氨酸。
[0022]高分子兩親性嵌段共聚物經(jīng)過超聲乳化的方式包覆疏水性藥物，制備方法如下:將5?10份的共聚物與I份的疏水性藥物共溶于I體積的二氯甲烷和氯仿10:1的混合溶液中，取0.5體積的純水作為內(nèi)水相，在水浴超聲條件下滴加到此混合溶劑中形成初乳溶液，而后將初乳體系在超聲作用下于冰浴中滴加到2.5?10體積的水中，形成水/油/水(W/0/W)復合體系，攪拌揮發(fā)除去有機相得到混合液體，然后將該混合液裝入MWCO 14 KDa的透析袋中在pH為7?8的水中透析I至3天收集得到載藥納米粒子；對于酸敏感藥物(例如鹽酸阿霉素，可簡寫為D0X)需在溶解時加I體積三乙胺保證其疏水性。
[0023]高分子兩親性嵌段共聚物經(jīng)過超聲乳化形成納米粒子時可同時負載質(zhì)粒DNA與藥物，制備方法如下:將5?10份共聚物與I份的疏水性藥物共溶于I體積的二氯甲烷和氯仿10:1的混合溶液中，取含有質(zhì)粒DNA為0.01-2g (N/P比從I?70之間，計算得到的DNA質(zhì)量)的0.5體積的純水作為內(nèi)水相，在水浴超聲條件下滴加到此混合溶劑中形成初乳溶液，而后將初乳體系在超聲作用下于冰浴中滴加到2.5?10體積的水中，形成水/油/水(W/0/W)復合體系，攪拌揮發(fā)除去有機相得到混合液體，然后將該混合液裝入MWCO 14KDa的透析袋中在pH為7?8的水中透析I至3天收集得到載藥納米粒子；對于酸敏感藥物需在溶解時加I體積三乙胺保證其疏水性。
[0024]本發(fā)明的優(yōu)點在于:
1.本發(fā)明高分子兩親性嵌段共聚物可在中性或弱堿性水中通過超聲乳化的方式形成納米粒子，并在此過程中負載藥物和質(zhì)粒DNA。反應性酸敏內(nèi)核在酸性條件下迅速由疏水性變?yōu)橛H水性，快速釋放藥物和DNA，提高藥物的生物利用度，達到高效治療的目的。
[0025]2.本發(fā)明兩親性嵌段聚合物載體材料是對可生物降解的天然葡聚糖與天冬氨酸進行修飾制得，在酸性條件下的最終水解產(chǎn)物為葡聚糖、微量丙酮及甲醇、氨基酸，無毒且具有優(yōu)良的生物相容性。
[0026]3.本發(fā)明可降解的酸敏感兩親性嵌段聚物載體材料的水解時間可隨著縮醛化反應時間的長短而定，從而達到對水解時間的控制，進而控制藥物的釋放時間。
[0027]4.本發(fā)明可降解的酸敏感兩親性嵌段聚合物載體材料能夠通過雙乳化的方式在水中形成納米粒子，既可以單獨包載疏水性藥物，而且可以聯(lián)合負載藥物和質(zhì)粒DNA，通過聯(lián)合傳輸治療基因與化療藥物，有望達到基因治療與腫瘤化療協(xié)同治療的效果，改進目前單一治療手段的不足。
[0028]5.本發(fā)明可降解的酸敏感兩親性嵌段聚合物載體材料是將藥物與質(zhì)粒DNA包覆于載體材料其中，而非化學鍵銜接，維持了藥物與質(zhì)粒DNA的活性以及療效。
[0029]6.本發(fā)明可降解的酸敏感兩親性嵌段聚合物載體材所形成的的納米結(jié)構(gòu)，在酸性條件下可以發(fā)生親疏水性能的改變，引起酸敏激發(fā)的DNA和藥物快速釋放，實現(xiàn)對藥物的智能控釋。
[0030]7.本發(fā)明的可降解的酸敏感高分子兩親性嵌段聚物載體材料還可以通過在胺解過程中引入靶向配體來實現(xiàn)藥物與質(zhì)粒DNA的定點靶向釋放。
【附圖說明】
[0031]由下面的實施例對于其進行【附圖說明】，必要的圖譜放一些即可。
[0032]圖1為縮醛化葡聚糖-二乙烯三胺接枝聚天冬氨酸共聚物(可簡寫為AC-DEX-PAsp (DET) -CD)在 DMSO-成的氫譜圖。
[0033]圖2為AC-DEX-PAsp (DET) -CD在重水中的氫譜圖。
[0034]圖3為實施例2.2中AC-DEX-PAsp (DET)-CD，其中所用葡聚糖分子量為5000g/mol，聚天冬氨酸的分子量約為3602g/mol，17個重復單元中全部接入二乙烯三胺DETA基團)載藥納米粒子在水溶液中的粒徑分布圖A(即動態(tài)光散射柱狀圖)和透射電子顯微鏡圖片B。
[0035]圖4為AC-DEX-PAsp (DET) -CD陽離子酸敏感聚合物與質(zhì)粒DNA在不同N/P下的瓊脂糖凝膠圖示。
[0036]圖5為AC-DEX-PAsp (DET) -CD陽離子酸敏感聚合物與質(zhì)粒DNA在不同N/P下的復合物在馬爾文納米粒度及電位分析儀中的電位與粒徑變化趨勢圖示。
[0037]圖6為AC-DEX-PAsp (DET) -CD陽離子酸敏感聚合物與質(zhì)粒DNA在N/P=42下的復合物在水溶液中的粒徑分布圖A (即動態(tài)光散射柱狀圖)和透射電子顯微鏡圖片B。
[0038]圖7為AC-DEX-PAsp (DET)-⑶陽離子酸敏感聚合物形成的載藥納米粒子A與雙載納米粒子B在pH5.0和pH7.4兩個不同pH值下熒光分光光度計檢測DOX的酸敏釋放行為。
[0039]圖8為AC-DEX-PAsp (DET)-⑶陽離子酸敏感聚合物形成的載藥納米粒子A與雙載納米粒子B在pH5.0和pH7.4兩個不同pH值下DOX的體外釋放曲線。
【具體實施方式】
[0040]下面結(jié)合附圖和具體實施例進一步詳細說明本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、設備和方法為本技術(shù)領域常規(guī)市購的試劑、設備和常規(guī)使用的方法。
[0041]本發(fā)明提供了可生物降解的酸敏感聚合物的制備，以及負載藥物與聯(lián)合負載基因和藥物的制備方法。通過IH NMR、GPC和傅里葉紅外光譜對該新型聚合物載體的組成和結(jié)構(gòu)進行化學表征。采用雙乳化法制備納米粒子，用馬爾文粒度儀及透射電鏡對粒子的粒徑、表面電位及形貌進行判定。熒光分光光度計與紫外分光光度計測定載有模型藥物阿霉素的酸敏釋放行為。
[0042]實施例1:可生物降解的酸敏感兩親性嵌段共聚物的制備
1.1 L-型天冬氨酸芐酯的N-羧酸酐的制備:
將L-天冬氨酸芐酯(5.7 g)真空干燥至少2小時后，加入200 mL的乙酸乙酯，于90°C下加熱回流0.5 h。另稱取三光氣固體(2.93 g)用60 mL的乙酸乙酯溶解，然后將溶液緩慢滴加至L-天冬氨酸卞酯的溶液中，充分攪拌直至澄清。所有操作均在干燥氬氣的保護下進行。停止加熱，在500 mL的分液漏斗中用飽和的碳酸氫鈉溶液洗2~3次以除去過量的三光氣，加入飽和的氯化鈉破乳，使溶液變得澄清。將反應液倒入裝有無水硫酸鎂的500 mL的錐形瓶中，干燥進行半小時以上除水，干燥完畢，過濾，濃縮至100 mL0將得到反應液倒入過量的無水石油醚中，充分搖振至有結(jié)晶析出，再于低溫下冷凍靜置兩天，經(jīng)抽濾和多次洗滌得白色針狀結(jié)晶。所得產(chǎn)品真空干燥后充干燥氬氣冷凍保存。
[0043]1.2端疊氮聚天冬氨酸卞酯的制備:
在無水無氧條件下稱取天冬氨酸-NCA (12 mmol)于Schlenk瓶中，加入40 mL的N, N二甲基甲酰胺攪拌使其溶解，10 min之后在氬氣氛下加入端疊氮的丙胺(0.4 mmol),40°C下攪拌反應，72 h之后沉于乙醚，過濾，收集沉淀，真空干燥得到樣品。
[0044]1.3縮醛化葡聚糖的制備:
稱取葡聚糖(3 g)于50°C條件下溶于150 mL的醋酸緩沖溶液，待反應液變?yōu)橥耆该髦螅来渭尤氡舶?3.3 g)和氰基硼氫化