1.基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,包括以下步驟:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟三中,所述mrna的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)采用cbcscript逆轉(zhuǎn)錄酶,以保證逆轉(zhuǎn)錄效率和cdna的完整性,通過將從實驗組-臨床卵巢癌患者和對照組-其他良性疾病就診患者收集的mrna混合,并根據(jù)cbcscript逆轉(zhuǎn)錄酶的用戶手冊中提供的反應(yīng)條件設(shè)置,包括適宜的溫度和時間,在反應(yīng)完成后,利用瓊脂糖凝膠電泳法確認(rèn)cdna的質(zhì)量,通過比較cdna的條帶大小與標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記,以驗證完整性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟四中,加入全基因組擴(kuò)增試劑的濃度范圍為1-5μl,并保持反應(yīng)體系的體積在20-50μl,在擴(kuò)增過程中采用熱循環(huán)程序,包括以下階段:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟五中,片段化后的dna樣本需經(jīng)過酶解處理,其酶的選擇包括限制性內(nèi)切酶或dna片段化酶,生成的dna片段在200-500bp范圍內(nèi),在dna沉淀后,通過離心和洗滌去除未結(jié)合的試劑和酶,得到高純度的片段化dna樣本,并重懸于適當(dāng)?shù)碾s交緩沖液中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟六中,片段化后的dna樣本經(jīng)過變性處理,使其轉(zhuǎn)變?yōu)閱捂溞问?,此時,dna樣本中的序列與芯片上位點特異的50個堿基探針進(jìn)行退火結(jié)合,每個微珠bead上連接著不同的50個堿基序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟七中,將芯片放入xc4試劑中進(jìn)行包被,使芯片的表面包裹上一層粘性透明液體,在芯片外形成保護(hù)層。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟八中,將經(jīng)過雜交和延伸反應(yīng)處理的芯片放入掃描儀中,通過激光激發(fā)芯片上單堿基延伸產(chǎn)物的熒光基團(tuán),掃描儀獲取由熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號,并生成高分辨率的圖像數(shù)據(jù),所得的圖像數(shù)據(jù)直接導(dǎo)入luxscan3.0圖像分析軟件處理與分析,提取每個樣本的snp分型數(shù)據(jù)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于xrcc3與xpc基因分析卵巢癌早期篩查方法,其特征在于,所述步驟九中,根據(jù)目標(biāo)基因的序列信息設(shè)計特異性引物,引物的tm值相近,在在rt-pcr反應(yīng)中,設(shè)定初始變性溫度為95℃,退火溫度為60℃,延伸溫度為72℃,每個循環(huán)設(shè)定為30秒,pcr產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳分離,確認(rèn)擴(kuò)增的特異性和大小,通過比較擴(kuò)增產(chǎn)物的條帶強(qiáng)度及位置,確認(rèn)上調(diào)和下調(diào)基因的表達(dá)差異。