包括以下步驟：
[0109] (1)、取40mg慶大霉素硫酸鹽和12mg偶聯(lián)載體蛋白溶于1. 5mL PBS，在磁力攪拌器 中攪拌2h得到反應液；
[0110] (2)、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于lmL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將 碳化二亞胺鹽酸鹽溶液的pH調至7.5,再將步驟（1)得到的反應液滴加到碳化二亞胺鹽酸 鹽溶液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液；
[0111] (3)、將步驟（2)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得到 慶大霉素抗原。
[0112] 進一步地，步驟（1)中偶聯(lián)載體蛋白為血藍蛋白丁二酸酯時，制備的抗原為免疫 抗原。
[0113] 進一步地，步驟（1)中偶聯(lián)載體蛋白為牛血清白蛋白時，制備的抗原為包被原。
[0114]-種慶大霉素-IgY抗體制備方法，包括以下步驟：
[0115] (1)慶大霉素抗原合成，
[0116] (11)、取40mg慶大霉素和12mg牛血清白蛋白溶于1. 5mL PBS，在磁力攪拌器中攪 拌3h得到反應液；
[0117] (12)、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于lmL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將 碳化二亞胺鹽酸鹽溶液的pH調至7. 5,再將步驟（11)得到的反應液滴加到碳化二亞胺鹽酸 鹽溶液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液；
[0118] (13)、將步驟（12)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得 到慶大霉素抗原；
[0119] ⑵制備含抗體的免疫蛋，
[0120] (21)向30周齡禽類初次注射步驟⑴得到的抗原，免疫劑量為500 y g/只，此后 的18周內，每隔3周進行一次加強免疫注射，免疫劑量為250 y g/只；
[0121] (22)收集步驟（21)中禽類所生產的蛋，并做標記于4°C保存；
[0122] (3)提取慶大霉素-IgY抗體，
[0123] (31)對步驟（22)得到的蛋的表面進行清洗，烘干后分離卵黃與卵清，收集卵黃， 將lml卵黃使用4ml無菌NaCl水溶液稀釋得到稀釋液，無菌NaCl水溶液的濃度為0. 7W/ V；
[0124](32)向稀釋液加入3. 5ml質量體積比為3. 5%的PEG-6000，充分攪拌15分鐘后， 置于搖床室溫下?lián)u晃25分鐘得到混合液，其中；
[0125] (33)將步驟（32)得到的混合液離心，收集上清，過濾，向濾液中加入1. 5ml質量體 積比為7%的PEG-6000,充分攪拌15分鐘，置于搖床室溫下?lián)u晃25分鐘得到混合液；
[0126] (34)將步驟（33)得到的混合液離心，棄去上清液，沉淀使用4ml的無菌NaCl水溶 液懸浮，加入3ml份質量體積比為12%的PEG-6000，充分攪拌20分鐘，置于搖床室溫搖晃 25分鐘，再進行離心，獲得沉淀物，其中無菌NaCl水溶液的濃度為0. 7W/V ;
[0127] (35)將步驟（34)得到的沉淀物使用1. 2ml的NaCl水溶液溶解得到混合液，先 將混合液用透析帶進行透析，再使用1XPBS透析過夜，再用0. 5XPBS透析13h，最后用 0.1 XPBS透析8h，收集透析袋中慶大霉素-IgY抗體即可，其中：
[0128] NaCl水溶液濃度為0? 7W/V ;
[0129] 1XPBS 的 pH = 7. 3 ;
[0130] 0? 5XPBS 的 pH = 7. 4 ;
[0131] 0? 1XPBS 的 pH = 7. 0。
[0132] 進一步地，步驟（31)中采用0. 03W/V的新潔爾滅清洗清洗步驟（22)得到的蛋。
[0133] 進一步地，所述禽類為雞。
[0134] 進一步地，慶大霉素-IgY抗體在-20°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0135]上面對本發(fā)明的實施方式做了詳細說明。但是本發(fā)明并不限于上述實施方式，在 所屬技術領域普通技術人員所具備的知識范圍內，還可以在不脫離本發(fā)明宗旨的前提下做 出各種變化。
【主權項】
1. 慶大霉素抗原合成方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 、取40mg慶大霉素硫酸鹽和12mg偶聯(lián)載體蛋白溶于I. 5mLPBS，在磁力攪拌器中攪 拌1~4h得到反應液； (2) 、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于ImL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將碳化 二亞胺鹽酸鹽溶液的PH調至7.5,再將步驟（1)得到的反應液滴加到碳化二亞胺鹽酸鹽溶 液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液； (3) 、將步驟（2)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得到慶大 霉素抗原。2. 根據(jù)權利要求1所述的慶大霉素抗原合成方法，其特征在于，步驟（1)中偶聯(lián)載體蛋 白為血藍蛋白丁二酸酯時，制備的抗原為免疫抗原。3. 根據(jù)權利要求1所述的慶大霉素抗原合成方法，其特征在于，步驟（1)中偶聯(lián)載體蛋 白為牛血清白蛋白時，制備的抗原為包被原。4. 一種慶大霉素-IgY抗體制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 慶大霉素抗原合成， (11) 、取40mg慶大霉素和12mg牛血清白蛋白溶于I. 5mL PBS，在磁力攪拌器中攪拌 1~4h得到反應液； (12) 、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于ImL PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將碳化 二亞胺鹽酸鹽溶液的PH調至7. 5,再將步驟（11)得到的反應液滴加到碳化二亞胺鹽酸鹽溶 液中，并且將混合液在室溫下攪拌lh，然后于5°C放置2天后得到混合液； (13) 、將步驟（12)得到的混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得到慶 大霉素抗原； (2) 制備含抗體的免疫蛋， (21) 向30周齡禽類初次注射步驟（1)得到的抗原，免疫劑量為500 y g/只，此后的18 周內，每隔3周進行一次加強免疫注射，免疫劑量為250 y g/只； (22) 收集步驟（21)中禽類所生產的蛋，并做標記于4°C保存； (3) 提取慶大霉素-IgY抗體， (31) 對步驟（22)得到的蛋的表面進行清洗，烘干后分離卵黃與卵清，收集卵黃，將Iml 卵黃使用4ml無菌NaCl水溶液稀釋得到稀釋液，無菌NaCl水溶液的濃度為0. 5~0. 9W/ V； (32) 向稀釋液加入3~4ml質量體積比為3. 5%的PEG-6000,充分攪拌15分鐘后，置 于搖床室溫下?lián)u晃20~30分鐘得到混合液，其中； (33) 將步驟（32)得到的混合液離心，收集上清，過濾，向濾液中加入1~2ml質量體積 比為6 %~9 %的PEG-6000，充分攪拌15分鐘，置于搖床室溫下?lián)u晃20~30分鐘得到混合 液； (34) 將步驟（33)得到的混合液離心，棄去上清液，沉淀使用4ml的無菌NaCl水溶液懸 浮，加入3ml份質量體積比為10 %~13 %的PEG-6000,充分攪拌20分鐘，置于搖床室溫搖 晃20~30分鐘，再進行離心，獲得沉淀物，其中無菌NaCl水溶液的濃度為0. 5~0. 9W/V ; (35) 將步驟（34)得到的沉淀物使用1.2ml的NaCl水溶液溶解得到混合液，先將混 合液用透析帶進行透析，再使用IXPBS透析過夜，再用0. 5XPBS透析12~14h，最后用 0.1 XPBS透析6~10h，收集透析袋中慶大霉素-IgY抗體即可，其中： NaCl水溶液濃度為0? 5~0? 9W/V ; IXPBS 的 pH = 7. 2 ~7. 5 ; 0? 5XPBS 的 pH = 7. 4 ; 0? IXPBS 的 pH = 7. 0。5. 根據(jù)權利要求4所述的一種慶大霉素-IgY抗體制備方法，其特征在于，步驟（31)中 采用0. 01~0. 05W/V的新潔爾滅清洗清洗步驟（22)得到的蛋。6. 根據(jù)權利要求4所述的一種慶大霉素-IgY抗體制備方法，其特征在于，所述禽類為 雞。7. 根據(jù)權利要求4所述的一種慶大霉素-IgY抗體制備方法，其特征在于，慶大霉 素-IgY抗體在_20°C下保存?zhèn)溆谩?br>【專利摘要】本發(fā)明及慶大霉素抗原合成方法及慶大霉素-IgY抗體制備方法。慶大霉素抗原合成方法，包括(1)取40mg慶大霉素硫酸鹽和12mg偶聯(lián)載體蛋白溶于1.5mL？PBS，攪拌得到反應液；(2)、取280mg碳化二亞胺鹽酸鹽溶于lmL？PBS中得到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液，將pH調至7.5，再將反應液滴加到碳化二亞胺鹽酸鹽溶液中，并且將混合液在室溫下攪拌，然后于5℃放置2天后得到混合液；(3)、將混合液用PBS透析3d后，將透析袋中的抗原分裝，即得到慶大霉素抗原。一種慶大霉素-IgY抗體制備方法，包括以下步驟：(1)慶大霉素抗原合成；(2)制備含抗體的免疫蛋；(3)提取慶大霉素-IgY抗體。
【IPC分類】C07K14/765, C07K14/795, C07K16/02, C07K16/44
【公開號】CN105037526
【申請?zhí)枴緾N201510486425
【發(fā)明人】張小鶯, 李翠
【申請人】西北農林科技大學
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年8月7日