)，且將得到的各樣品的DNAl?DNA4的配混比與對應(yīng)表3’相對照，從而能夠特定各樣品是源自于哪個位置的片段(步驟S25)。
[0088]本實施方式的效果與上述的第I實施方式相同，因此省略說明。
[0089]需要說明的是，在本實施方式中，雖在基板4的各區(qū)域粘貼有識別探針1，但也可代替這種方式，在基板4上粘貼切片5后，使用上述的噴墨式打印機或點樣儀等在切片5上粘貼識別探針I(yè)。在此情況下，以通過分割線4a所分割的各區(qū)域各含有一種識別探針I(yè)的方式也能決定識別探針I(yè)的粘貼位置。
[0090]即使這樣做也能基于各樣品中所含有的識別探針I(yè)的組成來準確地特定供于核酸分析的各樣品分別是源自于切片5的哪個位置的片段。
[0091](第3實施方式)
[0092]接著，對于本發(fā)明的第3實施方式中的核酸分析試劑盒及使用該核酸分析試劑盒的核酸分析方法，參照圖6進行說明。本實施方式涉及使用第2實施方式中的核酸分析試劑盒200的另一個核酸分析方法。因此，對于與第2實施方式不同的方面主要進行說明，對于與第2實施方式相同的構(gòu)成用相同的符號標示并省略說明。
[0093]根據(jù)本實施方式中的核酸分析方法，如圖6所示，步驟S21中將切片5粘貼于基板4上后，通過原位雜交在切片5上使檢測用的DNA探針(核酸探針。以下稱為檢測用探針。)與作為靶的RNA締合(步驟S31，雜交工序)。使檢測用探針締合后，與第2實施方式相同地分割并提取切片5 (步驟S22)，并進行核酸分析(步驟S23)，取得識別探針I(yè)的配混比(步驟S24)，基于對應(yīng)表3’來鑒定待檢體(步驟S25)。然而，在本實施方式中，在步驟S23中對檢測用探針也進行分析，在步驟S24中也能取得各待檢體中所含有的檢測用探針的種類和量。
[0094]如果不使用預先粘貼有識別探針I(yè)的基板4，而在基板4上粘貼切片5后使用喂■墨式打印機等粘貼識別探針I(yè)的情況下，在步驟S31的雜交之后將識別探針I(yè)粘貼于切片5。
[0095]根據(jù)本實施方式中的核酸分析方法，除了第2實施方式的效果以外，在用定量核酸擴增法對靶核酸進行解析的情況下，通過使用已知的檢測用探針可使擴增效率大致相同，而且可提高檢測的精度。另外，特別是靶核酸為RNA時，在進行核酸分析時能夠不將RNA轉(zhuǎn)換為互補的DNA而通過定量核酸擴增法和DNA測序來進行解析。而且，通過將易分解的RNA置換為DNA來進行檢測，可以提高檢測的精度和靈敏度。
[0096]需要說明的是，在上述的第I?第3的實施方式中，對于含有4種核酸的識別探針I(yè)進行了說明，但識別探針I(yè)中所含有的核酸的種類的數(shù)目不限于這些，可根據(jù)實際需要選擇合適的數(shù)目。例如，在第2實施方式中，優(yōu)選為適用于噴墨式打印機或點樣儀的數(shù)目。具體地，識別探針I(yè)所含有的核酸的種類的數(shù)目，在使用4色用噴墨式打印機時，優(yōu)選核酸種類的數(shù)目為4以下，使用點樣儀時，優(yōu)選為點樣儀所配備的針的數(shù)目以下。
[0097]另外，在上述的第I?第3的實施方式中，為了通過核酸分析而準確地得到DNA1、DNA2、DNA3和DNA4的配混比，對于DNA1、DNA2、DNA3和DNA4的各自的配混量而言，當最小的配混量作為I時，以2倍、3倍、4倍不同的方式進行設(shè)定。然而，能夠以高精度檢測樣品中所含有的DNAl、DNA2、DNA3和DNA4的量時，也可以使DNAl、DNA2、DNA3和DNA4各自的配混量以更小的比率進行變化。
[0098]另外，在上述的第I?第3的實施方式中，識別探針I(yè)雖含有多種核酸，但根據(jù)分析對象的待檢體的數(shù)目或核酸分析的定量精度等條件，識別探針I(yè)也可僅含有I種核酸。
[0099]S卩，在以第I實施方式為例進行列舉時，核酸分析試劑盒100在具備η個(η為自然數(shù)。)容器2時，各容器2中封入僅含有I種核酸的識別探針1，并使該核酸的量在每個容器2中η級不同。
[0100]即使這樣做，通過對供于核酸分析的樣品中的識別探針I(yè)進行分析，從而可以鑒定樣品的來源。
[0101]附圖標記說曰月
[0102]100，200核酸分析試劑盒
[0103]I識別探針
[0104]2容器(支撐體)
[0105]3，3’ 對應(yīng)表
[0106]4 基板
[0107]4a分割線
[0108]4b芯片(支撐體)
[0109]5 切片
[0110]S1，S21探針添加工序
[0111]S3，S23核酸分析工序
[0112]S22切斷工序
[0113]S31雜交工序
【主權(quán)項】
1.一種核酸分析試劑盒，其具備多個支撐體，所述多個支撐體保持含有核酸的識別探針且支撐待檢體， 所述識別探針包含具有已知的堿基序列的至少I種核酸，且在每個所述支撐體中的所述核酸的種類和量中的至少一者不同并以能夠混合于所述待檢體的方式保持在所述支撐體中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸分析試劑盒，其具備對應(yīng)表，所述對應(yīng)表將所述多個支撐體與分別被該多個支撐體保持的所述識別探針的所述核酸的種類和量的組合相對應(yīng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的核酸分析試劑盒，其中， 所述支撐體為收容所述待檢體的容器， 所述識別探針被封入所述容器內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的核酸分析試劑盒，其具備基板， 所述基板能夠沿著規(guī)定的分割線分割成多個芯片且粘貼有作為所述待檢體的生物組織的切片， 所述識別探針分別被所述多個芯片保持。
5.根據(jù)權(quán)利要求1?權(quán)利要求4中任一項所述的核酸分析試劑盒，其中，所述核酸為DNA0
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的核酸分析試劑盒，其中，所述DNA的堿基長度為20個堿基以上且500個堿基以下。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或權(quán)利要求6所述的核酸分析試劑盒，其中，保持在各所述支撐體的所述DNA的分子數(shù)為100分子以上且100000分子以下。
8.—種核酸分析方法，其中包括以下工序: 探針添加工序:分別向多個待檢體中添加包含具有已知的堿基序列的至少I種核酸的識別探針，及 核酸分析工序:對各所述待檢體中所含有的核酸進行分析， 所述探針添加工序中，將所述核酸的種類和量中的至少一者相互不同的所述識別探針向所述多個待檢體中添加， 所述核酸分析工序中，對于向各所述待檢體中添加的所述識別探針中所含有的所述核酸也進行解析。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分析方法，其中，所述探針添加工序中，將所述待檢體投入至收容所述識別探針的容器內(nèi)。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分析方法，其中， 所述探針添加工序中，在散在并粘貼有所述識別探針的基板上粘貼生物組織的切片， 進而包括切斷工序:將粘貼有所述切片的基板與所述切片一起切斷成含有一個識別探針的多個芯片， 所述核酸分析工序中，對于附著于在所述切斷工序中得到的所述芯片上的所述切片的一部分進行分析。
11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的核酸分析方法，其中， 所述探針添加工序中，在生物組織的切片上散在并粘貼所述識別探針， 進而包括切斷工序:將粘貼有所述識別探針的所述切片切斷成含有一個識別探針的多個片段， 所述核酸分析工序中，對于在所述切斷工序中切斷的所述切片的片段進行分析。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或權(quán)利要求11所述的核酸分析方法，其還包括雜交工序:在所述切斷工序前，使用具有與靶核酸互補的已知的堿基序列的核酸探針對于所述切片進行原位雜交。
13.根據(jù)權(quán)利要求8?權(quán)利要求12中任一項所述的核酸分析方法，其中，所述核酸分析工序中，使用定量核酸擴增法或能夠進行核酸定量的堿基序列讀取裝置對所述待檢體及所述識別探針中所含有的核酸進行分析。
14.根據(jù)權(quán)利要求8?權(quán)利要求13中任一項所述的核酸分析方法，其中，所述識別探針中所含有的所述核酸為DNA。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的核酸分析方法，其中，所述DNA的堿基長度為20個堿基以上且500個堿基以下。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或權(quán)利要求15所述的核酸分析方法，其中，各所述識別探針中所含有的所述DNA的分子數(shù)為100分子以上且100000分子以下。
17.根據(jù)權(quán)利要求14?權(quán)利要求16中任一項所述的核酸分析方法，其中， 所述核酸分析工序中，使用定量核酸擴增法對添加于各所述待檢體中的所述DNA進行分析， 所述定量核酸擴增法中的所述DNA的擴增率大致相同。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的核酸分析方法，其中， 所述核酸分析工序中，使用PCR法對添加于各所述待檢體中的所述DNA進行分析， 所述PCR法中的各所述DNA的擴增率的差為1.9倍以下。
【專利摘要】本發(fā)明利用很少種類的核酸準確地鑒定供于分析的多個樣品的各自的來源。提供一種核酸分析試劑盒(100)，其具備保持含有核酸的識別探針(1)且支撐待檢體的多個支撐體(2)。識別探針(1)包含具有已知的堿基序列的至少1種核酸并且在每個支撐體(2)中的核酸的種類和量中的至少一者不同并以能夠混合于待檢體的方式保持在支撐體(2)中。
【IPC分類】C12N15-09, G01N33-53, C12Q1-68
【公開號】CN104769110
【申請?zhí)枴緾N201480002850
【發(fā)明人】堀邦夫
【申請人】奧林巴斯株式會社
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2014年5月15日
【公告號】US20150259732, WO2014188941A1