肽溶液，然后將線性肽溶液與環(huán)化試劑混合，在30-50℃下反應(yīng)，lc-ms監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)完成后，進(jìn)行環(huán)化后處理，得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽，加入切割液處理，最后進(jìn)行切割后處理，得到環(huán)肽。

35、更優(yōu)選地，環(huán)肽的制備中，溶劑含有dmf，還可含有dcm和diea中至少1種，溶劑以其中dmf為計(jì)量基準(zhǔn)，線性肽與dmf的使用量的關(guān)系為0.1-30mg/ml，dcm與dmf的使用量的關(guān)系為0.1-10ml/ml，diea與dmf的使用量的關(guān)系為0.1-5mg/ml，切割液為e液或f液，切割液適量使用。環(huán)化試劑為hbtu，hbtu與dmf的使用量的關(guān)系為0.1-5mg/ml。

36、更優(yōu)選地，環(huán)肽的制備中，e液由tfa、茴香硫醚、edt、phoh和水混合而成，tfa、茴香硫醚、edt、phoh和水以體積比為87.5：5：2.5：2.5：2.5的比例混合。

37、更優(yōu)選地，環(huán)肽的制備中，f液由tfa、tis和水，tfa、tis和水以體積比為90：5：5的比例混合；pr100、

38、優(yōu)選地，環(huán)化后處理中，將dmf拉干，并向環(huán)化反應(yīng)完成的試液中加入冰水，析出固體，攪拌過濾，固體采用ea溶解，然后依次采用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干，得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽。

39、優(yōu)選地，環(huán)化后處理中，將dmf拉干，向環(huán)化反應(yīng)完成的試液中加入dcm，分層萃取，然后依次采用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干，得到具有保護(hù)基團(tuán)的環(huán)肽。

40、優(yōu)選地，切割后處理中，將切割處理完成的試液加入冰乙醚中，析出固體，離心洗滌，固體蒸干，純化，得到環(huán)肽。

41、純化采用液相色譜法。

42、本發(fā)明由于采用了氨基酸試劑經(jīng)活化后制備得到含有保護(hù)基的線性肽，然后通過環(huán)化處理制備、切割處理得到具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的功能性環(huán)肽，因而具有如下有益效果：本發(fā)明制備得到的功能性環(huán)肽的保濕效果好、抗皺效果好、緊致效果好、舒緩效果好、抑制神經(jīng)遞質(zhì)釋放效果好、美白效果好、抗糖化效果好、抗氧化效果好。因此，本發(fā)明是一種保濕效果好、抗皺效果好、緊致效果好、舒緩效果好、抑制神經(jīng)遞質(zhì)釋放效果好、美白效果好的功能性環(huán)肽及其制備方法及應(yīng)用。