°c)、PCR擴增穩(wěn)定性 好、擴增產(chǎn)物亮度強、電泳檢測時分辨率高等多種優(yōu)點。該標記不僅能追蹤小麥6AS、6DS 染色體，擴增產(chǎn)物大小分別為456bp和394bp，還能在小麥背景中區(qū)分小麥-簇毛麥易位系 T6VS. 6AL (/^^7基因）和易位系T6VS. 6DL ( /?堪因）中的6VS染色體，擴增產(chǎn)物大小分別 為341bp和271bp，并且能區(qū)分這兩個易位系是純合體、還是雜合體。本發(fā)明公布的分子標 記6VS-BH1集諸多優(yōu)點于一身，是目前已開發(fā)的6VS標記無法比擬的。因此，本發(fā)明為抗白 粉病小麥-簇毛麥T6VS. 6AL易位系在小麥抗白粉病新品種的分子標記輔助育種提供了一 種新型、實用、高效的6VS染色體分子標記。
【附圖說明】
[0012] 圖1 :多序列比對后引物設(shè)計示意圖；箭頭所示為根據(jù)長度多態(tài)區(qū)域兩側(cè)的保守 序列設(shè)計的引物所在位置。
[0013] 圖2 :分子標記6VS-BH1的PCR擴增結(jié)果；其中，M:DNA marker，l-14 :中國春，揚麥 16，揚麥 19，N6AT6D，N6BT6D，N6DT6A，簇毛麥（英國劍橋植物園），硬簇麥，DS6V(6A)，92R137， 揚麥18,簇毛麥(前蘇聯(lián))，Pm97033,揚麥22 ;其中，92R137和揚麥18均為易位系T6VS. 6AL， Pm97033和揚麥22均為易位系T6VS. 6DL。
[0014] 圖3 :分子標記6VS-BH1在易位系T6VS. 6AL (/feW基因）中的應(yīng)用；其中，M :DNA marker，1-26 :F2群體單株。
[0015] 圖4 :分子標記6VS-BH1在易位系T6VS. 6DL (/?堪因）中的應(yīng)用；其中，M :DNA marker，1-26 :F2群體單株。
【具體實施方式】
[0016] 在本發(fā)明中所使用的術(shù)語，除非有另外說明，一般具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常 理解的含義。下面結(jié)合具體的實施例，并參照數(shù)據(jù)進一步詳細地描述本發(fā)明。這些實施例 只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0017] 實施例1:引物的設(shè)計與合成 首先以位于6VS染色體上的抗白粉病基因 泣/^-K (GeneBank登錄號：HQ864471)進 行BLAST，找到麥類模式植物二穗短柄草中的同源基因 Bradi3g04940 (GeneBank登錄號： XM_003575353, GeneID :100840649)。以二穗短柄草中的同源基因 fcadi3g04940 為中心， 從NCBI網(wǎng)站（http://www. ncbi. nlm. nih. gov)獲取其上下游序列，在小麥基因組（http:// wheat-urgi. Versailles, inra. fr)中進行BLAST分析，獲取位于小麥第六部分同源群短臂 上（6AS、6BS、6DS)的序列，將這些具有同源性的序列進行多序列比對分析，根據(jù)比對結(jié)果中 具長度多態(tài)性區(qū)域的兩側(cè)保守序列設(shè)計5對特異性引物(見圖1，表1)，引物由上海捷瑞生 物工程有限公司合成。
[0018] 表1本發(fā)明設(shè)計的引物
【主權(quán)項】
1. 一種簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1，其特征在于：該分子標記引物序列 為： 6VS-BH1F :5' -GCCATTATAGTCAAGAGTGCACTAGCTGT-3'（SEQ ID NO. 1)， 6VS-BHlR:5'-AGCTCCTCTCGTTCTCCAATGCT-3'（SEQ ID N0.2)。
2. 權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1在追蹤小麥6AS、6DS 染色體中的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1在小麥背景中區(qū)分小 麥-簇毛麥易位系T6VS. 6AL (/?泛7基因）和易位系T6VS. 6DL ( /??因）中的6VS染色體 中的應(yīng)用。
4. 權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1在在區(qū)分小麥-簇毛 麥易位系T6VS. 6AL (/^^7基因）和易位系T6VS. 6DL ( /?堪因）是純合體還是雜合體中的 應(yīng)用。
5. -種用權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1追蹤小麥-簇 毛麥T6VS. 6AL易位系的方法，其特征在于，用該分子標記引物對待測材料進行PCR擴增，擴 增出341bp條帶的材料為含有小麥-簇毛麥T6VS. 6AL易位染色體的材料。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標 記6VS-BH1追蹤小麥-簇毛麥T6VS. 6AL易位系的方法，其特征在于，用該分子標記引物對 待測材料進行PCR擴增，同時呈現(xiàn)394bp/341bp雙帶的單株為易位系T6VS. 6AL純合體，同 時呈現(xiàn)456bp/394bp/341bp三帶的單株為易位系T6VS. 6AL雜合體。
7. -種用權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1追蹤小麥-簇 毛麥T6VS. 6DL易位系的方法，其特征在于，用該分子標記引物對待測材料進行PCR擴增，擴 增出271bp條帶的材料為含有小麥-簇毛麥T6VS. 6DL易位染色體的材料。
8. -種用權(quán)利要求1所述的簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1追蹤小 麥-簇毛麥T6VS. 6DL易位系的方法，其特征在于，用該分子標記引物對待測材料進行 PCR擴增，其中同時呈現(xiàn)456bp/271bp雙帶的單株為易位系T6VS. 6DL純合體，同時呈現(xiàn) 456bp/394bp/271bp三帶的單株為易位系T6VS. 6DL雜合體。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種簇毛麥6VS染色體特異性分子標記6VS-BH1及其用途，屬于分子生物學和遺傳育種科學技術(shù)領(lǐng)域；本發(fā)明所述標記引物6VS-BH1是借助麥類-二穗短柄草比較基因組學手段開發(fā)，具體序列為6VS-BH1F：如SEQ ID NO.1所示，6VS-BH1R：如 SEQ ID NO.2所示。分子標記6VS-BH1具有退火溫度寬泛（60℃-66℃）、穩(wěn)定性好、產(chǎn)物亮度強、分辨率高等多種優(yōu)點。分子標記6VS-BH1是一個共顯性標記，不僅能有效追蹤小麥背景中的簇毛麥6VS染色體，還能區(qū)分純合體和雜合體，而且能區(qū)分攜帶Pm21基因的易位系T6VS.6AL和攜帶PmV基因的易位系T6VS.6DL。因此，本發(fā)明公布的分子標記6VS-BH1在小麥抗白粉病分子標記輔助選擇育種及Pm21基因和PmV基因的聚合育種中具有重要的實用價值。
【IPC分類】C12N15-11, C12Q1-68
【公開號】CN104877996
【申請?zhí)枴緾N201510235745
【發(fā)明人】何華綱, 朱姍穎, 岑波, 汪峰, 別同德
【申請人】江蘇大學
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月12日