霉素抗原合成，
[0049] (11)、取40mg慶大霉素和12mg牛血清白蛋白溶于1. 5mL PBS，在磁力攪拌器中攪 拌lh得到反應(yīng)液；
[0050] (12)、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于lmL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將 碳化二亞胺鹽酸鹽溶液的pH調(diào)至7. 5,再將步驟（11)得到的反應(yīng)液滴加到碳化二亞胺鹽酸 鹽溶液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液；
[0051] (13)、將步驟（12)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得 到慶大霉素抗原；
[0052] (2)制備含抗體的免疫蛋，
[0053] (21)向30周齡禽類初次注射步驟（1)得到的抗原，免疫劑量為500 y g/只，此后 的18周內(nèi)，每隔3周進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫注射，免疫劑量為250 y g/只；
[0054] (22)收集步驟（21)中禽類所生產(chǎn)的蛋，并做標(biāo)記于4°C保存；
[0055] (3)提取慶大霉素-IgY抗體，
[0056] (31)對(duì)步驟（22)得到的蛋的表面進(jìn)行清洗，烘干后分離卵黃與卵清，收集卵黃， 將lml卵黃使用4ml無菌NaCl水溶液稀釋得到稀釋液，無菌NaCl水溶液的濃度為0. 5W/ V；
[0057] (32)向稀釋液加入3ml質(zhì)量體積比為3. 5%的PEG-6000 (100mL水溶液中含有3. 5 克PEG-6000,以下類推），充分?jǐn)嚢?5分鐘后，置于搖床室溫下?lián)u晃20分鐘得到混合液，其 中；
[0058] (33)將步驟（32)得到的混合液離心，收集上清，過濾，向?yàn)V液中加入1ml質(zhì)量體積 比為6%的PEG-6000,充分?jǐn)嚢?5分鐘，置于搖床室溫下?lián)u晃20分鐘得到混合液；
[0059] (34)將步驟（33)得到的混合液離心，棄去上清液，沉淀使用4ml的無菌NaCl水溶 液懸浮，加入3ml份質(zhì)量體積比為10%的PEG-6000，充分?jǐn)嚢?0分鐘，置于搖床室溫?fù)u晃 20分鐘，再進(jìn)行離心，獲得沉淀物，其中無菌NaCl水溶液的濃度為0. 5W/V ;
[0060] (35)將步驟（34)得到的沉淀物使用1. 2ml的NaCl水溶液溶解得到混合液，先 將混合液用透析帶進(jìn)行透析，再使用1XPBS透析過夜，再用0. 5XPBS透析12h，最后用 0.1 XPBS透析6h，收集透析袋中慶大霉素-IgY抗體即可，其中：
[0061] NaCl水溶液濃度為0? 5W/V ;
[0062] 1XPBS 的 pH = 7. 2 ;
[0063] 0? 5XPBS 的 pH = 7. 4 ;
[0064] 0? 1XPBS 的 pH = 7. 0。
[0065] 慶大霉素-IgY抗體合成的反應(yīng)化學(xué)式如下：
[0066]
[0067] 進(jìn)一步地，步驟（31)中采用0. 01W/V的新潔爾滅清洗清洗步驟（22)得到的蛋。
[0068] 進(jìn)一步地，所述禽類為雞。
[0069] 進(jìn)一步地，慶大霉素-IgY抗體在-20°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0070] 如圖1~2所示，為了進(jìn)一步說明，對(duì)慶大霉素-IgY抗體效價(jià)進(jìn)行測(cè)定：
[0071] (1)包被酶標(biāo)版：用CBS溶液配制蛋白濃度為10 y g/mL的慶大霉素-卵清蛋白溶 液，50 y L/孔加入96孔酶標(biāo)板，37°C溫育過夜，棄去孔內(nèi)液體，用PBST洗板3次，每次5分 鐘；
[0072] (2)封閉：用5%脫脂奶粉，滿孔封閉，37°(：溫育211，棄去孔內(nèi)液體，用？851'洗板3 次，每次5分鐘；
[0073] (3)加IgY提取液：首先每孔加入50 y L PBS鋪底，取出分離純化得到的IgY溶液， 恢復(fù)至室溫后，用稀釋液PBS 1:100稀釋，取50 y L加入第一孔，吹吸混勻后吸取50 y L加 入第二孔，依次倍比稀釋至1:102400?？瞻纂u蛋提取的18￥50 1^為陰性對(duì)照（1〇，卩83 50yL為空白對(duì)照（BC)，37°C溫育lh，棄去孔內(nèi)液體，洗板；
[0074] (4)加酶標(biāo)二抗：辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgY用PBS 1:6000稀釋，每孔加 入50yL，37°C溫育lh，棄去孔內(nèi)液體，洗板；
[0075] (5)顯色：加入新鮮配制的TMB-H202底物液50 y L/孔，室溫避光放置15~20分 鐘，棄去孔內(nèi)液體，洗板；
[0076] (6)終止：最后加入50 y L 2mol/L的H2S0j#止反應(yīng)，在450nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè) 其0D值，每孔重復(fù)三次求平均值；
[0077] (7)結(jié)果判定：求樣品孔0D450值⑵與陰性對(duì)照孔0D450值（N)的比值，當(dāng)P/ N多2. 1時(shí)，判斷為陽性，所對(duì)應(yīng)的抗體最大稀釋倍數(shù)即為該抗體效價(jià)。
[0078] 結(jié)果顯示，抗慶大霉素-IgY在初免20天左右，開始產(chǎn)生抗體，在初免后90天左 右，抗體滴度達(dá)到最高，即1 :1〇2400,停止加強(qiáng)免疫后，抗體效價(jià)仍能維持一個(gè)多月。
[0079] 具體實(shí)施例2
[0080] 慶大霉素抗原合成方法，包括以下步驟：
[0081] (1)、取40mg慶大霉素硫酸鹽和12mg偶聯(lián)載體蛋白溶于1. 5mLPBS，在磁力攪拌器 中攪拌1~4h得到反應(yīng)液；
[0082] (2)、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于lmL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將 碳化二亞胺鹽酸鹽溶液的pH調(diào)至7.5,再將步驟（1)得到的反應(yīng)液滴加到碳化二亞胺鹽酸 鹽溶液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液；
[0083] (3)、將步驟（2)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得到 慶大霉素抗原。
[0084] 進(jìn)一步地，步驟（1)中偶聯(lián)載體蛋白為血藍(lán)蛋白丁二酸酯時(shí)，制備的抗原為免疫 抗原。
[0085] 進(jìn)一步地，步驟（1)中偶聯(lián)載體蛋白為牛血清白蛋白時(shí)，制備的抗原為包被原。
[0086] -種慶大霉素-IgY抗體制備方法，包括以下步驟：
[0087] (1)慶大霉素抗原合成，
[0088] (11)、取40mg慶大霉素和12mg牛血清白蛋白溶于1. 5mL PBS，在磁力攪拌器中攪 拌4h得到反應(yīng)液；
[0089](12)、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于lmL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將 碳化二亞胺鹽酸鹽溶液的pH調(diào)至7. 5,再將步驟（11)得到的反應(yīng)液滴加到碳化二亞胺鹽酸 鹽溶液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液；
[0090] (13)、將步驟（12)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得 到慶大霉素抗原；
[0091] (2)制備含抗體的免疫蛋，
[0092] (21)向30周齡禽類初次注射步驟（1)得到的抗原，免疫劑量為500 y g/只，此后 的18周內(nèi)，每隔3周進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫注射，免疫劑量為250 y g/只；
[0093] (22)收集步驟（21)中禽類所生產(chǎn)的蛋，并做標(biāo)記于4°C保存；
[0094] (3)提取慶大霉素-IgY抗體，
[0095] (31)對(duì)步驟（22)得到的蛋的表面進(jìn)行清洗，烘干后分離卵黃與卵清，收集卵黃， 將lml卵黃使用4ml無菌NaCl水溶液稀釋得到稀釋液，無菌NaCl水溶液的濃度為0. 9W/ V；
[0096](32)向稀釋液加入4ml質(zhì)量體積比為3. 5%的PEG-6000，充分?jǐn)嚢?5分鐘后，置 于搖床室溫下?lián)u晃30分鐘得到混合液，其中；
[0097] (33)將步驟（32)得到的混合液離心，收集上清，過濾，向?yàn)V液中加入2ml質(zhì)量體積 比為9%的PEG-6000,充分?jǐn)嚢?5分鐘，置于搖床室溫下?lián)u晃30分鐘得到混合液；
[0098] (34)將步驟（33)得到的混合液離心，棄去上清液，沉淀使用4ml的無菌NaCl水溶 液懸浮，加入3ml份質(zhì)量體積比為13%的PEG-6000，充分?jǐn)嚢?0分鐘，置于搖床室溫?fù)u晃 30分鐘，再進(jìn)行離心，獲得沉淀物，其中無菌NaCl水溶液的濃度為0. 9W/V ;
[0099] (35)將步驟（34)得到的沉淀物使用1. 2ml的NaCl水溶液溶解得到混合液，先 將混合液用透析帶進(jìn)行透析，再使用1XPBS透析過夜，再用0. 5XPBS透析14h，最后用 0. 1XPBS透析10h，收集透析袋中慶大霉素-IgY抗體即可，其中：
[0100] NaCl水溶液濃度為0? 9W/V ;
[0101] 1XPBS 的 pH = 7. 5 ;
[0102] 0? 5XPBS 的 pH = 7. 4 ;
[0103] 0? 1XPBS 的 pH = 7. 0。
[0104] 進(jìn)一步地，步驟（31)中采用0. 05W/V的新潔爾滅清洗清洗步驟（22)得到的蛋。
[0105] 進(jìn)一步地，所述禽類為雞。
[0106] 進(jìn)一步地，慶大霉素-IgY抗體在-20°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0107] 具體實(shí)施例3
[0108] 慶大霉素抗原合成方法，