得到一次文冠果油、一次乳化層和一次粗蛋白液；
步驟三、一次破乳:將一次乳化層分離，冷凍再解凍破乳，一次破乳條件為:冷凍溫度-25°C，冷凍時間24小時，解凍溫度40°C，解凍4小時，得到一次乳液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000?5500r/min，離心10?30min，依次得到第一層清油、第二層乳化層和第三層廢液，逐層吸取得到二次文冠果油和二次乳化層；
步驟四、二次破乳:將二次乳化層分離，冷凍再解凍破乳，所述二次破乳條件為:冷凍溫度-25°C，冷凍時間24小時，解凍溫度40°C，解凍4小時，得到二次乳液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000?5500r/min，離心10?30min，依次得到第一層清油、第二層乳化層和第三層廢液，吸取上層清油得到三次文冠果油，并與一次文冠果油和二次文冠果油混勻，制得文冠果油；
步驟五、一次堿提:將一次粗蛋白液進行一次堿提，在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)能夠充分溶解，一次堿提的條件為:堿提料液比1:5?10，堿提溫度50?60°C，堿提pH8?10，堿提時間I?3小時，得到一次堿提液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000?5500r/min，離心10?30min，得到上層蛋白溶液和下層沉淀，將其分離得到一次蛋白液和一次沉淀；
步驟六、二次堿提:將一次沉淀進行二次堿提，二次堿提目的是保證一次堿提時未溶解的蛋白質(zhì)能夠充分溶解，二次堿提的條件為:堿提料液比1:10?15，堿提溫度50-60°C，堿提PH8-10，堿提時間0.5?2小時，得到二次堿提液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000?5500r/min，離心10?30min，得到上層蛋白溶液和下層沉淀，將其分離得到二次蛋白液，二次堿提時增加料液比是為了使蛋白質(zhì)更加充分的溶解，增加蛋白質(zhì)的得率； 步驟七、酸沉:將一次蛋白液和二次蛋白液混勻，加入鹽酸或檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4.6進行酸沉(文冠果蛋白等電點為4.6)，酸沉溫度為40°C，待出現(xiàn)絮狀物后離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000?5500r/min，離心10?30min，得到沉淀粉，對沉淀粉進行冷凍干燥，得到文冠果蛋白O
[0021]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是:本發(fā)明采用多糖復合酶酶解，破壞細胞結(jié)構(gòu)使油脂釋出，相較于單一使用纖維素酶或果膠酶酶解的油脂得率更高；相比使用蛋白酶酶解，多糖復合酶中的纖維素酶和果膠酶的最適PH均落在酸性條件下，因此僅需進行一次酶解，而當使用蛋白酶酶解時，由于反應條件差異，蛋白酶多為堿性或中性，因此需進行兩次酶解，增加酶解反應時間2?5小時左右；另外，當使用蛋白酶酶解時，容易將蛋白水解為多肽，降低蛋白的得率，且獲得的蛋白產(chǎn)品純度較低，而當使用多糖復合酶酶解，并通過破乳堿提酸沉法得到的粗蛋白液，可使得蛋白得率上升至40%且純度升高，大大增加了蛋白的得率。由于水酶法提油時會形成乳狀液，其成分為油、水、少量蛋白質(zhì)、淀粉及纖維素，相比于加熱破乳、微波輻照和鹽析破乳，本發(fā)明采用的連續(xù)兩次冷凍解凍破乳能較好破壞乳狀液的穩(wěn)定性，由于冷凍過程中乳狀液中會出現(xiàn)油相結(jié)晶，且這些脂肪晶體可刺入水相，當這些脂肪晶體恰好出現(xiàn)在相鄰油滴之間時，將刺穿界面膜引起油滴的聚集，從而大幅度降低乳狀液的穩(wěn)定性，達到破乳的目的，本發(fā)明采用連續(xù)兩次冷凍解凍破乳法大大提高了油脂得率，得油率從破乳前的20%左右，提供到最高的40%，充分提取了文冠果中的油脂。本發(fā)明通過采用連續(xù)兩次堿提酸沉法提取文冠果蛋白，并改變前后兩次堿提的條件，通過增大二次堿提的料液比，可有效促進文冠果蛋白的溶解吸出；由于二次堿提料液比增加，而時間相應減少，且二次堿提后期，蛋白質(zhì)的溶出隨時間增加量減小，因此通過改變前后兩次堿提的時間，可使設(shè)備得到充分利用，提高了生產(chǎn)效率。本發(fā)明提供的水酶法同時制備文冠果油和文冠果蛋白的方法，工藝簡單安全，提取的文冠果油香味濃，顏色淺，質(zhì)量好；制得的文冠果蛋白純度更高，蛋白質(zhì)含量高于50%，可作為一種良好的功能性配料廣泛應用于食品加工中。
[0022]實施例1:
將文冠果去殼脫皮得到純文冠果仁，將純文冠果仁粉碎過篩，得到顆粒大小為60目的文冠果仁原料，將文冠果仁原料和水按料液比Ig:5mL混勻，制得漿液；在漿液中加入鹽酸將漿液PH調(diào)至5，加入多糖復合酶酶解，多糖復合酶采用纖維素酶+果膠酶，所述纖維素酶和果膠酶的用量為1:1，且多糖復合酶的加酶量為文冠果仁原料用量的1000u/g，酶解反應溫度為50°C，酶解反應時間為3小時，待酶解反應結(jié)束，將酶解液升溫至80°C滅酶20分鐘，調(diào)節(jié)酶解液pH至4.6后離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速5500r/min，離心lOmin，依次得到第一層清油、第二層乳化層、第三層廢液和第四層粗蛋白，逐層吸取得到一次文冠果油、一次乳化層和一次粗蛋白液；將一次乳化層分離，冷凍再解凍破乳，一次破乳條件為:冷凍溫度_25°C，冷凍時間24小時，解凍溫度40°C，解凍4小時，得到一次乳液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000/min，離心lOmin，依次得到第一層清油、第二層乳化層和第三層廢液，逐層吸取得到二次文冠果油和二次乳化層；將二次乳化層分離，冷凍再解凍破乳，所述二次破乳條件為:冷凍溫度_25°C，冷凍時間24小時，解凍溫度40°C，解凍4小時，得到二次乳液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000r/min，離心lOmin，依次得到第一層清油、第二層乳化層和第三層廢液，吸取上層清油得到三次文冠果油，并與一次文冠果油和二次文冠果油混勻，制得文冠果油；將一次粗蛋白液進行一次堿提，一次堿提的條件為:堿提料液比1:5，堿提溫度60°C，堿提pH9，堿提時間3小時，得到一次堿提液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000r/min，離心lOmin，得到上層蛋白溶液和下層沉淀，將其分離得到一次蛋白液和一次沉淀；將一次沉淀進行二次堿提，二次堿提的條件為:堿提料液比1:10，堿提溫度60°C，堿提pH9，堿提時間I小時，得到二次堿提液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000r/min，離心lOmin，得到上層蛋白溶液和下層沉淀，將其分離得到二次蛋白液；將一次蛋白液和二次蛋白液混勻，加入鹽酸或檸檬酸調(diào)節(jié)PH至4.6進行酸沉，酸沉溫度為40°C，待出現(xiàn)絮狀物后離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000r/min，離心lOmin，得到沉淀粉，對沉淀粉進行冷凍干燥，得到文冠果蛋白；文冠果油得率35.6%，提取率61.4%，文冠果蛋白純度(干基)51.6%，提取率40.8%。其中，文冠果仁含油率為58.2%，蛋白含量為29.7%。
[0023]實施例2:
將文冠果去殼脫皮得到純文冠果仁，將純文冠果仁粉碎過篩，得到顆粒大小為60目的文冠果仁原料，將文冠果仁原料和水按料液比Ig:5mL混勻，制得漿液；在漿液中加入鹽酸將漿液PH調(diào)至5，加入多糖復合酶酶解，多糖復合酶采用纖維素酶+果膠酶，所述纖維素酶和果膠酶的用量為1: 10，且多糖復合酶的加酶量為文冠果仁原料用量的2000u/g，酶解反應溫度為50°C，酶解反應時間為5小時，待酶解反應結(jié)束，將酶解液升溫至80°C滅酶20分鐘，調(diào)節(jié)酶解液pH至4.6后離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速5500r/min,離心1min,依次得到第一層清油、第二層乳化層、第三層廢液和第四層粗蛋白，逐層吸取得到一次文冠果油、一次乳化層和一次粗蛋白液；將一次乳化層分離，冷凍再解凍破乳，一次破乳條件為:冷凍溫度-25°C，冷凍時間24小時，解凍溫度40°C，解凍4小時，得到一次乳液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000/min，離心lOmin，依次得到第一層清油、第二層乳化層和第三層廢液，逐層吸取得到二次文冠果油和二次乳化層；將二次乳化層分離，冷凍再解凍破乳，所述二次破乳條件為:冷凍溫度-25°C，冷凍時間24小時，解凍溫度40°C，解凍4小時，得到二次乳液并將其離心，離心條件為:轉(zhuǎn)速4000r/min，離心lOmin，依次得到第一層清油、第二層乳化層和第三層廢液，吸取上層清油得到三次文冠果油，并與一次文冠果油和二次文冠果油混勻，制得文冠果油；將一次粗蛋白