述DNA的擴增率的差為1.9倍以下，更優(yōu)選為1.1倍以下。
[0047]以此方式，能夠更準(zhǔn)確地定量源自各待檢體的樣品中所含有的DNA。
[0048]發(fā)明的效果
[0049]本發(fā)明具有如下效果:利用很少種類的核酸就能夠很準(zhǔn)確地鑒定供于分析的多個待檢體的各自的來源。
【附圖說明】
[0050]圖1是本發(fā)明的第I實施方式中的核酸分析試劑盒的整體結(jié)構(gòu)圖。
[0051]圖2是對于使用圖1的核酸分析試劑盒的核酸分析方法進行說明的流程圖。
[0052]圖3是本發(fā)明的第2實施方式中的核酸分析試劑盒的整體結(jié)構(gòu)圖。
[0053]圖4A是對于圖3的核酸分析試劑盒所具備的基板的使用方法進行說明的圖，表示基板分割前。
[0054]圖4B是對于圖3的核酸分析試劑盒所具備的基板的使用方法進行說明的圖，表示基板分割后。
[0055]圖5是對于使用圖3的核酸分析試劑盒的核酸分析方法進行說明的流程圖。
[0056]圖6是對于本發(fā)明的第3實施方式中的核酸分析方法即使用圖3的核酸分析試劑盒的另一個核酸分析方法進行說明的流程圖。
【具體實施方式】
[0057](第I實施方式)
[0058]以下，參照圖1及圖2對于本發(fā)明的第I實施方式中的核酸分析試劑盒100及使用該試劑盒的核酸分析方法進行說明。
[0059]關(guān)于本實施方式中的核酸分析試劑盒100，如圖1所示，具備:封入了識別探針I(yè)的多個容器(支撐體)2和對應(yīng)表3，所述對應(yīng)表3將各容器2上附有的容器號與封于各容器2的識別探針I(yè)的組成相對應(yīng)。
[0060]容器2是例如通常在分子生物學(xué)實驗中所使用的1.5mL的微量離心管。識別探針I(yè)在干燥狀態(tài)下粘貼于容器2的底部的內(nèi)表面。
[0061]識別探針I(yè)包含具有相互不同的已知堿基序列的多種核酸。這些多種核酸以每個容器2相互不同的配混比進行混合，識別探針I(yè)的組成即識別探針I(yè)中所含有的核酸的種類及其量在每個容器2中不同。
[0062]在本實施方式中，對作為核酸使用4種DNAl、DNA2、DNA3和DNA4的情況進行說明。DNAl、DNA2、DNA3和DNA4以4個階段各自不同的配混量進行配混。即，在本例中能夠制備配混4X4X4X4 = 256種具有相互不同配混比的識別探針1，核酸分析試劑盒100所具有的容器2的最大數(shù)為256個。
[0063]需要說明的是，識別探針I(yè)中所含有的核酸的種類可根據(jù)待檢體的靶核酸的種類進行適宜地選擇，也可使用RNA等其他種類的核酸。當(dāng)靶核酸為DNA時，識別探針I(yè)優(yōu)選含有DNA ;當(dāng)靶核酸為RNA時，識別探針I(yè)優(yōu)選含有RNA。當(dāng)識別探針I(yè)含有RNA時，為了不使RNA被分解酶分解，也可使用被修飾的RNA例如寡核苷酸的2’位置取代為甲基的RNA。
[0064]關(guān)于DNAl?DNA4的堿基長度，從合成及分析中操作方便的觀點考慮，優(yōu)選為10個堿基以上且1000個堿基以下，更優(yōu)選為20個堿基以上且500個堿基以下。另外，在后述的核酸分析工序中為了防止DNAl?DNA4對于作為靶的核酸的分析帶來影響，并且能夠充分地確保DNAl?DNA4的定量性，在各容器2中所封入的DNAl?DNA4的總分子數(shù)優(yōu)選為100分子以上且100000分子以下。然而，毫無疑問根據(jù)核酸的分析方法的精度、靈敏度也可將識別探針I(yè)的總分子數(shù)設(shè)定在該范圍以外。
[0065]在對應(yīng)表3中，作為各容器2內(nèi)的識別探針I(yè)的組成即各識別探針I(yè)所含有的核酸的種類及其量，核酸的種類(DNA1?DNA4)及其配混比與各容器2的容器號以I對I的方式進行對應(yīng)。
[0066]接著，對于使用以此方式構(gòu)成的核酸分析試劑盒100的核酸分析方法，參照圖2的流程圖進行說明。
[0067]在使用本實施方式中的核酸分析試劑盒100對待檢體中所含有的靶DNA進行分析時，首先將待檢體投入至容器2中，在該容器2內(nèi)使待檢體與識別探針I(yè)充分地混合(步驟SI，探針添加工序)。在此情況下，預(yù)先記錄將哪個待檢體投入到哪個容器號的容器2中(步驟S2) ο
[0068]其次，對各待檢體實施用于核酸分析的前處理。例如當(dāng)待檢體為生物組織的片段或細胞等時，進行從待檢體提取DNA的處理。接著，通過使用定量的PCR等定量核酸擴增法對經(jīng)前處理而由各待檢體中得到的樣品進行分析，從而對樣品中所含有的靶DNA進行檢測和定量(步驟S3，核酸分析工序)。
[0069]在此，被封入至容器2中的識別探針I(yè)也與源自待檢體的靶DNA —起存在于各樣品中。對于構(gòu)成識別探針I(yè)的4種DNAl?DNA4而言，在步驟S3中也與靶DNA —起實施檢測和定量。因此，4種DNAl?DNA4具有通過靶DNA用的引物而擴增的堿基序列，或者在步驟S3中也添加DNAl?DNA4用的引物。由此，對于每個樣品而言得到DNAl?DNA4的配混比(步驟S4)。
[0070]步驟S3的定量核酸擴增法中，優(yōu)選以大致相同的擴增率對各樣品中的DNAl?DNA4進行擴增。具體而言，DNAl?DNA4的擴增率的差優(yōu)選為1.9倍以下，更優(yōu)選為1.1倍以下。
[0071 ] 接著，通過將在步驟S4得到的各樣品的DNAl?DNA4的配混比與對應(yīng)表3相對照，從而能夠特定各樣品是源自于投入至哪個容器號的容器2中的待檢體(步驟S5)。
[0072]如此，本實施方式通過對由各待檢體所制備的樣品中所含有的識別探針I(yè)進行分析，從而可鑒定該樣品的來源。通常，在分子生物學(xué)實驗中，從將待檢體投入至容器2到靶DNA的分析結(jié)束為止的期間，從待檢體或該待檢體得到的樣品被多次從一個容器轉(zhuǎn)移至其他的容器。本實施方式具有如下優(yōu)點:將樣品進行轉(zhuǎn)移時即便不記錄將哪個樣品移至哪個容器中，基于最終供于核酸分析的樣品中所含有的識別探針I(yè)的配混比，也能夠很準(zhǔn)確地鑒定該樣品的來源。
[0073]進而還具有如下優(yōu)點:通過使多種核酸的配混量不同，從而即使使用極少種類的核酸，也可以很容易地制造可相互識別的多種識別探針1，并能夠鑒定多個樣品來源。
[0074]需要說明的是，在本實施方式中使用定量核酸擴增法進行核酸分析，但關(guān)于分析核酸的方法，只要可對樣品中所含有的特定的核酸進行檢測和定量即可，替代上述的定量核酸擴增法也可使用具有核酸定量功能的堿基序列讀取裝置(DNA測序)。
[0075]即使以此方式進行，也可在對樣品中所含有的靶DNA進行檢測和定量的同時得到構(gòu)成識別探針I(yè)的DNAl?DNA4的配混比。
[0076](第2實施方式)
[0077]接著，對于本發(fā)明的第2實施方式中的核酸分析試劑盒200及使用該試劑盒的核酸分析方法，參照圖3至圖5進行說明。
[0078]需要說明的是，在本實施方式中以與第I實施方式不同的點為主進行說明，對于與第I實施方式相同的構(gòu)成以相同的符號標(biāo)示并省略說明。
[0079]本實施方式中的核酸分析試劑盒200，如圖3所示，如下點與第I實施方式不同，代替容器2而具備粘貼有多種識別探針I(yè)的基板4，在對應(yīng)表3’中，各識別探針I(yè)的組成與其在基板4中的粘貼位置相對應(yīng)。
[0080]基板4是如蓋玻片樣的適用于粘貼從生物組織切出的切片的平板。基板4設(shè)置有分割線4a，分割線4a將基板表面以棋盤的格狀分割成多個區(qū)域。在通過該分割線4a分割的各區(qū)域中粘貼有I種識別探針1，識別探針I(yè)中所含有的DNAl?DNA4的配混比在各區(qū)域中相互不同。向基板4粘貼識別探針I(yè)時使用例如噴墨式打印機或用于DNA芯片制造的點樣儀。
[0081]在本實施方式中設(shè)想，與第I實施方式相同地，將4種DNA1、DNA2、DNA3和DNA4以4個階段各自不同的配混量進行混合的情況。因此，通過分割線4a將基板4分割成256以下數(shù)目的區(qū)域即可。如圖3所示的基板4被分割成10行X 10列并形成100個區(qū)域。
[0082]在對應(yīng)表3’中，各區(qū)域的位置與在各區(qū)域所粘貼的識別探針I(yè)所具有的DNAl?DNA4的配混比之間以I對I的方式進行對應(yīng)。每個區(qū)域的位置使用行號a、b、c、…、j及列號A、B、…、J的方式進行特定。
[0083]接著，對于使用以此方式構(gòu)成的核酸分析試劑盒200的核酸分析方法，參照圖5的流程圖進行說明。
[0084]在使用本實施方式中的核酸分析試劑盒200對生物組織的切片5中所含有的核酸進行分析時，如圖4A所示，首先將從生物組織切出的切片5粘貼于基板4 (步驟S21，探針添加工序)。接著，如圖4B所示，沿著分割線4a切斷基板4和切片5，從而得到在至少一部分的芯片上附著有待檢體的切片5的片段的100個芯片(支撐體)4b (步驟S22，切斷工序)。
[0085]對于切斷基板4和切片5的方法沒有特別限定，例如，通過將預(yù)先切斷的芯片4b在可伸展的片上進行2維排列從而形成基板4，并將切片5粘貼于基板4后使片伸展并將芯片4b之間分開，從而能夠沿著由芯片4b之間的界限所形成的分割線4a同時切斷基板4和切片5。
[0086]得到的芯片4b分別例如投入至不同的微量離心管中，對于附著于芯片4b的切片5的片段進行了核酸提取等的前處理。接著，將經(jīng)前處理而從各待檢體中得到的樣品與第I實施方式的步驟S3相同地進行核酸分析，從而對樣品中所含有的靶DNA進行檢測和定量(步驟S23，核酸分析工序)。
[0087]在此，粘貼于基板4的I種識別探針I(yè)與源自片段的靶DNA—起存在于由切片5的各片段所制備的各樣品中。因此，以與上述步驟S3?S5相同地方式，對于各樣品，通過得到DNAl?DNA4的配混比(步驟S24