Myl4基因突變體及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及MYL4基因突變體及其應(yīng)用。具體地，本發(fā)明涉及分離編碼MYL4突變 體的核酸，分離的多肽，篩選易患心房靜止的生物樣品的方法，篩選易患心房靜止的生物樣 品的系統(tǒng)，用于篩選易患心房靜止的生物樣品的試劑盒，構(gòu)建體以及重組細(xì)胞。
【背景技術(shù)】
[0002] 心房靜止（atrial standstill，AS)是一種非常罕見(jiàn)的心律失常，是指竇性停搏合 并房性停搏，且不伴有逆行性心房傳導(dǎo)的交界性或室性節(jié)律，表現(xiàn)為心房電活動(dòng)和機(jī)械活 動(dòng)的喪失。心電圖上表現(xiàn)為心動(dòng)過(guò)緩，P波消失或交接性逸搏。目前已經(jīng)報(bào)道了不同形式 的心律失常。例如持續(xù)性或暫時(shí)性的心房靜止，以及整個(gè)心房和部分心房靜止。在大多數(shù) 的報(bào)道中，心房靜止往往是繼發(fā)于其它臨床疾病，如Ebstein's畸形，Emery-Dreifuss肌營(yíng) 養(yǎng)不良癥（X-連鎖)，Kugelberg-Welander綜合癥(常染色體隱性遺傳)，糖尿病或淀粉樣變 性。
[0003] 目前AS的基因?qū)W方面的研究較少，其致病相關(guān)機(jī)制仍不明確。因而，目前對(duì)心房 靜止尤其是其致病基因的研究仍有待深入。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的 在于提出一種能夠有效篩選易患心房靜止的生物樣品的方法。
[0005] 本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列工作完成的：發(fā)明人通過(guò)外顯子組測(cè)序、連鎖分析聯(lián) 合Sanger測(cè)序驗(yàn)證的方法確定了心房靜止的一個(gè)新的致病突變--MYL4基因的c. 31G>A 突變。此外，本發(fā)明的完成還依賴于發(fā)明人發(fā)掘的一個(gè)大的AS家系。已知AS家系是探討 AS (即心房靜止)相關(guān)突變基因的最好模型，但家族性AS比較罕見(jiàn)。目前為止，只有少數(shù)的 幾個(gè)原發(fā)性心房靜止的家系被報(bào)道，而且每個(gè)家系的患者都非常少(兩到三個(gè))，而且局限 在一代或兩代，通過(guò)分析這種家系發(fā)現(xiàn)AS的致病基因困難較大。而本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的AS家系有 6個(gè)患者，并且沒(méi)有任何人有結(jié)構(gòu)性心臟病及全身性疾病的表現(xiàn)，非常適于進(jìn)行致病基因挖 掘。
[0006] 進(jìn)而，根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼MYL4突變體的核 酸。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述核酸與SEQ ID NO :1相比，具有c.31G>A突變，即相對(duì)于野 生型MYL4基因，本發(fā)明的MYL4基因突變體的cDNA第31位堿基G突變?yōu)锳。根據(jù)本發(fā)明的 實(shí)施例，發(fā)明人確定了 MYL4基因的突變體，該突變體與心房靜止的發(fā)病密切相關(guān)，從而通 過(guò)檢測(cè)該突變體在生物樣品中是否存在，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易患心房靜止。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種分離的多肽。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，與 SEQID NO :2相比，所述分離的多肽具有p. GlullLys突變，即該突變是由于c. 31G>A突變而 引起的，具體地，相對(duì)于野生型MYL4,本發(fā)明的分離的多肽（即MYL4突變體)第11位氨基酸 由Glu突變?yōu)長(zhǎng)ys。通過(guò)檢測(cè)生物樣品中是否表達(dá)該多肽，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易 患心房靜止。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種篩選易患心房靜止的生物樣品的方 法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括以下步驟：從所述生物樣品提取核酸樣本；確定所述 核酸樣本的核酸序列；所述核酸樣本的核酸序列與SEQ ID NO :1相比，具有c.31G>A突變是 所述生物樣品易患心房靜止的指示。通過(guò)根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易患心房靜止的生物樣 品的方法，可以有效地篩選易患心房靜止的生物樣品。
[0009] 根據(jù)本發(fā)明的第四方面，本發(fā)明提出了一種篩選易患心房靜止的生物樣品的系 統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該系統(tǒng)包括：核酸提取裝置，所述核酸提取裝置用于從所述生物 樣品提取核酸樣本；核酸序列確定裝置，所述核酸序列確定裝置與所述核酸提取裝置相連， 用于對(duì)所述核酸樣本進(jìn)行分析，以便確定所述核酸樣本的核酸序列；判斷裝置，所述判斷裝 置與所述核酸序列確定裝置相連，以便基于所述核酸樣本的核酸序列與SEQ ID NO :1相比， 是否具有c. 31G>A突變，判斷所述生物樣品是否易患心房靜止。利用該系統(tǒng)，能夠有效地實(shí) 施前述篩選易患心房靜止的生物樣品的方法，從而可以有效地篩選易患心房靜止的生物樣 品。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的第五方面，本發(fā)明提出了一種用于篩選易患心房靜止的生物樣品的 試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該試劑盒含有：適于檢測(cè)MYL4基因突變體的試劑，其中與 SEQID NO :1相比，該MYL4基因突變體具有c. 31G>A突變。利用根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例的試 劑盒，能夠有效地篩選易患心房靜止的生物樣品。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的第六方面，本發(fā)明還提出了一種構(gòu)建體。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該構(gòu) 建體包含前面所述的分離的編碼MYL4突變體的核酸。由此，利用本發(fā)明的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體 細(xì)胞獲得的重組細(xì)胞，能夠有效地用于篩選治療心房靜止的藥物。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的第七方面，本發(fā)明還提出了一種重組細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該 重組細(xì)胞是通過(guò)前面所述的構(gòu)建體轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞而獲得的。根據(jù)本發(fā)明的一些實(shí)施例，利 用本發(fā)明的重組細(xì)胞，能夠有效地篩選治療心房靜止的藥物。
[0013] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中 ：
[0015] 圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易患心房靜止的生物樣品的系統(tǒng)及其組成 部分的示意圖，其中，
[0016] 圖II為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的篩選易患心房靜止的生物樣品的系統(tǒng)的示意圖，
[0017] 圖III為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸提取裝置的示意圖，
[0018] 圖IIII為根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的核酸序列確定裝置的示意圖；
[0019] 圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的AS患者家系的家系圖；
[0020] 圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例，圖2所示AS患者家系中先證者17,患者IIl 及113的心電圖，
[0021] 圖31為先證者17的心電圖，
[0022] 圖311為患者III的心電圖，
[0023] 圖3III為113的心電圖；
[0024] 圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，圖2所示AS患者家系的連鎖分析結(jié)果；
[0025] 圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，圖2所示AS患者家系中先證者和家系內(nèi)正 常人，以及家系外正常對(duì)照的MYL4基因 c. 31G>A突變位點(diǎn)的代表性Sanger測(cè)序驗(yàn)證峰圖；
[0026] 圖6-9顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，本發(fā)明的MYL4基因的c. 31G>A突變對(duì)氨 基酸及蛋白功能的影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終 相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過(guò)參考附 圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0028] MYL4基因突變體
[0029] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種分離的編碼MYL4突變體的核酸。根據(jù) 本發(fā)明的實(shí)施例，所述核酸與SEQ ID NO :1相比，具有c.31G>A突變。在本文中所使用的表 達(dá)方式"編碼MYL4突變體的核酸"，是指與編碼MYL4突變體的基因相對(duì)應(yīng)的核酸物質(zhì)，即 核酸的類型不受特別限制，可以是任何包含與MYL4突變體的編碼基因相對(duì)應(yīng)的脫氧核糖 核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)具 體示例，前面所述的編碼MYL4突變體的核酸為DNA。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，發(fā)明人確定了 MYL4基因的突變體，該突變體與心房靜止的發(fā)病密切相關(guān)，從而通過(guò)檢測(cè)該突變體在生物 樣品中是否存在，可以有效地檢測(cè)生物樣品是否易患心房靜止，也可以通過(guò)檢測(cè)該突變體 在生物體中是否存在，可以有效地預(yù)測(cè)生物體是否易患心房靜止。
[0030] 對(duì)于本發(fā)明說(shuō)明書和權(quán)利要求書中，提及核酸，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，實(shí)際包 括互補(bǔ)雙鏈的任意一條，或者兩條。為了方便，在本說(shuō)明書和權(quán)利要求書中，雖然多數(shù)情況 下只給出了一條鏈，但實(shí)際上也公開(kāi)了與之互補(bǔ)的另一條鏈。例如，提及SEQ ID NO :1，實(shí)際 包括其互補(bǔ)序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以理解，利用一條鏈可以檢測(cè)另一條鏈，反之亦然。
[0031] 該編碼MYL4突變體的核酸，是本申請(qǐng)的發(fā)明人通過(guò)外顯子組測(cè)序、連鎖分析聯(lián)合 Sanger測(cè)序驗(yàn)證的方法確定的心房靜止的致病基因 MYL4的新的致病突變。該致病突變位 點(diǎn)在現(xiàn)有技術(shù)中并未被提到。
[0032] 其中，野生型MYL4基因的cDNA具有如下所示的核苷酸序列：
[0033] CTCTCTGGCTGCTCCGGCATATTTGAGAAGGTCTGTTTCCCTGGTCCTTCTGGGTTTCCACCAATTGGC AAGAAGGGATCAGCCTGTCCTAGAGATCACTCCTCTGCCAAAGATCCCAACAAGACAACATGGCTCCCAAGAAGCCT GAGCCTAAGAAGGAGGCAGCCAAGCCAGCTCCAGCTCCAGCTCCAGCCCCTGCACCAGCCCCTGCCCCAGCTCCTGA GGCTCCCAAGGAACCTGCCTTTGACCCCAAGAGTGTAAAGATAGACTTCACTGCC