IgG馨合物的制備方法，包括W下步驟：
[0060]A)鑲與IgG的馨合反應(yīng)；在人源的IgG或按照生物學(xué)方法重組的IgG中加入鑲離 子進(jìn)行馨合反應(yīng)，得到反應(yīng)溶液；
[0061]B)純化鑲-IgG馨合物的提?。徊捎妹庖哂H和層析法，去除反應(yīng)溶液中未反應(yīng)的 IgGW及多余的鑲離子，即得鑲-IgG馨合物，具體步驟如下：
[0062] (1)溶解樣品；向經(jīng)過步驟A)得到的反應(yīng)溶液中加入生理鹽水，使鑲-IgG馨合物 復(fù)溶
[006引 似平衡層析柱；使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與IgG特 異性結(jié)合的填料，裝柱后，繼續(xù)使用稀釋緩沖液平衡層析柱；
[0064] 做上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟（1)中樣品，然后上柱，IgG與 填料特異性結(jié)合；
[0065] (4)洗脫；使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0. 05-0.Imol/L的磯 酸鹽溶液進(jìn)行洗脫；
[0066] (5)收集；收集經(jīng)過步驟（4)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復(fù)性；
[0067](6)透析；將步驟巧）中的收集的洗脫液，裝透析袋，用d地2〇透析除鹽，換水S次 后，4°C透析過夜，收集樣本；
[0068] (7)平衡層析柱；采用新的層析柱，用稀釋緩沖液沖洗管路，在該層析柱中裝入能 與鑲特異性結(jié)合的填料，裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱；
[006引做上樣；待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟做中樣本，然后上柱；
[0070] (9)洗脫；使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0. 5-1.Omol/L的磯 酸鹽溶液進(jìn)行洗脫；
[0071] (10)收集；收集經(jīng)過步驟（9)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復(fù)性；
[007引（11)透析；將步驟（10)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用(1化0透析除鹽，換水立 次后，4°C透析過夜，收集樣本，即得鑲-IgG馨合物；
[0073]C)對(duì)鑲-IgG馨合物的鑒定，具體步驟如下；
[0074] (1)制備膠床；W瓊脂糖凝膠、聚丙締酷胺凝膠中的一種作為介質(zhì)制備膠床；
[00巧](2)加樣；取步驟B)中提取純化得到的鑲-IgG馨合物，加入稀釋緩沖液，并混勻， 然后加樣于樣品槽中；
[007引做電泳：連接電泳板，進(jìn)行電泳；
[0077] (4)檢測；在膠床上找出含鑲的蛋白條帶，將該蛋白條帶取出，將蛋白條帶復(fù)溶， 然后再采用ICP-MS法、AAS法或化ISA法檢測是否含有鑲W及檢測鑲的含量。
[0078] 本發(fā)明還提供一種至少包括如上述的鑲-IgG馨合物作為對(duì)照品的試劑盒。
[0079] 優(yōu)選地，該試劑盒中還包括包被液，該包被液含有可捕獲IgG的蛋白或可捕獲金 屬鑲的物質(zhì)。
[0080] 在本發(fā)明中，能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的試劑盒可W列出W下幾種，但并不限于此。
[0081] 一種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：含有可捕獲IgG的蛋白的包被液、 封閉液、洗漆液、作為二抗的可捕獲鑲的物質(zhì)、酶標(biāo)抗體、底物、終止液、稀釋緩沖液、上樣緩 沖液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0082] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：含有可捕獲IgG的蛋白的包被液、 封閉液、洗漆液、洗脫液、上樣緩沖液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0083] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：含有可捕獲IgG的蛋白的包被液、 封閉液、洗漆液、洗脫液、上樣緩沖液、酸化劑、過氧化氨、標(biāo)準(zhǔn)品、陰性對(duì)照等。
[0084] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：作為提純?nèi)蠭gG所需提取試 劑、復(fù)溶液、含有可捕獲鑲的物質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆液、酶標(biāo)抗體、底物、終止液、稀釋 緩沖液、上樣緩沖液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0085] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：作為提純?nèi)蠭gG所需提取試 劑、復(fù)溶液、上樣緩沖液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0086] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：作為提純?nèi)蠭gG所需提取試 劑、上樣緩沖液、復(fù)溶液、酸化劑、過氧化氨、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0087] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：含有可捕獲IgG的蛋白的包被液、 膠床介質(zhì)、復(fù)溶液、上樣緩沖液、溶解膠床上含鑲的蛋白條帶所需液體、含有可捕獲鑲的物 質(zhì)的包被液、封閉液、洗漆液、酶標(biāo)抗體、底物、終止液、稀釋緩沖液、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。 [008引一種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：作為提純?nèi)蠭gG所需提取試 劑、膠床介質(zhì)、復(fù)溶液、上樣緩沖液、溶解膠床上含鑲的蛋白條帶所需液體、陽性對(duì)照、陰性 對(duì)照等。
[0089] -種檢測血樣中鑲-IgG馨合物的試劑盒，包括：作為提純?nèi)蠭gG所需提取試 劑、膠床介質(zhì)、復(fù)溶液、上樣緩沖液、溶解膠床上含鑲的蛋白條帶所需液體、酸化劑、過氧化 氨、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照等。
[0090] 上述幾種試劑盒中，所述陽性對(duì)照為標(biāo)準(zhǔn)品，即馨合有重金屬鑲的IgG馨合物或 馨合有重金屬鑲的BSA馨合物；所述陰性對(duì)照為稀釋緩沖液。
[0091] 上述試劑盒用于檢測馨合鑲的IgG,W提高檢測的準(zhǔn)確性，重復(fù)性，并使之在臨床 中得到推廣。
[0092] 本發(fā)明還提供一種定量檢測鑲-IgG馨合物的方法，W已知含量的上述的鑲-IgG 馨合物作為對(duì)照品，采用W下方法之一對(duì)樣品進(jìn)行檢測；酶聯(lián)免疫法、酶聯(lián)免疫與原子吸收 光譜結(jié)合法、酶聯(lián)免疫與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法、提純鑲-IgG馨合物與酶聯(lián)免疫結(jié) 合法、提純鑲-IgG馨合物與原子吸收光譜結(jié)合法、提純鑲-IgG馨合物與電感禪合等離子體 質(zhì)譜結(jié)合法、電泳與酶聯(lián)免疫或原子吸收光譜或電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法。在本發(fā)明 中，用檢測鑲馨合型免疫復(fù)合物的方法可W列出的有W下幾種，但并不限于W下幾種。
[0093] 其中，上述定量檢測鑲-IgG馨合物的方法中采用的試劑如下：
[0094] 立法二^酶聯(lián)免疫法巧LISA法）檢測鑲-IgG馨合物，按照如下步驟檢測：
[0095] 1)將能夠捕獲IgG的物質(zhì)，如人IgG抗體包被于固相載體上；用稀釋緩沖液稀釋 抗IgGAb至500000-4000000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過夜16-18小時(shí)，或37°C水浴 1-3小時(shí)，儲(chǔ)存冰箱；
[0096] 2)從循環(huán)系統(tǒng)取全血，作待檢樣品，lOOOrmp離屯、5-8分鐘，離屯、棄去沉淀；
[0097] 3)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5% 牛血清白蛋白或脫脂奶粉作為封閉液，37°C放置1小時(shí)，移去封閉液，并用洗漆液進(jìn)行洗 漆，洗漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小時(shí)；
[009引 4)加待檢樣品，并且溫育；加入步驟。中的待檢樣品、W已知含量的鑲-IgG馨合 物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋待檢樣品稀釋至相應(yīng)倍數(shù)，即稀釋10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小時(shí)；
[009引W加入可W捕獲鑲的物質(zhì)，并且溫育；移去待檢樣品，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗 漆完成后，加入用稀釋緩沖液稀釋與可W捕獲鑲的物質(zhì)或能與鑲反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物 的抗NiAb，37°C作用1-2小時(shí)，使抗NiAb與IgG上的金屬鑲反應(yīng)；
[0100] 6)酶結(jié)合物溫育；移去抗鑲抗體，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入用稀 釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)抗體，使稀釋的酶標(biāo)抗體的濃度為2yg/ml，37°C作用1-2小時(shí)，使其 與酶標(biāo)抗體反應(yīng)；
[0101] 7)底物溫育；移去酶標(biāo)抗體，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入底物， 37°C避光作用30分鐘；
[0102] 8)終止反應(yīng)；滴加終止液至每一微孔；
[0103] 9)取波長405皿，加完終止液后，將化ISA板置于酶標(biāo)儀上分別讀取待檢樣品組和 標(biāo)準(zhǔn)品的0D值，通過標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得待檢樣品的含量（也可不使用酶標(biāo)儀，直接 通過染色情況進(jìn)行定性檢測）。
[0104] 該方法利用化ISA原理，可W將全血中的特異性IgG提取出來，提取出來的IgG上 部分馨合有重金屬鑲，而該部分IgG上的鑲可W被抗鑲的特異性抗體所捕獲，之后可W再 被辣根過氧化物酶、堿性磯酸酶等酶標(biāo)記的抗體所捕獲（該抗體不識(shí)別包被蛋白），捕獲上 的抗體在顯色劑及終止液的作用下，可W在儀器下讀出0D值，而不含有馨合金屬鑲的IgG， 則不會(huì)被抗鑲的特異性抗體所捕獲，也不會(huì)與辣根過氧化物酶、堿性磯酸酶等酶標(biāo)記的抗 體所捕獲，而所用試劑中也不含有金屬鑲（陰性對(duì)照組結(jié)果為陰性），因而當(dāng)所讀取的0D值 結(jié)果顯示為陽性時(shí)，即可證明檢測出IgG上馨合的金屬鑲。
[0105] 方法二：酶聯(lián)免疫與原子吸收光譜結(jié)合法巧LISA法+AAS法）檢測鑲-IgG馨合物 按照如下步驟檢測：
[0106] 1)將能夠捕獲IgG的物質(zhì)，如人IgG抗體包被于固相載體上；用稀釋緩沖液稀釋 抗IgGAb至500000-4000000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過夜16-18小時(shí)，或37°C水浴 1-3小時(shí)，儲(chǔ)存冰箱；
[0107] 2)從循環(huán)系統(tǒng)取全血，作待檢樣品，100化pm離屯、5-8分鐘，離屯、棄去沉淀；
[0108] 3)封閉；移去包被液，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5%牛血 清白蛋白或脫脂奶粉作為封閉液，37°C放置1小時(shí)，移去封閉液，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，洗 漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小時(shí)；
[0109] 4)加待檢樣品，并且溫育；加入步驟2)中的待檢樣品、W已知含量的鑲-IgG馨合 物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋待檢樣品稀釋至相應(yīng)倍數(shù)，即稀釋10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小時(shí)；
[0110] 5)洗脫；移去待檢樣品，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，用洗脫液洗脫1-3 小時(shí)。
[01川 6)檢測；從ELISA微孔中取樣，于原子吸收光譜儀檢測馨合于IgG上的鑲，并繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線，讀出相應(yīng)數(shù)值；
[0112] 該實(shí)施例利用ELISA原理的基礎(chǔ)上結(jié)合原子吸收光譜（AA巧原理，利用原子吸收 光譜儀檢測馨合于IgG上的鑲，由于溶液中僅含有