能抗多種細菌，而且可以抑殺真菌、病毒等，可用于轉(zhuǎn)化農(nóng)作物、培養(yǎng)抗病品種，因 而在植物育種基因工程領域中具有廣闊的應用前景。首先在模式植物煙草與馬鈴薯抗青枯 病研宄中獲得成功，隨后在水稻白葉枯病菌和細條病菌蘋果的梨火疫病，菊花、辣椒、茄子 等作物的細菌、真菌病研宄中均取得了一定效果。將蘿卜抗菌肽基因（AFP)轉(zhuǎn)基因到馬鈴 薯中可獲得晚疫病抗性等（任玉霞，陳凌娜，陳繼峰，陳正華，馬鈴薯轉(zhuǎn)蘿卜抗菌肽基因植 株的獲得及抗晚疫病的初步鑒定，中國蔬菜2012 ￠) :68-73)。
[0010] 植物源抗菌肽都有廣譜抗真菌或細菌活性，在一種植物中發(fā)現(xiàn)的抗菌肽可以有效 的應用到其他多種植物中，如蘿卜中來源的抗菌肽能夠通過轉(zhuǎn)基因的方法轉(zhuǎn)到野罌粟、馬 鈴薯和小麥中分別達到抗馬鈴薯晚疫病和小麥鐮刀菌的效果（魏玉杰，張梅秀，常瑛， 雒淑珍，陳凌娜，野罌粟花粉介導法轉(zhuǎn)蘿卜抗菌肽基因方法研宄，甘肅農(nóng)業(yè)科技2009(11): 6-9;任玉霞，陳凌娜，陳繼峰，陳正華，馬鈴薯轉(zhuǎn)蘿卜抗菌肽基因植株的獲得及抗晚疫病的 初步鑒定，中國蔬菜 2012(6) :68-73 ;Zhao Li，Miaoping Zhou，Zengyan，ZhangLi，juan Ren，Lipu Du，Boqiao Zhang,Huijun Xu,Zhiyong Xin,Expression of a radish defensin in tra nsgenic wheat confers increased resistance to Fusarium graminearum and Rhizoctonia cerea Iis Funct Integr Genomics 2011,11:63 - 70)?？咕淖鳛樾屡d抗 病基因資源，對改良水稻、大豆、棉花、油菜等作物對真菌病害的抗性有著重要意義。
[0011] 抗菌肽因其獨特的抗菌機理，廣譜的抗菌性以及不易產(chǎn)生耐藥性等特點，在各行 各業(yè)中都有良好的應用前景，因此也已經(jīng)受到越來多的關注，成為前沿領域的研宄熱點 (Hancock REff, Chappie DS，Peptide Antibiotics. Antimicrob Agent Chemother，1999， 43(6) :1317-1323)。但是，目前植物來源的抗菌肽還很難真正應用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實踐中。主 要是因為目前鑒定的有功能的植物來源抗菌肽數(shù)量很少，從而在很大程度上限制了植物抗 菌肽的應用。抗菌肽數(shù)據(jù)庫中經(jīng)過驗證的抗菌肽基因目前達到1600多個，而植物抗菌肽 僅有不到300個（htt p://ercbinfol.ucd. ie/APFOb/)。被鑒定的植物來源抗菌肽基因 數(shù)量少的主要原因如下：1、抗菌肽基因相對比較小，容易降解，且含量低，難以檢測和鑒定； 2、抗菌肽分子量小，分離純化困難，提取步驟煩瑣、得率低；3、體外表達純化困難，導致難以 開展體外抑菌活性檢測來驗證功能；4、缺乏高效的預測篩選方法；5、抗菌肽化學合成成本 高，價格昂貴。如何高效的預測具有功能的新植物抗菌肽，實現(xiàn)其水平表達并降低成本成為 目前抗菌肽研宄與應用的瓶頸。
[0012] 由本發(fā)明申請人中國農(nóng)業(yè)科學院油料作物研宄所負責、中國農(nóng)科院蔬菜所、深圳 華大基因研宄院、華中農(nóng)業(yè)大學、湖南大學、西南農(nóng)業(yè)大學、江蘇農(nóng)科院、四川農(nóng)科院、青海 大學，并吸收英、澳、美、法等國相關研宄機構科研人員合作完成了甘藍和油菜的全基因組 測序和分析，甘藍和油菜基因組部分結(jié)果論文已發(fā)表（Shengyi Liu, Yumei Liu, Xinhua Yang,Ch aobo Tong,David Edwards, Isobel A.P.Parkin, Meixia Zhao, Jianxin Maj Jingyin Yu，Shu nmou Huang, Xiyin Wang, Junyi Wang, Kun Lu, Zhiyuan Fang, Ian Bancroft，Tae-Jin Yan g，Qiong Huj XinfaWangj Zhen Yue，Haojie Li,Linfeng Yang,Jian Wuj Qing Zhou,Wa nxin Wang, Graham J.King, J. Chris Piresj Changxin Lu, ZhangyanWuj Perumal Sampathj ZhuoWangj Hui Guo, Shengkai Pan,Limei Yang, Jiumeng Min，Dong Zhang,Dianchuan J in, Wanshun Li, Harry Belcramj Jinxing Tuj Mei Guanj Cunkou Qi18,Dezhi Dulj Jiana Li,Liangcai Jiang,Jacqueline Batleyj Andrew G.Sharpe, Beom-Seok Park,Pradeep Ruperaoj Feng Cheng, Nomar Espinosa Waminal Yin Huang, Caihua Dong,LiWangj Jingping Li, Z hiyong Huj Mu Zhuangj Yi Huang, Junyan Huang, Jiaqin Shi，Desheng Meij Jing Liuj T ae_Ho Lee, Jinpeng Wang, Huizhe Jinj Zaiyun Li,Xun Li, Jiefu Zhang,Lu Xiao, Yongmi ng Zhou, Zhongsong Liu，Xuequn Liuj Rui Qinj Xu Tang, Wenbin Liuj YupengWangj Yang yong Zhang, Jonghoon Lee, Hyun Hee Kim，F(xiàn)rance Denoeudj Xun Xu，Xinming Liang, Wei Huaj Xiaowu Wang,Jun Wang,Boulos Chalhoub&Andrew H. Paterson.The Bras sica oleracea genome reveals the asymmetrical evolution of polyploid genomes. 2014. Natu re Communication.5:3930. ；Chalhoub B，Denoeud F，Liu S，Parkin IA，Tang H5,Wang X，Chiquet Jj etc.Plant genetics.Early allopolyploid evolution in the post-Neolithic Brassic a napus oilseed genome. Science. 2014, 22 ； 345(6199) :950-3.)。白菜、甘藍以及甘藍型油菜全基因組測序信息已經(jīng)建立可供申請人 查詢的數(shù)據(jù)庫 http: //www. ocri-genomicls. org/bolbase (C heng F，Liu S，Wu J，F(xiàn)ang L，Sun S，Liu B，Li Pj Hua Wj Wang X: BRAD, the genetic s and genomics database for brassica plants. BMC Plant Biol, 2011, 11:136 ； Jingyin Yuj Meixia Zhao, Xiaowu Wang, Chaobo Tong,Shunmou Huang, Sadia Tehrimj Yumei Liuj We i Hua and Shengyi Liu. Bolbase: a comprehensive genomics database for Brassica oleracea.BMC Genomics，2013, 14:664)。通過使用生物信息學分析手段，利用上述資源，可進行基因的預 測和分析，獲得大批量的與已知抗菌肽有類似序列結(jié)構特征的預選基因，從中篩選感興趣 的基因，是快速發(fā)掘基因的一個捷徑。而抗菌肽本身基因長度小，可以利用PCR人工合成技 術，低成本快速合成，不需要cDNA序列做模板進行克隆等工作，可以大大加快獲得抗菌肽 的速度并且降低研宄難度。
[0013] 申請人利用甘藍型油菜組織轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)，開發(fā)出一個預測分析潛在新抗菌肽 基因的方法，獲得抗菌肽新基因 BnLTPl。該基因是屬于轉(zhuǎn)脂蛋白類抗菌肽（LTPs)，這類抗 菌肽序列結(jié)構中含有偶數(shù)個半胱氨酸，能夠形成分子內(nèi)二硫鍵，從而起到穩(wěn)定抗菌肽結(jié)構 的作用，LTP在植物防御機制中起重要作用，它能被病原菌誘導而過量表達，并能抑制病原 菌的生長和誘導植物系統(tǒng)抗性的產(chǎn)生（謝萬欽，王喆，李翠鳳，植物轉(zhuǎn)脂蛋白的抗病機制研 宄進展，自然科學進展。2006, 16(8) :928-932)，實驗表明它既有抗細菌活性也具有抗真菌 活性。結(jié)合基因工程方法和利用一個新型具有自剪切功能的抗菌肽體外表達載體pET30a/ His-EDD IE-GFP (Tao Ke, Su Liang, Jin Huang, Han Mao, Jibao Chen, Caihua Dong, Junyan Huan g, Shengyi Liu, Jianxiong Kang, Dongqi Liu, Xiangdong Ma, A novel PCR-based method for high throughput prokaryotic expression of antimicrobial peptide genes. BMC Biotechno I 2012,12:10.)，本研宄實現(xiàn)了 BnLTPl在大腸桿菌中的融合表達、 復性、自剪切和純化，獲得了具有生物活性的BnLTPl蛋白產(chǎn)物。用管碟法（蔣惠嵐.管碟法 測定抗生素效價的影響因素及控制方法.中國獸藥雜志.2011，（08) 23-36)，以大腸桿菌、 藤黃八疊球菌為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的標準菌株，以酵母菌作為真菌的指示菌對 純化的BnLTPl蛋白開展抑菌活性檢測，發(fā)現(xiàn)BnLTPl基因能有效抑制細菌（大腸桿菌