所述引物由以下序列定義：
[0050] CGGGGAACACTACAGGAAAGAA(SEQ ID NO:22)
[0051] GGCGGAATACAGGACGGGTGG(SEQ ID NO:23),
[0052] 其中針對(duì)所述引物組的擴(kuò)增產(chǎn)物的存在表示EHEC 0121: [H19]的存在；和
[0053] e)用于檢測(cè)EHEC 0103: [H2]和/或EHEC 045: [H2]的引物，其中所述引物由以下 組成：
[0054] -靶向CRISPR序列SEQ ID N0:8的引物組，其中所述引物由以下序列定義：
[0055] GAGTCTATCAGCGACACTACC(SEQ ID NO:24)
[0056] AACCGCAGCTCGCAGCGC(SEQ ID NO:25),
[0057] 其中針對(duì)所述引物組的擴(kuò)增產(chǎn)物的存在表示EHEC 0103: [H2]和/或EHEC 045: [H2]的存在；和
[0058] f)用于檢測(cè)EHEC 0104: [H4]的引物，其中所述引物由以下組成：
[0059] -靶向CRISPR序列SEQ ID NO:9的引物組，其中所述引物由以下序列定義：
[0060] GGAACTCACCGAGCGCCG(SEQ ID NO:26)；
[0061] GCCTTTGCAGCGTCTTTCCGATC(SEQ ID NO:27)；
[0062] 其中針對(duì)所述引物組的擴(kuò)增產(chǎn)物的存在表示EHEC 0104: [H4]的存在；和
[0063] g)用于檢測(cè)EHEC 026: [H11]的引物，其中所述引物由以下組成：
[0064] -靶向CRISPR序列SEQ ID NO: 10的兩個(gè)引物組，其中第一引物組由以下序列定 義：
[0065] ACAATCGTGTGTAAATTCGCGG(SEQ ID NO:28)
[0066] GATAAACCGTGGTACGGAACA(SEQ ID N0:29)和第二引物組由以下序列定義：
[0067] TGAAACCACTCGCGGCAGAT(SEQ ID NO:30)；
[0068] ATAAACCGATCTCCTCATCCTC(SEQ ID NO:31)；
[0069] 其中針對(duì)所述引物組的至少之一的擴(kuò)增產(chǎn)物的存在表示EHEC 026: [H11]的存在。
[0070] 擴(kuò)增產(chǎn)物可以通過(guò)用于檢測(cè)PCR產(chǎn)物的任何合適的方法進(jìn)行檢測(cè)。例如，它們可 以通過(guò)衍生自各自靶序列的探針的方式進(jìn)行檢測(cè)。
[0071] 優(yōu)選的探針的例子給出如下：
[0072] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定 義：CGATCAATCCGAATATGAGCGGT(SEQIDN0:32)，和允許檢測(cè)衍生自SEQIDN0:3的擴(kuò)增產(chǎn) 物的探針，由以下序列定義：CACTGTTTTGGTGACGGTTTATCC(SEQ ID N0:33)，和/或允許檢測(cè) 衍生自SEQ ID N0:4的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：ACAAAAACTGTCACCAAAGTGTTC(SEQ ID NO:34)；
[0073] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO:5的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0074] TGGGGCCTCTTTTGTACCCGG(SEQ ID NO:35)；
[0075] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO:6的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0076] TGTAATGGCTCACCGGTTTATCCCC(SEQ ID NO:36)；
[0077] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO:7的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0078] TCCGCCAACGGCGACAGGGG(SEQ ID NO:37)；
[0079] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO:8的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0080] TCGGAACGTGGCGCTATAGGTG(SEQ ID NO:38)；
[0081] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID N0:9的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0082] CTGGGAGGCGTATCTCACGTTCGGT(SEQ ID NO:39)；
[0083] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO: 10的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0084] TGCTGTCTATATTTCGACCAGTGTTCC(SEQ ID NO:40)；
[0085] -允許檢測(cè)衍生自SEQ ID NO: 10的擴(kuò)增產(chǎn)物的探針，由以下序列定義：
[0086] CCAGCTACCGACAGTAGTGTGTTCC(SEQ ID NO:41)；
[0087] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，它提供一種用于預(yù)測(cè)樣品是否含有典型的腸出血性大 腸桿菌（EHEC)，（其在本文中定義為針對(duì)stx和eae均為陽(yáng)性的大腸桿菌株），和/或非典 型的EHEC 0104:H4(其測(cè)試針對(duì)stx陽(yáng)性并且針對(duì)eae陰性）。典型的EHEC株尤其包括 EHEC 0157: H7、0145: H28、0103: H2、0111: H8、0121: H19、026: Hll 和 045: H2 血清型和它們 的無(wú)運(yùn)動(dòng)性衍生物。
[0088] 所述方法包括espK基因和以下靶基因的一個(gè)或多個(gè)的檢測(cè)：espV、ureD、Z2098、 Z1151、Z1153、Z1154、Z1155、Z1156 和 Z6065。
[0089] 這些大腸桿菌基因靶標(biāo)對(duì)應(yīng)于非LEE編碼的III型效應(yīng)子，所述效應(yīng)子衍生自各 種基因組 O 島：〇1-43、01-44、01-50、01-57 和 01-71。
[0090] espK 與 espV、ureD、Z2098、Z1151、Z1153、Z1154、Z1155 和 Z1156 的一個(gè)或多個(gè) 的組合，是由本發(fā)明人在幾種推定的毒力標(biāo)記的組合中鑒定出來(lái)的，作為典型的EHEC(stx 和eae陽(yáng)性大腸桿菌株），并且特別是血清型EHEC 0157: [H7]、0145: [H28]、0103: [H2]、 0111 :[H8]、0121 :[H19]、026: [HI 1]或 045: [H2]的 EHEC 株的存在的更好的預(yù)測(cè)。espK 與 Z6065的組合可預(yù)測(cè)非典型EHEC 0104: H4的存在。
[0091] 特別優(yōu)選的組合如下：
[0092] -espK 與 espV、ureD、Z2098 的一個(gè)或多個(gè)；
[0093] -espK 與 Z6065 ;
[0094] -espK 與 espV、ureD、Z2098 的一個(gè)或多個(gè)和與 Z6065。
[0095] 根據(jù)特定的實(shí)施方案，所述方法包括用包括衍生自espK的引物組和衍生自espV、 ureD、Z2098、Z1151、Z1153、Z1154、Z1155、Z1156 和 Z6065 至少之一的引物組的引物的組合， 對(duì)所述樣品或由其分離的DNA進(jìn)行PCR測(cè)定；
[0096] 和檢測(cè)針對(duì)所述組合的每個(gè)引物組的擴(kuò)增產(chǎn)物的存在或不存在。
[0097] 根據(jù)該方法的優(yōu)選的實(shí)施方案，所述引物的組合進(jìn)一步包括衍生自Stxl的引物 組和衍生自stx2的引物組。這允許針對(duì)兩個(gè)stx基因（作為STEC的標(biāo)記）和針對(duì)上面所 列的額外的遺傳標(biāo)記（與和HC和HUS的爆發(fā)和偶發(fā)事件有關(guān)的優(yōu)先級(jí)STEC血清型相關(guān)） 篩選樣品。
[0098] 與現(xiàn)有技術(shù)的方法相反，本發(fā)明的方法不必檢測(cè)eae基因。
[0099] 衍生自 espK、espV、ureD、Z2098、Z1151、Z1153、Z1154、Z1155、Z1156、Z6065、stxl 或stx2和適合用于本發(fā)明的PCR測(cè)定的引物，以及允許檢測(cè)由這些引物獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物的 探針，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員基于數(shù)據(jù)庫(kù)中可用的這些基因的序列，例如在GenBank中登 錄號(hào)AE005174. 2下可用的大腸桿菌0157:H7 (株EDL933)的注釋序列內(nèi)簡(jiǎn)單地設(shè)計(jì)出來(lái)。 [0100] 用于該P(yáng)CR測(cè)定的優(yōu)選的引物組的非限制性的例子給出如下：
[0101] -靶向espK的引物組，由以下序列定義：
[0102] GCAGRCATCAAAAGCGAAATCACACC(SEQ ID NO:42)
[0103] TCGTTTGGTAACTGTGGCAGATACTC(SEQ ID NO:43)
[0104] -靶向espV的引物組，由以下序列定義：
[0105] TCAGGTTCCTCGTCTGATGCCGC(SEQ ID NO:44)
[0106] CTGGTTCAGGCCTGGAGCAGTCC(SEQ ID NO:45)
[0107] -靶向ureD的引物組，由以下序列定義：
[0108] GCAATAATTGACTCTGATTGCC(SEQ ID NO:46)
[0109] GCTGCTGCGGTAAAATTTACT(SEQ ID NO:47)
[0110] -靶向Z2098的引物組，由以下序列定義：
[0111] CTGAAAAGAGCCAGAACGTGC(SEQ ID NO:48)
[0112] TGCCTAAGATCATTACCCGGAC(SEQ ID NO:49)
[0113] -靶向Z1153的引物組，由以下序列定義：
[0114] CGATCATTGTGGGCATGTTATGCC(SEQ ID NO:50)
[0115] CCTGAATTCACACGGTGATGCG(SEQ ID NO:51)
[0116] -靶向Z1154的引物組，由以下序列定義：
[0117] GCCTTTTTATGTTCATTATTGCGGTTG(SEQ ID NO:52)
[0118] GTATAGTTTTAGCAATACCTTCCTGC(SEQ ID NO:53)
[0119] -靶向Z1155的引物組，由以下序列定義：
[0120] GATTGTGGCGATTAATGGGGG(SEQ ID NO:54)
[0121] ACACCGATCTGGTCATTGGCG(SEQ ID NO:55)
[0122] -靶向Z1156的引物組，由以下序列定義：
[0123] AAACGCCTTTAAAATCTGCGTCT(SEQ ID NO:56)
[0124] TGCCGTGCGCACAGTCATAAG(SEQ ID NO:57)
[0125] -靶向Z1151的引物組，由以下序列定義：
[0126] GCCCATGGCTCCACATCCTG(SEQ ID NO:58)
[0127] CCAAAAAAGTTATGATGATTGCACTG(SEQ ID NO:59)
[0128] -靶向Z6065的引物組，由以下序列定義：
[0129] GCACTGGCCCTTGTTGCTCAGGC(SEQ I