夠在單位時(shí)間 獲得較多的培養(yǎng)基，在本發(fā)明實(shí)施例中，在步驟30(當(dāng)細(xì)胞層的厚度達(dá)到時(shí)、或各 第一溝道被從細(xì)胞層脫落的細(xì)胞填滿時(shí)，在細(xì)胞層中形成第二溝道）后，還包括：
[0042] 步驟40、當(dāng)各第一溝道和各第二溝道被從細(xì)胞層脫落的細(xì)胞填滿時(shí)，在細(xì)胞層中 形成多條第三溝道，各第三溝道中儲(chǔ)存有培養(yǎng)基。通過該步驟，使得在第一溝道和第二溝道 被從細(xì)胞層脫落的細(xì)胞填滿時(shí)，細(xì)胞層中的表層細(xì)胞能夠繼續(xù)從第三溝道中獲得培養(yǎng)基， 從而得以繼續(xù)旺盛地生長。此外，由于在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間過長時(shí)，第三溝道也可能被細(xì)胞層脫 落的細(xì)胞填滿，因此，以此類推，可繼續(xù)在細(xì)胞層中形成第四溝道和第五溝道等，從而在細(xì) 胞的固定化培養(yǎng)的整個(gè)過程中，使表層細(xì)胞得以旺盛地生長，進(jìn)而進(jìn)一步提高細(xì)胞的固定 化培養(yǎng)的產(chǎn)量。與第二溝道相同，第三溝道、第四溝道和第五溝道的形狀可為長條形、圓形 和多邊形等，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)細(xì)胞層中細(xì)胞聚集區(qū)域的分布情況設(shè)置第三溝道、第 四溝道和第五溝道的位置和形狀。
[0043] 進(jìn)一步地，在本發(fā)明實(shí)施例中，第二溝道的寬度大于第一溝道的寬度，第三溝道的 寬度大于第二溝道的寬度，這是由于隨著細(xì)胞層中的細(xì)胞的生長，表層細(xì)胞越來越多，其生 長所需要的培養(yǎng)基也隨之增加，因此，較晚形成的第二溝道需要比較早形成的第一溝道更 寬，以儲(chǔ)存更多的培養(yǎng)基，從而使得細(xì)胞層中的表層細(xì)胞能夠從第二溝道中獲得足夠的培 養(yǎng)基。出于同樣的目的，第三溝道的寬度也要大于第二溝道的寬度。
[0044] 具體地，由于上述內(nèi)容已經(jīng)提到，第一溝道在細(xì)胞的固定化培養(yǎng)的初期（即細(xì)胞 層厚度小于Imm時(shí)）形成，此時(shí)接種在支撐層上的細(xì)胞數(shù)量較少，若第一溝道過寬，則形成 第一溝道的過程將導(dǎo)致接種在支撐層上的細(xì)胞大量脫落，進(jìn)而影響細(xì)胞的固定化培養(yǎng)的產(chǎn) 量，因此，在本發(fā)明實(shí)施例中，使第一溝道具有較小的寬度，以避免對(duì)細(xì)胞的固定化培養(yǎng)的 產(chǎn)量造成影響，例如，第一溝道的寬度為1_-2_即可。另一方面，隨著固定化培養(yǎng)的進(jìn)行， 細(xì)胞層中的表層細(xì)胞增多，其在單位時(shí)間內(nèi)所需的培養(yǎng)基也隨之增加，從而需要寬度較大 的第二溝道和第三溝道，以確保表層細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)獲得足夠的培養(yǎng)基。例如，第二溝道 和第三溝道的寬度可為2mm-5mm?？梢岳斫獾氖牵谝粶系?、第二溝道及第三溝道各自的寬 度，并不限于上述范圍，本領(lǐng)域技術(shù)人員可綜合考慮第一溝道、第二溝道及第三溝道所占據(jù) 的養(yǎng)殖面積，以及細(xì)胞層中表層細(xì)胞的生長所需的培養(yǎng)基的量，對(duì)第一溝道、第二溝道及第 三溝道的寬度進(jìn)行設(shè)置。
[0045] 進(jìn)一步地，在上述內(nèi)容已經(jīng)提及，根據(jù)固定化培養(yǎng)的細(xì)胞的不同，細(xì)胞層中的細(xì)胞 的密集程度也不同，因此，對(duì)于不同的細(xì)胞，單位培養(yǎng)面積內(nèi)的表層細(xì)胞所需的培養(yǎng)基的量 也存在不同，從而為了在任意細(xì)胞的固定化培養(yǎng)過程中，均能夠確保細(xì)胞層中的表層細(xì)胞 在單位時(shí)間內(nèi)獲得較多的培養(yǎng)基，在本發(fā)明實(shí)施例中，平行且相鄰的第一溝道之間的距離、 平行且相鄰的第二溝道之間的距離、平行且相鄰的第三溝道之間的距離、平行且相鄰的第 一溝道和第二溝道之間的距離、平行且相鄰的第一溝道和第三溝道之間的距離、以及平行 且相鄰的第二溝道和第三溝道之間的距離為2cm-50cm。
[0046] 具體地，對(duì)于細(xì)胞的密集程度較高的細(xì)胞層，可使上述各距離較小，從而使得單 位培養(yǎng)面積內(nèi)流過的培養(yǎng)基較多，例如，若細(xì)胞層的上表面為邊長為Im的正方形，第一溝 道、第二溝道和第三溝道均為長條狀，則可在細(xì)胞層上形成共計(jì)51條相互平行且相鄰的第 一溝道、第二溝道和第三溝道，其中，相鄰的第一溝道、第二溝道或第三溝道之間的距離為 2cm。此外，由于上述已經(jīng)提及，隨著固定化培養(yǎng)的進(jìn)行，細(xì)胞層中表層細(xì)胞逐漸增多，則單 位面積內(nèi)所需的培養(yǎng)基的量也逐漸增加，因此，一般而言，平行且相鄰的第一溝道之間的距 離大于平行且相鄰的第二溝道之間的距離，平行且相鄰的第二溝道之間的距離大于平行且 相鄰的第三溝道之間的距離。通過上述設(shè)置，能夠確保在細(xì)胞的固定化培養(yǎng)的任意時(shí)期，表 層細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)獲得足夠的培養(yǎng)基。
[0047] 為了證明本發(fā)明實(shí)施例確實(shí)具有提尚細(xì)胞的固定化養(yǎng)殖的廣量的效果，本申請(qǐng)的 發(fā)明人還進(jìn)行了如下對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
[0048] 對(duì)比實(shí)驗(yàn)1
[0049] 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均對(duì)柵藻細(xì)胞進(jìn)行固定化培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組中附著于支撐層的柵藻細(xì) 胞層中形成有第一溝道和第二溝道，對(duì)照組中附著于支撐層的細(xì)胞層中未形成溝道。
[0050] (1)搭建固定化養(yǎng)殖平臺(tái)：
[0051] 在長X寬為ImX lm、厚為5cm的有機(jī)玻璃板上平鋪與有機(jī)玻璃板大小相同的無紡 布，以該無紡布作為支撐層，然后將該有機(jī)玻璃板連同其上的無紡布豎直放置（同時(shí)采取 措施防止無紡布脫落），在無紡布與有機(jī)玻璃板之間、從兩者上部不斷滴加培養(yǎng)基，培養(yǎng)基 自另一端留下，落入位于有機(jī)玻璃板下方的水槽內(nèi)，該水槽為培養(yǎng)基儲(chǔ)存容器，設(shè)置潛水泵 以及循環(huán)管線，構(gòu)成培養(yǎng)基輸送裝置，使得培養(yǎng)基能夠循環(huán)浸潤無紡布（實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 各設(shè)置一套上述固定化養(yǎng)殖平臺(tái)）。
[0052] (2)接種柵藻細(xì)胞及形成第一溝道：
[0053] 將相同濃度的柵藻藻液（包括培養(yǎng)基和柵藻細(xì)胞）分別噴灑在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的 無紡布上，分別形成柵藻細(xì)胞層；在培養(yǎng)基儲(chǔ)存容器中的培養(yǎng)基內(nèi)通入二氧化碳與空氣的 混合氣體，其中二氧化碳?xì)怏w的體積分?jǐn)?shù)為2%，并通過曝氣石對(duì)該混合氣體進(jìn)行分散，促 進(jìn)該混合氣體的溶解；采用熒光燈對(duì)附著于無紡布表面的細(xì)胞層進(jìn)行持續(xù)光照；
[0054] 實(shí)驗(yàn)組：在接種后，在附著于支撐層的柵藻細(xì)胞層中，使用塑料片劃出多條長條狀 的第一溝道，其中部分第一溝道的延伸方向與培養(yǎng)基在柵藻細(xì)胞層中的流動(dòng)方向一致，其 余部分的第一溝道的延伸方向與培養(yǎng)基在柵藻細(xì)胞層中的流動(dòng)方向垂直，從而在柵藻細(xì)胞 層中形成網(wǎng)格狀的第一溝道；開始對(duì)柵藻細(xì)胞層中的柵藻細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
[0055] 對(duì)照組：不進(jìn)行處理，按照上述條件開始培養(yǎng)。
[0056] (3)培養(yǎng)2天后，在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的細(xì)胞層厚度均增加至Imm時(shí)，形成第二溝 道：
[0057] 實(shí)驗(yàn)組：在柵藻細(xì)胞層中，使用塑料片劃出多條圓形的第二溝道，第二溝道環(huán)繞柵 藻細(xì)胞層中柵藻細(xì)胞較為密集的區(qū)域，同時(shí)與多條第一溝道交叉，；繼續(xù)對(duì)柵藻細(xì)胞進(jìn)行培 養(yǎng)；
[0058] 對(duì)照組：不進(jìn)行處理，繼續(xù)按照上述條件對(duì)柵藻細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
[0059] 繼續(xù)培養(yǎng)3天，該實(shí)驗(yàn)共計(jì)培養(yǎng)5天，采收柵藻細(xì)胞層中的所有柵藻細(xì)胞，將采收 得到的柵藻細(xì)胞烘干，測定烘干后的柵藻細(xì)胞的質(zhì)量。
[0060] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0061] 在對(duì)比實(shí)驗(yàn)1中，實(shí)驗(yàn)組中附著于無紡布上的柵藻細(xì)胞層中形成有第一溝道和第 二溝道，對(duì)照組中附著于無紡布上的柵藻細(xì)胞層中未形成有溝道。參照表1，實(shí)驗(yàn)組的產(chǎn)量 比對(duì)照組的產(chǎn)量高31 %。上述結(jié)果說明，通過在柵藻細(xì)胞層中形成第一溝道和第二溝道，使 得在柵藻細(xì)胞的固定化培養(yǎng)過程中，即使柵藻細(xì)胞層的厚度逐漸變大導(dǎo)致表層細(xì)胞距離支 撐層較遠(yuǎn)，也能夠使得表層細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)獲得較多的培養(yǎng)基，從而使得柵藻細(xì)胞培養(yǎng) 的平均產(chǎn)量得到提高。
[0062] 表 1
[0063]
[0064] 對(duì)比實(shí)驗(yàn)2
[0065] (1)搭