一種提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本技術(shù)發(fā)明屬于植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]刨花楠(Machilus pauhoi)為用途廣泛的亞熱帶常綠闊葉喬木樹種，是珍貴的用材樹種和優(yōu)美的庭園觀賞樹種。但研宄發(fā)現(xiàn)，該樹種在其分布區(qū)生長(zhǎng)主要受有效磷限制影響。而利用刨花楠林地土壤中的無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌，可以將不易被其吸收的土壤中的磷元素分解成可以被其吸收的有效磷，進(jìn)而促進(jìn)其生長(zhǎng)。因此，尋找一種能高效提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌方法，對(duì)于提高刨花楠生長(zhǎng)速率具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種能高效提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:提供一種高效提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法，包括如下步驟:
[0005]將刨花楠根際土壤懸濁液中的上清液以1:25的體積比加入到無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基，混勻后放入溫度保持在29-33°C、轉(zhuǎn)速為140-180r/min的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)45_50h，
得培養(yǎng)液；
[0006]將所述培養(yǎng)液按KT1至10 _1(1每10倍一個(gè)濃度梯度進(jìn)行梯度稀釋，取10 _4，10_6，1-8,10_1(1的濃度的培養(yǎng)液100 μ L，均勻涂在無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基平板上，并放置于29-33?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)到5-7d后，即可得無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌菌落；
[0007]所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基包括如下重量份的原料混合而成:葡萄糖10份、磷酸三鈣5份、氯化鎂5份、七水硫酸鎂0.25份、與氯化鉀0.2份和蒸餾水1000份；
[0008]所述無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基是在所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入15-18重量份的瓊脂后的配置而成。
[0009]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明提供的提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌方法，培養(yǎng)基的組分配合可使培養(yǎng)基在滅菌的過程中不結(jié)塊、不發(fā)黃，培養(yǎng)液中的有效養(yǎng)分能夠被有效、充分利用，并能顯著提高獲取的解磷細(xì)菌的種類、數(shù)量與密度，便于進(jìn)一步優(yōu)選與純化。利用所提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌，可以提高被刨花楠吸收的土壤有效磷含量，從而促進(jìn)刨花楠生長(zhǎng)。
【具體實(shí)施方式】
[0010]為詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、所實(shí)現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實(shí)施方式予以說(shuō)明。
[0011]本發(fā)明最關(guān)鍵的構(gòu)思在于:本發(fā)明提供一種高效獲取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌方法，通過提取并利用刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌，可以提高被刨花楠吸收的土壤有效磷含量，從而促進(jìn)刨花楠生長(zhǎng)。
[0012]本發(fā)明提供一種高效獲取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法，包括如下步驟:
[0013]將刨花楠根際土壤懸濁液中的上清液以1:25的體積比加入到無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基，混勻后放入溫度保持在29-33°C、轉(zhuǎn)速為140-180r/min的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)45_50h，得培養(yǎng)液；
[0014]將所述培養(yǎng)液按KT1至10 _1(1每10倍一個(gè)濃度梯度進(jìn)行梯度稀釋，取10 _4，1-6,1-8,10_1(1的濃度的培養(yǎng)液100 μ L，均勻涂在無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基平板上，并放置于29-33?的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)到5-7d后，即可得無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌菌落；
[0015]所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基包括如下重量份的原料混合而成:葡萄糖10份、磷酸三鈣5份、氯化鎂5份、七水硫酸鎂0.25份、與氯化鉀0.2份和蒸餾水1000份；
[0016]所述無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基是在所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入15-18重量份的瓊脂后配置而成。
[0017]上述優(yōu)選的高效提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法中，所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基通過滴入3-6mol/L的鹽酸使其pH值保持在6.8-7.4之間；
[0018]上述優(yōu)選的高效提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法中，所述刨花楠根際土壤懸濁液的制備方法如下:稱取從刨花楠林地0-5cm的土層中采集并放入4°C冰箱保存的根際土壤鮮樣0.5g，所述根際土壤鮮樣離刨花楠根際0-4mm，將根際土壤鮮樣倒入裝有4ml蒸餾水的無(wú)菌離心管中，漩渦振蕩3min，靜置30min，得刨花楠根際土壤懸濁液。
[0019]實(shí)施例1
[0020]一種提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法，包括如下步驟:
[0021]將刨花楠根際土壤懸濁液中的上清液2ml置于50ml的無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基，混勻后放入溫度保持在30°C、轉(zhuǎn)速為140-180r/min的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)48h ；
[0022]將所述培養(yǎng)液按KT1至10 _1(1每10倍一個(gè)濃度梯度進(jìn)行梯度稀釋，取10 _4，10_6，10_8，10_1(1的濃度的培養(yǎng)液100 μ L，均勻涂在無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基平板上，并放置于30°C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)到6d后，即可得無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌菌落；
[0023]所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基包括如下重量份的原料混合而成:葡萄糖10g、磷酸三鈣5g、氯化鎂5g、七水硫酸鎂0.25g、與氯化鉀0.2g和蒸餾水100ml ;所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基通過滴入5mol/L的鹽酸使其pH值保持在7.0 ；
[0024]所述無(wú)機(jī)磷固體培養(yǎng)基是在所述無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入15-18g的瓊脂后的配置而成。
[0025]將所述無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌菌落用接種針挑取帶有溶磷圈的菌落，再進(jìn)行劃線分離、純化，將純化后的菌液放入經(jīng)滅菌處理后并裝有20%濃度的甘油液體保菌管中，并置于-80 °C超低溫冰箱中密閉保存。
[0026]上述培養(yǎng)基在滅菌的過程中不結(jié)塊、不發(fā)黃，培養(yǎng)液中的有效養(yǎng)分能夠被有效、充分利用，并能顯著提高獲取的解磷細(xì)菌的種類、數(shù)量與密度。
[0027]實(shí)施例2
[0028]一種提取刨花楠林地土壤無(wú)機(jī)解磷細(xì)菌的方法，采用的技術(shù)方案如下:
[0029](I)根際土壤懸池液配置:稱取從刨花楠林地0_5cm的土層中采集并放入4°C冰箱保存的根際土壤(離根際0-4mm)鮮樣0.5g，將其倒入裝有4ml蒸飽水的無(wú)菌離心管中，漩禍振蕩3min，靜置30min。
[0030](2)解磷細(xì)菌菌液制配:用移液槍吸取土壤懸濁液中上清液2ml置于50ml的無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基，混勻后放入溫度保持在29-33°C的恒溫?fù)u床中振蕩培養(yǎng)45-50h，搖床轉(zhuǎn)速為140-180r/min。無(wú)機(jī)磷液體培養(yǎng)基為葡萄糖(C6H12O6, 1g)、磷酸三1? (Ca3 (PO4) 2，5g)、氯化鎂(MgCl2，5g)、硫酸鎂(MgSO4.7Η20，0.25g)與氯化鉀(KC1，0.2g)，并加 1000ml 蒸餾水進(jìn)行混合?；旌弦和ㄟ^滴入3-6mol/L的鹽酸，使其pH值保持在6.8-7.4之間。所使用的