IgG，且所用試劑中不含任何重金屬（陰 性對(duì)照組結(jié)果為陰性），不會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾，因而當(dāng)所讀取的結(jié)果顯示為陽(yáng)性時(shí)，即可證 明檢測(cè)出IgG上馨合的金屬鑲。
[0113] 立法三^酶聯(lián)免疫與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法巧LISA法+ICP-MS法）檢測(cè) 鑲-IgG馨合物按照如下步驟檢測(cè)：
[0114] 1)將能夠捕獲IgG的物質(zhì)，如人IgG抗體包被于固相載體上；用稀釋緩沖液稀釋 抗IgGAb至500000-4000000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過(guò)夜16-18小時(shí)，或37°C水浴 1-3小時(shí)，儲(chǔ)存冰箱；
[0115] 2)從循環(huán)系統(tǒng)取全血，作待檢樣品，lOOOrmp離屯、5-8分鐘，離屯、棄去沉淀；
[0116] 3)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5% 牛血清白蛋白或脫脂奶粉作為封閉液，37°C放置1小時(shí)，移去封閉液，并用洗漆液進(jìn)行洗 漆，洗漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小時(shí)；
[0117] 4)加待檢樣品，并且溫育；加入步驟2)中的待檢樣品、W已知含量的鑲-IgG馨合 物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋待檢樣品稀釋至相應(yīng)倍數(shù)，即稀釋10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小時(shí)；
[0118] 5)洗脫；移去待檢樣品，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，用洗脫液洗脫1-3 小時(shí)。
[0119] 6)酸化；在步驟5)中的溶液中加入酸化劑對(duì)溶液進(jìn)行酸化，封口過(guò)夜，徹底酸 化；
[0120] 7)檢測(cè)；加入過(guò)氧化氨，并且加熱趕酸，并從ELISA試劑板中洗脫的溶液中取樣， 于電感禪合等離子體質(zhì)譜儀下檢測(cè)馨合于IgG的鑲，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[012。 該方法在利用ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合感禪合等離子體質(zhì)譜（ICP-M巧原理，用 電感禪合等離子體質(zhì)譜儀檢測(cè)馨合于IgG上的鑲，由于溶液中僅含有IgG,且所用試劑中不 含任何重金屬（陰性對(duì)照組結(jié)果為陰性），不會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾，因而當(dāng)所讀取的結(jié)果顯示 為陽(yáng)性時(shí)，即可證明檢測(cè)出IgG上馨合的金屬鑲。
[0122] 方法四；提純儀-IgG馨合物與酶聯(lián)免疫結(jié)合法（提純法+ELISA法）檢測(cè)鑲-IgG 馨合物，按照如下步驟檢測(cè)：
[0123] 1)從全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速離屯、、分子超濾、凝膠過(guò)濾等 方法采用全血提取法將血液的提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶液；
[0124] 2)將抗NiAb包被于固相載體上；用稀釋緩沖液稀釋抗NiAb至5000-40000倍， 加入化ISA板微孔中，4°C過(guò)夜16-18小時(shí)，或37°C水浴1-3小時(shí)，儲(chǔ)存冰箱；
[0125] 3)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入W1% -5% 牛血清白蛋白或脫脂奶粉作為封閉液，37°C放置1小時(shí)，移去封閉液，并用洗漆液進(jìn)行洗 漆，洗漆完成后，ELISA板于36. 5-37. 5°C放置1-2小時(shí)；
[012引 4)加待檢樣品，并且溫育；從提取的IgG的復(fù)溶液中取樣，作待檢樣品；W已知含 量的鑲-IgG馨合物作標(biāo)準(zhǔn)品；用稀釋緩沖液稀釋相應(yīng)倍數(shù)，即稀釋10-40倍，加入微孔中， 37°C作用1-2小時(shí)；
[0127] 5)酶結(jié)合物溫育：移去IgG的復(fù)溶液，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入 用稀釋緩沖液稀釋的酶標(biāo)抗體，使稀釋的酶標(biāo)抗體的濃度為2yg/ml，，37°C作用1-2小時(shí)， 使其與酶標(biāo)抗體反應(yīng)；
[0128] 6)底物溫育；移去酶標(biāo)抗體，并用洗漆液進(jìn)行洗漆，待洗漆完成后，加入底物， 37°C避光作用30分鐘；
[0129] 7)終止反應(yīng)；滴加終止液至每一微孔；
[0130] 8)取波長(zhǎng)405皿，加完終止液后，將化ISA板置于酶標(biāo)儀上分別讀取待檢樣品組和 標(biāo)準(zhǔn)品的0D值，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品組比較，求得待檢樣品的含量（也可不使用酶標(biāo)儀，直接通過(guò) 染色情況進(jìn)行定性檢測(cè)）。
[0131] 方法節(jié).；提純儀-IgG馨合物與原子吸收光譜結(jié)合法（提純法+AAS法）檢測(cè)血樣 中鑲-IgG馨合物，按照如下步驟檢測(cè)：
[0132] 1)從全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速離屯、、分子超濾、凝膠過(guò)濾等 方法從全血提取法將血液的提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶液；
[0133] 2)檢測(cè)；從步驟1)中的復(fù)溶液中取樣，于原子吸收光譜儀檢測(cè)馨合于IgG上的 鑲，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[0134] 方法六；提純儀-IgG馨合物與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法（提純法+ICP-MS 法）檢測(cè)鑲-IgG馨合物，按照如下步驟檢測(cè)：
[01巧]1)從全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速離屯、、分子超濾、凝膠過(guò)濾等 方法從全血提取法將血液的提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶液；
[0136] 2)酸化；從步驟1)中的復(fù)溶液中取樣，在溶液中加入酸化劑（如硝酸）對(duì)溶液進(jìn) 行酸化，封口過(guò)夜，徹底酸化；
[0137] 扣檢測(cè)；加入過(guò)氧化氨，并且加熱趕酸，并從相應(yīng)溶液中取樣，于電感禪合等離子 體質(zhì)譜儀下檢測(cè)馨合于IgG上的鑲，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[013引方法韋：由泳與酶巧免疫法(電泳法-ELISA法）檢測(cè)鑲-IgG馨合物，按照如下步 驟檢測(cè)：
[0139] 1)從全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速離屯、、分子超濾、凝膠過(guò)濾等 方法從全血提取法將血液的提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶液；
[0140] 2)制備膠床；根據(jù)需要選擇瓊脂糖凝膠或聚丙締酷胺凝膠或SDS-聚丙締酷胺凝 膠等作為介質(zhì)，按照常規(guī)方法制備好相應(yīng)膠床；
[0141] 3)加樣；取步驟1)中的復(fù)溶液8yL加入2yL上樣緩沖液，混勻，短暫離屯、；（注 意此處步驟不能煮）
[0142] 4)電泳；連接電泳板，進(jìn)行電泳分離；
[0143] 5)檢測(cè)；在膠床上找出含有鑲的蛋白條帶，將該條帶取出，將該蛋白條帶復(fù)溶，然 后再利用化ISA原理檢測(cè)溶于液體中的鑲含量。此外，還可W利用此方法檢測(cè)馨合鑲的IgG 的等電點(diǎn)、分子量及含量等。
[0144]方法八：電泳與原子吸收光譜法(電泳法-AAS法）檢測(cè)鑲-IgG馨合物，按照如下 步驟檢測(cè)：
[0145] 1)從全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速離屯、、分子超濾、凝膠過(guò)濾等 方法從全血提取法將血液的提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶液；
[0146] 2)制備膠床；根據(jù)需要選擇瓊脂糖凝膠或聚丙締酷胺凝膠或SDS-聚丙締酷胺凝 膠等作為介質(zhì)，制備好膠床；
[0147] 3)加樣；從步驟1)中的復(fù)溶液中取樣，加入上樣緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品 槽中.
[014引 4)電泳；連接電泳板，進(jìn)行電泳分離；
[0149] 5)檢測(cè)；在膠床上找出含有鑲的蛋白條帶，將該條帶取出，將該蛋白條帶復(fù)溶，然 后再利用AAS原理檢測(cè)溶于液體中的鑲含量。此外，還可W利用此方法檢測(cè)馨合鑲的IgG 的等電點(diǎn)、分子量及含量等。
[0150]方法九：電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法(電泳法-ICP-MS法）檢測(cè)鑲-IgG馨合 物，按照如下步驟檢測(cè)：
[0151] 1)從全血中提取IgG;采用聚己二醇PEG沉淀法、超速離屯、、分子超濾、凝膠過(guò)濾等 方法從全血提取法將血液的提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶液；
[0152] 2)制備膠床；根據(jù)需要選擇瓊脂糖凝膠或聚丙締酷胺凝膠或SDS-聚丙締酷胺凝 膠等作為介質(zhì)，按照相應(yīng)要求制備好相應(yīng)膠床；
[0153] 3)加樣；從步驟1)中的復(fù)溶液中取樣，加入上樣緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品 槽中.
[0154] 4)電泳；連接電泳板，進(jìn)行電泳分離；
[015引W檢測(cè)；在膠床上找出含有鑲的蛋白條帶，將該條帶取出，將該蛋白條帶復(fù)溶，然 后再利用ICP-MS原理檢測(cè)溶于液體中的鑲含量。此外，還可W利用此方法檢測(cè)馨合鑲的 IgG的等電點(diǎn)、分子量及含量等。
[0156] 方法走至九中的IgG可W用多種方法提純出來(lái)（例如超速離屯、法，高壓液相層析 法，凝膠過(guò)濾層析法，凝膠電泳法，ELISA方法等），將提純出來(lái)的IgG復(fù)溶，得到IgG的復(fù)溶 液，取一定量的IgG,利用電荷移動(dòng)原理，進(jìn)行電泳（electro地oresis，E巧，在凝膠板（可根 據(jù)需要采用不同介質(zhì)）上可根據(jù)分子量、等電點(diǎn)等不同跑出不同的條帶，尋找出富含鑲的 相應(yīng)條帶，將凝膠中的蛋白質(zhì)復(fù)溶，即可W在特定波長(zhǎng)下檢測(cè)相關(guān)IgG的含量，也可W利用 ELISA、AAS、ICP-MS等原理檢測(cè)出馨合于IgG上的鑲含量，由于溶液中僅含有IgG,且所用試 劑中不含任何重金屬（陰性對(duì)照組結(jié)果為陰性），不會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾，因而當(dāng)所讀取的結(jié) 果顯示為陽(yáng)性時(shí)，即可證明檢測(cè)出IgG上馨合的金屬鑲。
[0157]連施例1:衡-IgG馨合物的制備方法，包括W下步驟：
[0158]A)鑲與IgG的馨合反應(yīng)；在人源的IgG中加入鑲離子進(jìn)行馨合反應(yīng)，得到反應(yīng)溶 液；
[0159] 試劑配制：
[0160] 1)棚酸鹽緩沖液化OIM);稱(chēng)取0. 31g棚酸溶于400ml超純水中，用0.1 M的化OH 調(diào)節(jié)抑至9. 0,定容至500血。
[016。 2) IgG溶液；稱(chēng)取4. OmgIgG溶于4. 0血0. 01M pH9. 0棚酸鹽緩沖液中，充分振蕩 溶解，配制成1. Omg/mL的蛋白溶液；
[0162] 3)5mmol/L邸TA+200mmol/LNaHC〇3溶液；稱(chēng)取邸TA?2H201.86g、NaHC〇3l6.8g溶 于900血超純水中，用1. OM化OH調(diào)整抑至8.0定容至1000ml，高壓滅菌，室溫保存；
[0163] 4HTCBE(購(gòu)買(mǎi)自日本同仁化學(xué)研究所，貨號(hào)M030)
[0164] 5)透析袋（截留分子量14000)炬ioshop Inc)
[0165] 制備步驟具體為：
[0166] 1)透析袋的處理；將透析袋放入500ml(根據(jù)燒杯體積可變換用量）體積的 5mmol/L邸TA+200mmol/LNaHC〇3溶液中，煮沸l(wèi)Omin;傾棄邸TA/NaHC〇3液，用超