AACA 101 CGTGGGTGAT CTGCCCTGCA CTTCGGGATA AGCCTGGGAA ACTGGGTCTA 151 ATACCGGATA GGACCTCGGG ATGCATGTTC CGGGGTGGAA AGGTTTTCCG
[0039] 201 GTGCAGGATG GGCCCGCGGC CTATCAGCTT GTTGGTGGGG TAACGGCCCA 251 CCAAGGCGAC GACGGGTAGC CGGCCTGAGA GGGCGACCGG CCACACTGGG 301 ACTGAGACAC GGCCCAGACT CCTACGGGAG GCAGCAGTGG GGAATATTGC 351 ACAATGGGCG CAAGCCTGAT GCAGCGACGC CGCGTGAGGG ATGACGGCCT 401 TCGGGTTGTA AACCTCTTTC AGTACCGACG AAGCGCAAGT GACGGTAGGT 451 ACAGAAGAAG CACCGGCCAA CTACGTGCCA GCAGCCGCGG TAATACGTAG 501 GGTGCGAGCG TTGTCCGGAA TTACTGGGCG TAAAGAGCTC GTAGGCGGTT 551 TGTCGCGTCG TCTGTGAAAA CCCGCAGCTC AACTGCGGGC TTGCAGGCGA 601 TACGGGCAGA CTTGAGTACT GCAGGGGAGA CTGGAATTCC TGGTGTAGCG 651 GTGAAATGCG CAGATATCAG GAGGAACACC GGTGGCGAAG GCGGGTCTCT 701 GGGCAGTAAC TGACGCTGAG GAGCGAAAGC GTGGGTAGCG AACAGGATTA 751 GATACCCTGG TAGTCCACGC CGTAAACGGT GGGCGCTAGG TGTGGGTTTC 801 CTTCCACGGG ATCCGTGCCG TAGCTAACGC ATTAAGCGCC CCGCCTGGGG 851 AGTACGGCCG CAAGGCTAAA ACTCAAAGGA ATTGACGGGG GCCCGCACAA 901 GCGGCGGAGC ATGTGGATTA ATTCGATGCA ACGCGAAGAA CCTTACCTGG 95丄 GTTTGACATA CACCGGACCG CCCCAGAGAT GGGGTTTCCC TTGTGGTCGG 1001 TGTACAGGTG GTGCATGGCT GTCGTCAGCT CGTGTCGTGA GATGTTGGGT 1051 TAAGTCCCGC AACGAGCGCA ACCCTTGTCC TGTGTTGCCA GCACGTAATG 1101 GTGGGGACTC GCAGGAGACT GCCGGGGTCA ACTCGGAGGA AGGTGGGGAC 1151 GACGTCAAGT CATCATGCCC CTTATGTCCA GGGCTTCACA CATGCTACAA 1201 TGGCCGGTAC AGAGGGCTGC GATACCGCGA GGTGGAGCGA ATCCCTTAAA 1251 GCCGGTCTCA GTTCGGATCG GGGTCTGCAA CTCGACCCCG TGAAGTCGGA 1301 GTCGCTAGTA ATCGCAGATC AGCAACGCTG CGGTGAATAC GTTCCCGGGC 1351 CTTGTACACA CCGCCCGTCA CGTCATGAAA GTCGGTAACA CCCGAAGCCG 1401 GTGGCCTAAC CCCTCGTGGG AGGGAGCCGT CGAAGGTGGG ATCGGCGATT 1451 GGGACGAAGT CGTAACAAGG TAGC
[0040]綜合上述的生理生化特性、16S rRNA基因序列比對(duì)結(jié)果，本發(fā)明中的赤紅球菌菌 株屬于紅球菌屬，命名為赤紅球菌（Rhodococcusruber)TAW_CT127。
[0041]實(shí)施例二
[0042] 赤紅球菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127對(duì)十漠聯(lián)苯謎的降解分析
[0043]人工海水培養(yǎng)基（MMC):每升培養(yǎng)基中含有NaCl24g，NH4N03lg，KC1 0. 7g， KH2P042.Og，Na2HP043.Og，pH7. 4,MgS047g(滅菌后加入）。
[0044] 微量元素鹽溶液：每升微量元素鹽溶液中含有CaCl2mg，F(xiàn)eCl3*6H20 50mg， CuS040. 5mg，MnCl2 ? ?H20 0? 5mg，ZnS04 ? ? 7H20 10mg。
[0045] 富集培養(yǎng)基EM(EnrichmentMedium):海生菌肉湯2216培養(yǎng)基
[0046] 十溴聯(lián)苯醚降解培養(yǎng)基：lOOmL MMC培養(yǎng)基+微量元素
[0047] 赤紅球菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127增殖培養(yǎng)：在無(wú)菌的條件下，將赤紅球 菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127接種到裝有500mL海水肉湯培養(yǎng)（2216)的1L的滅菌 錐形瓶中，置于恒溫?fù)u床內(nèi)，28°C、160rpm，培養(yǎng)48h。
[0048] 取富集培養(yǎng)的菌液于500mL的滅菌離心瓶中，在以6000r/min的轉(zhuǎn)速離心10min。 之后用無(wú)菌生理鹽水反復(fù)洗滌并離心2-3次，配成一定濃度的菌懸液，將菌懸液接種到十 溴聯(lián)苯醚降解培養(yǎng)基中，十溴聯(lián)苯醚的濃度為50mg/L。錐形瓶用錫紙包裹，避免光照對(duì)實(shí)驗(yàn) 影響。樣品經(jīng)GC-MS測(cè)定，分析赤紅球菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127對(duì)十溴聯(lián)苯釀的 降解效果。
[0049] GC-MS型號(hào)及參數(shù)設(shè)置：
[0050]型號(hào)：GC-MSD。
[0051]色譜柱：超高惰性GC毛細(xì)管柱，DB-5MSn(15mX0. 250_X0. 25ym)、貨號(hào) 122-5512UI，美國(guó)安捷倫公司。
[0052] 儀器工作條件：進(jìn)樣口溫度：290°C;進(jìn)樣方式：脈沖不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1yL; 流量及模式：lmL/min、恒流模式；四級(jí)桿溫度：150°C;離子源溫度：250°C;程序升溫：初始 溫度 120°C、保持 2min，40°C/min升到 250°C，10°C/min升到 310°C，保留 10min。
[0053] 十溴聯(lián)苯醚出峰時(shí)間：濃度為50mg/L的十溴聯(lián)苯醚標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)計(jì)量科學(xué) 研宄院，標(biāo)物編號(hào)GBW08709)上機(jī)檢測(cè)，得到十溴聯(lián)苯醚總離子流圖（如圖2)，其保留時(shí)間 為17. 834s。十溴聯(lián)苯醚的特征離子的質(zhì)荷比有207、398、797、959等（如圖3)，其中選定 398作為定量離子。
[0054] 十溴聯(lián)苯醚工作曲線制作：配制濃度為30、40、50、60、80mg/L的十溴聯(lián)苯醚-二 氯甲烷標(biāo)準(zhǔn)溶液，繪制十溴聯(lián)苯醚濃度-峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，此標(biāo)準(zhǔn)曲線為7 = 4109.^_ 69881，R2= 0. 9991。
[0055] 赤紅球菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127對(duì)十溴聯(lián)苯醚的降解率：以不接 種赤紅球菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127的培養(yǎng)基作為對(duì)照組，以接種赤紅球菌 (Rhodococcusruber)TAW-CT127(接菌量約為3g/L)的培養(yǎng)基作為實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照 組均設(shè)置3個(gè)平行樣。置于恒溫?fù)u床中，28°C、160r/min震蕩培養(yǎng)8d。利用GC-MS檢測(cè)實(shí) 驗(yàn)組和對(duì)照組中十溴聯(lián)苯醚并通過(guò)十溴聯(lián)苯醚工作曲線計(jì)算出十溴聯(lián)苯醚的殘留量。赤紅 球菌（Rhodococcusruber)TAW-CT127對(duì)十漠聯(lián)苯釀的8天降解率為91%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 赤紅球菌（Rhodococcus ruber)TAW_CT127,已于2015年4月8日保藏于中國(guó)典型 培養(yǎng)物保藏中心，保藏中心保藏編號(hào)為CCTCC NO. M 2015212。
2. 如權(quán)利要求1所述赤紅球菌（Rhodococcus ruber) TAW-CT127在制備十溴聯(lián)苯醚降 解劑中應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求1所述赤紅球菌（Rhodococcus ruber) TAW-CT127的富集篩選方法，其 特征在于具體方法為：采用等濃度添加污染物作為其生長(zhǎng)的唯一碳源，在人工海水培養(yǎng)基 MMC中加入十溴聯(lián)苯醚-二氯甲烷溶液及微量元素，十溴聯(lián)苯醚濃度為100mg/L，pH7. 4 ;該 菌落為圓形，邊緣規(guī)則整齊，粉紅色，光滑，濕潤(rùn)，凸起；菌體呈微桿狀，革蘭氏染色陰性；所 述人工海水培養(yǎng)基 MMC 的組成為：NaCl 24g/L，NH4NO3 lg/L，KCl 0.7g/L，KH2PO4 2. Og/L， Na2HPO4 3. Og/L，pH 7· 4, MgSO4 7g/L ;所述微量元素為 CaCl 2mg/L，F(xiàn)eCl3 · 6H20 50mg/L， CuSO4 0· 5mg/L，MnCl2 ·· H2O 0· 5mg/L，ZnSO4 ·· 7H20 10mg/L。
4. 如權(quán)利要求2所述應(yīng)用，其特征在于采用由赤紅球菌（Rhodococcus ruber) TAW-CT127制備的十溴聯(lián)苯醚降解劑的降解方法為：將赤紅球菌（Rhodococcus ruber) TAW-CT127接種于十溴聯(lián)苯醚為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中，避光條件下置于搖床中富集培 養(yǎng)；降解條件為PH7. 4,溫度為28°C，搖床的轉(zhuǎn)動(dòng)速率為160rpm。
【專(zhuān)利摘要】一種赤紅球菌及其在制備十溴聯(lián)苯醚降解劑中的應(yīng)用，涉及微生物應(yīng)用。赤紅球菌(Rhodococcus ruber)TAW-CT127，保藏編號(hào)為CCTCC NO.M 2015212。赤紅球菌(Rhodococcus ruber)TAW-CT127可在制備十溴聯(lián)苯醚降解劑中的應(yīng)用。十溴聯(lián)苯醚降解培養(yǎng)基中十溴聯(lián)苯醚為唯一碳源。赤紅球菌(Rhodococcus ruber)TAW-CT127在pH7.4，28℃，搖床的轉(zhuǎn)動(dòng)頻率為160rpm，在以十溴聯(lián)苯醚為唯一碳源的降解培養(yǎng)基中培養(yǎng)8天，該菌對(duì)十溴聯(lián)苯醚的降解率達(dá)到91％。CCTCC NO.M 201521220150408
【IPC分類(lèi)】A62D3-02, C12N1-20, C12R1-01
【公開(kāi)號(hào)】CN104830738
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510266695
【發(fā)明人】趙苒, 蔡慶濤, 范春, 王萬(wàn)鵬, 王碧, 郭東北, 王娟, 閆雙雙, 劉敏, 劉安然, 胡東
【申請(qǐng)人】廈門(mén)大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月22日