結(jié)合分子和免疫偶聯(lián)物 可以通過常規(guī)肽合成器或在無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)中使用來源于根據(jù)本發(fā)明的DNA分子的RNA核 酸合成地產(chǎn)生。如通過上述合成生產(chǎn)方法或無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)可獲得的結(jié)合分子和免疫偶聯(lián) 物也是本發(fā)明的一部分。
[0100] 在又另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的結(jié)合分子還可以在轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動物（尤其 諸如兔、山羊或母牛）中產(chǎn)生，并且分泌到例如其乳汁中。
[0101] 在又另一個(gè)替代性實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合分子可以由表達(dá)人類免疫球蛋白 基因的轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動物（諸如例如轉(zhuǎn)基因小鼠或兔）產(chǎn)生。優(yōu)選地，轉(zhuǎn)基因非人類 哺乳動物具有一種基因組，包含一種人類重鏈轉(zhuǎn)基因和一種人類輕鏈轉(zhuǎn)基因，編碼如上文 所描述的人類結(jié)合分子的全部或一部分。轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動物可以用B型肝炎病毒的一 種被純化或富集的制劑、HBsAg或其一種片段進(jìn)行免疫。用于免疫非人類哺乳動物的方案在 本領(lǐng)域中是明確的。參看使用《抗體：實(shí)驗(yàn)室手冊》，E.哈洛，D.萊恩編（1998)，冷泉港實(shí)驗(yàn) 室，冷泉港，紐約和《免疫學(xué)最新方案》（Current Protocols in Immunology), J.E.科利根 (J. E. Coligan)，A. M.克魯伊斯貝克（A. M. Kruisbeek), D. H?馬古利斯（D. H. Margulies)， E. M.席瓦赫（E. M. Shevach), W.斯喬博（W. Strober)編（2001)，約翰威利父子公司（John Wiley&Sons Inc.)，紐約，這些文獻(xiàn)的披露內(nèi)容通過引用結(jié)合在此。免疫方案通常包括或者 有或者無佐劑（諸如弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑）情況下的多次免疫，但還可以包括 裸DNA免疫。在另一個(gè)實(shí)施例中，人類結(jié)合分子由來源于轉(zhuǎn)基因動物的B細(xì)胞、漿細(xì)胞和/ 或記憶細(xì)胞產(chǎn)生。在又另一個(gè)實(shí)施例中，人類結(jié)合分子由雜交瘤產(chǎn)生，這些雜交瘤通過將獲 自上述轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動物的B細(xì)胞與永生化的細(xì)胞融合而制備。如可獲自上述轉(zhuǎn)基因 非人類哺乳動物的B細(xì)胞、漿細(xì)胞和雜交瘤以及如可獲自上述轉(zhuǎn)基因非人類哺乳動物的人 類結(jié)合分子、B細(xì)胞、漿細(xì)胞和/或記憶細(xì)胞和雜交瘤也是本發(fā)明的一部分。
[0102] 在又另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了組合物，包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合分子 (優(yōu)選地人類單克隆抗體）、其至少一種功能變異體、至少一種根據(jù)本發(fā)明的免疫偶聯(lián)物和 /或其一個(gè)組合。除此之外，這些組合物可以尤其包含穩(wěn)定化分子（諸如白蛋白或聚乙二 醇）或鹽。優(yōu)選地，所用鹽是保留結(jié)合分子的所希望的生物活性并且并不賦予任何不希望 的毒理學(xué)效應(yīng)的鹽。必要時(shí)，本發(fā)明的人類結(jié)合分子可以涂布于一種物質(zhì)之中或之上以使 其防御酸或可能會使結(jié)合分子失活的其他天然或非天然條件的作用。
[0103] 在又另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了組合物，包含至少一種如本發(fā)明中所定義的核酸 分子。這些組合物可以包含水溶液，諸如含有鹽（例如NaCl或如上文所描述的鹽）、清潔劑 (例如SDS)和/或其他適合組分的水溶液。
[0104] 此外，本發(fā)明涉及藥物組合物，包含至少一種本發(fā)明的結(jié)合分子（諸如一種人類 單克隆抗體）（或其功能片段或變異體）、至少一種根據(jù)本發(fā)明的免疫偶聯(lián)物、至少一種根 據(jù)本發(fā)明的組合物或其組合。本發(fā)明的藥物組合物進(jìn)一步包含至少一種藥學(xué)上可接受的賦 形劑。藥學(xué)上可接受的賦形劑為技術(shù)人員所熟知。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包 含至少一種其他治療劑。適合藥劑也為熟練的業(yè)內(nèi)人士所熟知。
[0105] 針對一個(gè)單一表位的一種單克隆抗體產(chǎn)品與多克隆抗體相比有時(shí)可以對病毒的 變異更敏感。這可能會增加產(chǎn)生逃逸突變體的風(fēng)險(xiǎn)。識別不同表位的兩種單克隆抗體的一 個(gè)組合可以避開此缺點(diǎn)。
[0106] 因此，在某些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包含至少一種額外結(jié)合分子，即 該藥物組合物可以是結(jié)合分子的一種混合液或混合物。該藥物組合物可以包含至少兩種根 據(jù)本發(fā)明的結(jié)合分子；或至少一種根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合分子，和至少一種其他B型肝炎病毒 結(jié)合和/或中和分子（諸如針對HBsAg蛋白質(zhì)上的另一個(gè)表位或針對存在于B型肝炎病毒 上的其他抗原結(jié)構(gòu)的另一種抗體），和/或中和一種或多種其他病原體的一種結(jié)合分子。在 另一個(gè)實(shí)施例中，額外結(jié)合分子可以被配制用于同時(shí)分別或依序給予。
[0107] 在某些實(shí)施例中，結(jié)合分子當(dāng)組合使用時(shí)展現(xiàn)協(xié)同中和活性。如在此所用，術(shù)語 "協(xié)同"意指這些結(jié)合分子當(dāng)組合使用時(shí)的組合效應(yīng)大于其當(dāng)個(gè)別地使用時(shí)的疊加效應(yīng)。協(xié) 同作用的結(jié)合分子可以結(jié)合到B型肝炎病毒的相同或不同片段上的不同結(jié)構(gòu)。一種計(jì)算協(xié) 同作用的方式是借助于聯(lián)合用藥指數(shù)。聯(lián)合用藥指數(shù)（CI)的概念已經(jīng)由周（Chou)和塔拉 利（Talalay) (1984)進(jìn)行了描述。組合物可以例如包含一種具有中和活性的結(jié)合分子和 一種非中和結(jié)合分子。非中和以及中和結(jié)合分子也可以在中和B型肝炎病毒方面協(xié)同地作 用。
[0108] 在某些實(shí)施例中，藥物組合物可以包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合分子；和至少 一種其他結(jié)合分子，優(yōu)選地另一種B型肝炎病毒中和結(jié)合分子。藥物組合物中的結(jié)合分子 優(yōu)選地能夠與不同亞型的B型肝炎病毒反應(yīng)。結(jié)合分子可以具有高結(jié)合效能和廣泛特異 性。優(yōu)選地，兩種結(jié)合分子都是交叉中和分子，以便它們各自中和不同亞型的B型肝炎病 毒。另外，優(yōu)選地，它們中和不同B型肝炎病毒亞型中的每一者的盡可能多的病毒株。
[0109] 在某些實(shí)施例中，藥物組合物包含至少一種其他預(yù)防和/或治療劑。優(yōu)選地，所述 其他治療和/或預(yù)防劑是能夠預(yù)防和/或治療一種B型肝炎病毒感染和/或由此類感染引 起的一種病狀的藥劑。治療和/或預(yù)防劑包括但不限于抗病毒劑。此類藥劑可以是結(jié)合分 子、小分子、有機(jī)或無機(jī)化合物、酶、多核苷酸序列、抗病毒肽等。這些藥劑可以與本發(fā)明的 結(jié)合分子組合使用。在此"組合"意指以分開的配制品形式同時(shí)或以一種單一組合配制品 形式，或以分開的配制品形式以任何順序根據(jù)一種依序給藥方案。處于實(shí)驗(yàn)階段的能夠預(yù) 防和/或治療一種B型肝炎病毒感染和/或由此類感染引起的一種病狀的藥劑也可以用作 可用于本發(fā)明中的其他治療和/或預(yù)防劑。
[0110] 本發(fā)明的結(jié)合分子或藥物組合物可以在用于人類中之前在適合動物模型系統(tǒng)中 進(jìn)行測試。此類動物模型系統(tǒng)包括但不限于小鼠、雪貂以及猴。
[0111] 典型地，藥物組合物必須在制造和儲存條件下無菌并且穩(wěn)定。本發(fā)明的結(jié)合分子、 免疫偶聯(lián)物或組合物可以呈粉末形式，在遞送之前或之時(shí)在適當(dāng)藥學(xué)上可接受的賦形劑中 復(fù)水。在無菌粉末用于制備無菌可注射溶液的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍 干燥（凍干），這些方法由其先前無菌過濾的溶液得到活性成分加任何額外所希望的成分 的粉末。
[0112] 可替代地，本發(fā)明的結(jié)合分子、免疫偶聯(lián)物或組合物可以呈溶液形式，并且適當(dāng)?shù)?藥學(xué)上可接受的賦形劑可以在遞送之前或之時(shí)進(jìn)行添加和/或混合以提供單位劑量可注 射形式。優(yōu)選地，本發(fā)明中所用的藥學(xué)上可接受的賦形劑適合于高藥物濃度，可以維持適當(dāng) 流動性，并且必要時(shí)可以延遲吸收。
[0113] 藥物組合物的最優(yōu)給藥途徑的選擇將受數(shù)種因素影響，這些因素包括組合物內(nèi)的 活性分子的物理化學(xué)性質(zhì)、臨床情況的緊急程度以及活性分子的血漿濃度與所希望的治療 作用的關(guān)系。舉例來說，必要時(shí)，本發(fā)明的結(jié)合分子可以與將防止其快速釋放的載劑（諸如 一種控制釋放配制品，包括植入物、透皮貼片以及微膠囊化遞送系統(tǒng)）一起制備。尤其可以 使用生物可降解的生物相容性聚合物，諸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、 聚原酸酯以及聚乳酸。此外，可能需要用防止人類結(jié)合分子失活的一種物質(zhì)或化合物涂布 結(jié)合分子或與該物質(zhì)或化合物共同給予結(jié)合分子。舉例來說，結(jié)合分子可以于一種適當(dāng)載 劑 (例如脂質(zhì)體）或一種稀釋劑中給予一個(gè)受試者。
[0114] 給藥途徑可以分成兩種主要類別，口服和腸胃外給藥。優(yōu)選的給藥途徑是腸胃外 給藥，諸如靜脈內(nèi)或通過吸入。
[0115] 本發(fā)明的藥物組合物可以被配制用于腸胃外給藥。用于腸胃外給藥的配制品尤其 可以呈水性或非水性等滲無菌無毒性注射或輸注溶液或懸浮液形式。溶液或懸浮液可以包 含在所用劑量和濃度下對接受者無毒的藥劑，諸如1，3- 丁二醇、林格氏溶液、漢克氏溶液、 等滲氯化鈉溶液、油劑、脂肪酸、局部麻醉劑、防腐劑、緩沖劑、粘度或溶解度增加劑、水溶性 抗氧化劑、油溶性抗氧化劑以及金屬螯合劑。
[0116] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明的結(jié)合分子（諸如人類單克隆抗體（其功能片段和變異 體））、免疫偶聯(lián)物、組合物或藥物組合物可以用作一種藥劑或診斷劑。因此，使用本發(fā)明的 結(jié)合分子、免疫偶聯(lián)物、組合物或藥物組合物對一種B型肝炎病毒感染進(jìn)行診斷、治療和/ 或預(yù)防的方法是本發(fā)明的另一個(gè)方面。上文提及的分子尤其可以用于對由一種B型肝炎病 毒引起的一種感染進(jìn)行診斷、預(yù)防、治療或其組合。它們適用于治療罹患一種B型肝炎病毒 感染的尚未被治療的患者和已經(jīng)或正針對一種B型肝炎病毒感染進(jìn)行治療的患者。在一個(gè) 具體實(shí)施例中，它們適用于預(yù)防一個(gè)新的肝在移植之后的B型肝炎病毒再感染。
[0117] 上文提及的分子或組合物可以與可用于診斷、預(yù)防和/或治療的其他分子結(jié)合使 用。它們可以體外、離體或體內(nèi)使用。舉例來說，本發(fā)明的結(jié)合分子（諸如人類單克隆抗體 (或其功能變異體））、免疫偶聯(lián)物、組合物或藥物組合物可以與一種針對B型肝炎病毒的疫 苗（如果可用的話）共同給予?？商娲兀呙邕€可以在給予本發(fā)明的分子之前或之后給 予。代替一種疫苗，抗病毒劑也可以與本發(fā)明的結(jié)合分子結(jié)合使用。適合的抗病毒劑如上 文所提及。
[0118] 這些分子典型地以治療或診斷上有效量配制于本發(fā)明的組合物和藥物組合物中。 可替代地，它們可以分別地進(jìn)行配制和給予。舉例來說，其他分子（諸如抗病毒劑）可以全 身性地應(yīng)用，而本發(fā)明的結(jié)合分子可以靜脈內(nèi)應(yīng)用。
[0119] 治療可以靶向暴露于B型肝炎病毒的患者群組。此類患者群組包括但不限于例如 由于HBV而經(jīng)歷肝移植的患者；HBsAg陽性母親所生的嬰兒；暴露于含有HBsAg的血液的醫(yī) 療工作者；由于性和/或家庭接觸HBsAg陽性個(gè)體而暴露于HBV的人員；以及已經(jīng)用一種抗 病毒化合物治療但已經(jīng)顯示出一種不充分的抗病毒反應(yīng)的慢性感染患者。
[0120] 可以調(diào)節(jié)劑量方案以提供最優(yōu)的所希望的反應(yīng)（例如一種治療反應(yīng)）。一種適 合的劑量范圍可以是例如〇.〇l-l〇〇mg/kg體重，優(yōu)選地是0. l-50mg/kg體重，優(yōu)選地是 0.01-15mg/kg體重。此外，舉例來說，可以給予一種單一大丸劑，可以隨時(shí)間給予數(shù)次分次 劑量，或可以如治療情況的緊急狀態(tài)所指示而按比例減少或增加劑量。根據(jù)本發(fā)明的分子 和組合物優(yōu)選地是無菌的。使這些分子和組合物無菌的方法在本領(lǐng)域中是熟知的。可用于 診斷、預(yù)防和/或治療的其他分子可以按如關(guān)于本發(fā)明的結(jié)合分子所提議的一種類似給藥 方案給予。如果其他分子分開地給予，那么它們可以在給予本發(fā)明的人類結(jié)合分子或藥物 組合物中的一者或多者之前（例如之前2分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、 60分鐘、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、14小時(shí)、16小時(shí)、18小時(shí)、20小時(shí)、 22小時(shí)、24小時(shí)、2天、3天、4天、5天、7天、2周、4周或6周）、與該給藥同時(shí)、或在該給藥 之后（例如之后2分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘、2小時(shí)、4小時(shí)、 6小時(shí)、8小時(shí)、10小時(shí)、12小時(shí)、14小時(shí)、16小時(shí)、18小時(shí)、20小時(shí)、22小時(shí)、24小時(shí)、2天、 3天、4天、5天、7天、2周、4周或6周）給予一個(gè)患者。確切給藥方案通常在人類患者的臨 床試驗(yàn)期間分選出。
[0121] 人類結(jié)合分子和包含人類結(jié)合分子的藥物組合物當(dāng)待給予人類作為體內(nèi)治療劑 時(shí)特別適用并且通常是優(yōu)選的，因?yàn)榻邮苷?