或人源化的抗體或抗體片段。
[0115] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體產(chǎn)品是如本文所述的抗體片段，例如單鏈抗體、單鏈 可變片段（scFv)、域抗體（dAB)或納米體（nanobody)，其結(jié)合至如本文所述的例如在圖1、 2和3中所述的RAMP-URAMP-2和RAMP-3蛋白中的至少一種。優(yōu)選地，所述抗體產(chǎn)品調(diào)節(jié) RAMP蛋白對CRLR蛋白的作用。這種調(diào)節(jié)可以是例如抑制RAMP/CRLR異源二聚體對配體的 結(jié)合。同時(shí)不受理論束縛，本發(fā)明人相信由RAMP/CRLR異源二聚體所形成的受體是作為特 異性配體例如腎上腺髓質(zhì)素和CGRP的受體來起作用的。本發(fā)明的試劑可以用于干擾RAMP 蛋白與CRLR的結(jié)合和/或干擾配體對受體的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述RAMP蛋白是 RAMP-3。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，該試劑是抗體片段。
[0116] 如上面所指出地，免疫球蛋白或抗體的各種片段是本領(lǐng)域已知的，即，F(xiàn)ab、Fab2、 F(Fab' )2、Fv、FC、Fd、SCFvS等。Fab片段是由共價(jià)偶聯(lián)在一起的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的 免疫活性部分與免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)的免疫活性部分所組成的多亞基蛋白，并且能夠特 異性地結(jié)合至抗原。Fab片段是通過完整的免疫球蛋白分子的蛋白水解分裂（proteolytic cleavage)(例如，使用木瓜蛋白酶）產(chǎn)生。Fab 2片段含有兩個(gè)結(jié)合的Fab片段。當(dāng)這兩個(gè) 片段是通過免疫球蛋白鉸鏈區(qū)連接時(shí)，產(chǎn)生F(Fab' )2片段。Fv片段是由共價(jià)偶聯(lián)在一起 的免疫球蛋白重鏈可變區(qū)的免疫活性部分和免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)的免疫活性部分所組 成的多亞基蛋白，并且能夠特異性地結(jié)合至抗原。片段還可以是單鏈多肽，所述單鏈多肽 只含一個(gè)輕鏈可變區(qū)或其含有輕鏈可變區(qū)的三個(gè)CDRs而沒有結(jié)合重鏈可變區(qū)的片段，或 其含有重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDRs而沒有結(jié)合輕鏈部分的片段；以及由抗體片段形成的多特 異性抗體，該種抗體已經(jīng)描述于例如美國專利No. 6, 248, 516中。Fv片段或單區(qū)（域）片 段一般是通過有關(guān)的經(jīng)鑒定區(qū)域在宿主細(xì)胞系中的表達(dá)來產(chǎn)生。這些和其他免疫球蛋白 或抗體片段均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，并描述于標(biāo)準(zhǔn)的免疫學(xué)教科書如Paul，F(xiàn)undamental Immunology或Janeway等人，Immunobiology (引用如上）。分子生物學(xué)目前使得這些片段 被直接合成（通過細(xì)胞中的表達(dá)或通過化學(xué)方式），以及合成其組合。
[0117] 有可能產(chǎn)生單獨(dú)的可變區(qū)，也稱為單鏈抗體可變區(qū)片段（scFv' s)。如果用于特 異性單克隆抗體的雜交瘤存在，將scFv' s從通過RTPCR由該雜交瘤中提取的mRNA中分 離是在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。選擇性地，可以采取噬菌體展示篩選來鑒定表達(dá) scFv' s的克隆。選擇性地，所述片段是"域抗體片段"。域抗體是抗體的最小結(jié)合部分（約 13kDa)。該技術(shù)的例子公開于 US6, 248, 516、US6, 291，158、US6, 127, 197 和 EP0368684 中， 上述文獻(xiàn)全部在此以全文引入作為參考。
[0118] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體片段是單鏈抗體可變區(qū)片段。抗體或免疫 球蛋白的片段也可以具有雙特異性功能，即結(jié)合兩種不同抗原的兩個(gè)不同表位。
[0119] 在一個(gè)實(shí)施方案中，可以將針對RAMP蛋白的嵌合/人源化的單克隆抗體制備為合 適地適于原核細(xì)胞或真核細(xì)胞的的轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的表達(dá)載體中的融合多肽。
[0120] 在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體是調(diào)理抗體。吞噬作用是由巨噬細(xì)胞 和多形態(tài)白細(xì)胞介導(dǎo)的并且涉及微生物、受損或死亡的細(xì)胞、細(xì)胞碎片、不溶性顆粒及激活 的凝固因子的攝取和消化。調(diào)理素是促進(jìn)以上異源體的吞噬的試劑。因此調(diào)理抗體是提供 了上述相同功能的抗體。調(diào)理素的實(shí)例是抗體或補(bǔ)體（compliment)C3的Fc部分。
[0121] 本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述的抗體或抗體片段與治療試劑結(jié)合或交聯(lián)至治療 試劑。優(yōu)選地，該治療試劑是化學(xué)治療試劑。優(yōu)選地，該治療試劑選自：順鉑、卡鉑、環(huán)磷酰 胺、美法侖、卡莫司汀、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、巰嘌呤、柔紅霉素、多柔比星、表柔 比星、長春堿、長春新堿、更生霉素、絲裂霉素C、紫杉酚、L-天冬酰胺酶、G-CSF、表鬼白毒素 P比喃葡糖苷、秋水仙素、去鐵敏（deferoxamine mesylate)和喜樹堿。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述抗體產(chǎn)品可以連接至例如PEG分子。
[0122] 所述試劑對例如RAMP蛋白如RAMP-3的結(jié)合任選地以大于10 7M、10 SM、10 9M、 10 ^MUO nM或10 12M的親合力來結(jié)合。所述結(jié)合可以是特異于配體的或是非特異性的，盡 管在某些實(shí)例中，存在對某些與RAMP-URAMP-2或RAMP-3無關(guān)的其他配體的較低親合程度 的非特異性結(jié)合。
[0123] 因此，本發(fā)明的試劑可以是例如抗體或其片段，例如Fab片段。然而，也可能是如 上面所定義的適配子、化合物、融合蛋白、蛋白質(zhì)、肽或其組合。特定的抗體和片段是Fab片 段或scFv。自然地在本發(fā)明的試劑的范圍之內(nèi)的是抗體或片段，所述片段為單克隆的、多克 隆的、嵌合的、人的或人源化的。其他結(jié)合至RAMP蛋白的試劑是包括在本發(fā)明之內(nèi)，其中所 述結(jié)合為在此所述的。
[0124] 抗體分離的方法是本領(lǐng)域公知的。參見，例如，Harlow和Lane(1988)Antibodies : A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory, New York。所述分離方法可以 取決于所述免疫球蛋白的種型。純化方法可以包括鹽沉淀法（例如，使用硫酸銨）、離子交 換色譜法（例如，在中性pH下經(jīng)過陽離子或陰離子交換柱，并采用增加離子濃度的分階段 梯度洗脫）、凝膠過濾色譜法（包括凝膠過濾HPLC)以及在親合樹脂上的色譜法如A蛋白、 G蛋白、羥基磷灰石和抗免疫球蛋白。特別地，本發(fā)明的試劑是通過使用G蛋白-瓊脂糖柱 來純化的。
[0125] 對于大多數(shù)的應(yīng)用而言，通常優(yōu)選將多肽例如抗體至少部分地從其他細(xì)胞組分中 純化。優(yōu)選地，以總蛋白質(zhì)重量百分比計(jì)，所述多肽為至少約50%純度。更優(yōu)選地，所述蛋 白為至少約50-75%純度。對于臨床使用而言，所述多肽優(yōu)選為至少約80%純度。
[0126] 本發(fā)明的試劑可以通過任何適宜的方法包括通過重組方法或化學(xué)合成法來制得。 然后可以將產(chǎn)生的肽通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)來彼此分離，所述本領(lǐng)域已知的技術(shù)包括但 不限于凝膠過濾色譜法、凝膠電泳和反相HPLC。選擇性地，可以使用本文公開內(nèi)容中所提 供的信息結(jié)合蛋白合成的標(biāo)準(zhǔn)方法來化學(xué)合成本發(fā)明的試劑。適宜的方法是固相多肽合 成（solid-phase Merrifield)技術(shù)。自動(dòng)化的肽合成儀是可商業(yè)購得的，如由Applied Biosystems，Inc. (Foster City，Calif.)所生產(chǎn)的那些。
[0127] 還包括在本發(fā)明中的是用于生產(chǎn)抗體產(chǎn)品的方法，所述抗體產(chǎn)品是例如本文所述 的抗體或抗體片段以及任選的本文所定義的嵌合抗體或人源化抗體，所述方法包括：
[0128] i)在有助于生產(chǎn)該抗體的條件下，使得經(jīng)載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞生長，所述載體 包含編碼所述抗體或抗體片段的核酸分子；和
[0129] ii)從所述細(xì)胞中或抗體的生長環(huán)境中純化所述抗體。
[0130] 而在本發(fā)明的更進(jìn)一步的方面，提供一種雜交瘤細(xì)胞系，所述雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生 如前所述的單克隆抗體。
[0131] 在本發(fā)明的進(jìn)一步方面，提供一種使用本發(fā)明的雜交瘤細(xì)胞系來生產(chǎn)本發(fā)明的單 克隆抗體的方法。使用雜交瘤細(xì)胞來生產(chǎn)單克隆抗體是本領(lǐng)域公知的。用于生產(chǎn)單克隆 抗體的方法由Kohler和Milstein公開于Nature 256,495-497(1975)中，并且還公開于 Donillard 和 Hoffman，"Basic Facts about Hybridoma s'，，Compendium of Immunology V.II ed.by Schwartz，1981，上述文獻(xiàn)在此引入作為參考。
[0132] 在本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供一種用于制備產(chǎn)生本發(fā)明單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞 系的方法，所述方法包括以下步驟：
[0133] i)用含有至少一種多肽的免疫原來免疫免疫活性的哺乳動(dòng)物，所述免疫使用包含 至少一種具有如圖4、5或6中所示的氨基酸序列的多肽或是在此定義的其片段或其變體的 免疫原；
[0134] ii)用骨髓瘤細(xì)胞融合經(jīng)過免疫的免疫活性的哺乳動(dòng)物的淋巴細(xì)胞以形成雜交瘤 細(xì)胞；
[0135] iii)篩選由步驟（ii)的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的單克隆抗體針對（i)的多肽的結(jié)合活 性；
[0136] iv)培養(yǎng)所述雜交瘤細(xì)胞以擴(kuò)增和/或分泌所述單克隆抗體；和
[0137] V)從所述培養(yǎng)上清液中回收所述的單克隆抗體。
[0138] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，（i)中所述的多肽含有如圖7、8或9中所示的氨基 酸序列或變體多肽，其中所述變體是通過添加、缺失或取代存在于圖7、8或9中氨基酸序列 的至少一個(gè)氨基酸殘基來修飾的，其中所述多肽調(diào)節(jié)CRLR的功能。
[0139] 優(yōu)選地，所述免疫活性哺乳動(dòng)物是小鼠。選擇性地，所述免疫活性哺乳動(dòng)物是大 ￡3邱U
[0140] 在本發(fā)明的一個(gè)選擇性的實(shí)施方案中，所述試劑是核酸分子。所述核酸可以例如 是反義核酸、適配子或小型干擾性RNA。
[0141] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸分子可以是小型干擾性RNA。小型干擾性 RNA可以選自如下的序列（1)-(5):
[0142] TGGCCCATCACCTCTTCATGA (1)
[0143] CTGGCTGCTCCTGGCCCATCA(2)
[0144] TCCTGGCCCATCACCTCTTCA (3)
[0145] CUAUGAGACAGCUGUCCAA(4)
[0146] GUUCUUCUCCAACUGCACC(5)
[0147] 特定地切除基因功能的技術(shù)是通過將雙鏈RNA也稱為小型抑制性或干擾性的 RNA(siRNA)引入細(xì)胞，其導(dǎo)致針對siRNA分子中所包含序列mRNA互補(bǔ)性的破壞。所述 siRNA分子含有兩條互補(bǔ)性的RNA鏈（有義鏈和反義鏈），彼此退火來形成雙鏈RNA分子。 所述siRNA分子通常是衍生自所述基因的外顯子，該外顯子是要切除的。
[0148] 即將解釋RNA干擾的機(jī)理。很多生物體應(yīng)答雙鏈RNA的存在，通過激活導(dǎo)致siRNA 形成的級(jí)聯(lián)。雙鏈RNA的存在激活含有RNase III的蛋白復(fù)合物，所述RNase III將雙鏈 RNA加工成更小的片段（siRNAs，長度為約21-29核苷酸），該更小的片段成為核糖核蛋白 (ribonudeoprotein)復(fù)合物的部分。所述siRNA作為RNase復(fù)合物將互補(bǔ)的mRNA分裂為 siRNA反義鏈的從而導(dǎo)致mRNA破壞的指標(biāo)。
[0149] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供含有核酸序列的經(jīng)分離的核酸，所述序列編碼本文 所述的試劑，所述試劑是抗體、抗體片段、融合蛋白、肽或蛋白質(zhì)。
[0150] 本發(fā)明的試劑，如果含有肽序列例如抗體、融合蛋白、肽或蛋白質(zhì)，可以是由核酸 序列編碼的。本發(fā)明包括編碼如本文所定義試劑的任意核酸序列。本發(fā)明還包括編碼本發(fā) 明試劑但由于遺傳密碼的簡并性而不同于野生型核酸的核酸序列。
[0151] 本發(fā)明還包括與編碼本發(fā)明試劑的核酸序列至少具有90%同源性的核酸。特別 地，所述核酸可以與編碼本發(fā)明抗體或其片段的核酸具有90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或 99% 的同源性。
[0152] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了當(dāng)所述試劑是抗體或其片段或融合蛋白時(shí)，在嚴(yán)謹(jǐn) 條件下與編碼本發(fā)明試劑的核酸分子雜交的核酸分子。
[0153] 當(dāng)兩個(gè)互補(bǔ)性的核酸分子彼此進(jìn)行大量的氫鍵結(jié)合時(shí)，發(fā)生核酸分子的雜交。雜 交的嚴(yán)謹(jǐn)性可以根據(jù)圍繞所述核酸的環(huán)境條件、雜交方法的性質(zhì)以及所用核酸分子的組成 和長度來變化。關(guān)于獲得特定程度的嚴(yán)謹(jǐn)性所需的雜交條件的計(jì)算討論于Sambrook等人， Molecular Cloning ：A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press， Cold Spring Harbor， NY，2001);和 Tijssen， Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology-Hybridization with Nucleic Acid Probes 第 I 部分，第 2 章 (Elsevier，New York，1993)中。1"是50%的核酸分子的給定鏈雜交至其互補(bǔ)鏈時(shí)的溫度。 以下是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的示例性而不是限制性的雜交條件：
[0154] 非常高嚴(yán)謹(jǐn)件（允許具有至小90%同一件的序列雜奪）
[0155] 雜交：5x SSC，在 65°C下 16 小時(shí)
[0156] 洗滌兩次：2x SSC，在室溫（RT)下每次15分鐘
[0157] 洗滌兩次：0. 5x SSC，在65°C下每次20分鐘
[0158] 高嚴(yán)謹(jǐn)件（允許具有至小80%同一件的序列雜奪）
[0159] 雜交：5x_6x SSC，在 65°C -70°C下 16-20 小時(shí)
[0160] 洗滌兩次：2x SSC，在RT下每次5-20分鐘
[0161] 洗滌兩次：lx SSC，在55°C -70°C下每次30分鐘
[0162]低嚴(yán)謹(jǐn)件（允許具有至小50%同一件的序列雜奪）
[0163] 雜交：6x SSC，在 RT_55°C下 16-20 小時(shí)
[0164] 洗滌至少兩次：2x-3x SSC，在RT-55°C下每次20-30分鐘
[0165] 在進(jìn)一步的方面，本發(fā)明提供含有如上所述的核酸的表達(dá)載體，并且所述表達(dá)載 體結(jié)合有用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)蛋白或多肽所必需的調(diào)節(jié)序列。這樣的調(diào)節(jié)序列包括例如 啟動(dòng)子、終止序列及增強(qiáng)子。
[0166] 在另一個(gè)有關(guān)方面，本發(fā)明提供了含有如上述的核酸或載體的宿主細(xì)胞。這樣的 宿主細(xì)胞是經(jīng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化的，它們因此以這樣的方式含有所述核酸或載體：當(dāng)在必要的生 長條件下培養(yǎng)于合適的培養(yǎng)基中時(shí)，其對表達(dá)所期望的多肽/蛋白質(zhì)是有效的。所使用的 宿主細(xì)胞不特別限制，只要其可以通過所使用的載體來轉(zhuǎn)染并且可以表達(dá)本發(fā)明的DNA。例 如，可以使用細(xì)菌如大腸桿菌，酵母菌如釀酒酵母，及動(dòng)物細(xì)胞如C0S細(xì)胞、CH0細(xì)胞等。適 用本發(fā)明的原核宿主細(xì)胞的例子包括大腸桿菌（E.coli)。真核宿主細(xì)胞的例子包括禽類、 昆蟲、植物和動(dòng)物細(xì)胞如C0S7、HeLa和CH0細(xì)胞。
[0167] 通過培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體或轉(zhuǎn)染細(xì)胞，本發(fā)明的試劑例如融合蛋白、抗體或抗體片段可以 在細(xì)胞或培養(yǎng)基中產(chǎn)生。然后，通過收集所產(chǎn)生的抗體（或抗體片段），可以獲得本發(fā)明第 一方面的試劑。得到的抗體或蛋白可以分離和純化，通過適當(dāng)?shù)亟M合方法例如離心分離、硫 酸銨分餾法、鹽析、超濾、親合力色譜法、離子交換色譜法或凝膠過濾色譜法。
[0168] 例如，細(xì)胞可以在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并且用過的培養(yǎng)基可以作為抗體源來使 用。任選地，可以包括涂敷基質(zhì)的通道或珠粒以及細(xì)胞共培養(yǎng)物從而增加抗體產(chǎn)生性細(xì)胞 的生長。對于大量抗體的產(chǎn)生而言，獲得腹水通常是更加方便的。產(chǎn)生腹水的方法通常包 括：將雜交瘤細(xì)胞注射進(jìn)入免疫的首次用于實(shí)驗(yàn)的組織相容性的或免疫耐受的哺乳動(dòng)物特 別是小鼠中。將所述哺乳動(dòng)物任選地接觸抗原以產(chǎn)生腹水，通過在先給予適宜的組合物例 如姥鮫烷。本發(fā)明的抗體也可以使用常規(guī)重組方法如在上面的Sambrook等人（1989)中所 述的那樣獲得。例如，可以將本發(fā)明的核酸序列克隆進(jìn)入適宜的表達(dá)載體（其含有用于轉(zhuǎn) 錄的控制序列如啟動(dòng)子）中。將所述表達(dá)載體依次引入宿主細(xì)胞。所述宿主細(xì)胞在適宜的 條件下生長，從而將所述多核苷酸轉(zhuǎn)錄并翻譯成為蛋白。本發(fā)明抗體的重鏈和輕鏈可以分 別產(chǎn)生，然后通過二硫鍵的重排來組合。選擇性地，可以將具有編碼本發(fā)明抗體每條鏈的分 離多核苷酸的載體，或具有編碼作為分離的轉(zhuǎn)錄物的兩條鏈的單獨(dú)多核苷酸的載體，轉(zhuǎn)染 進(jìn)入單獨(dú)的宿主細(xì)胞，該單獨(dú)的宿主細(xì)胞隨后產(chǎn)生并且組裝整個(gè)分子。優(yōu)選地，所述宿主細(xì) 胞是更高級(jí)的真核細(xì)胞，其可以提供所述分子的正常糖類補(bǔ)體。所述融合蛋白或抗體因此 產(chǎn)生于宿主細(xì)胞中，可以使用本領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來純化。
[0169] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供用于測定RAMP蛋白或核酸分子的表達(dá)水平的測 定方法，所述的RAMP蛋白是例如具有如圖1、2或3中所示的序列的RAMP蛋白，所述的核酸 分子是在嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件下雜交至該核酸分子上并編碼含有如圖1、2或3中所示的氨基酸序 列的變異多肽，所述方法包括以下步驟：
[0170] i)用結(jié)合到編碼RAMP蛋白的核酸分子上的結(jié)合試劑來接觸分離的細(xì)胞樣本；和
[0171] ii)將所述樣本中所述核酸分子的表達(dá)與標(biāo)準(zhǔn)品相比較。
[0172] 所述結(jié)合試劑可以選自寡核苷酸引物及特異性地結(jié)合如圖1、2或3中氨基酸序列 所表示的多肽的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述測定方法包括聚合酶鏈反應(yīng)。
[0173] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了確定受試者中的癌癥的診斷測定方法，所述方法包 括以下步驟：
[0174] i)提供經(jīng)分離的細(xì)胞樣品；
[0175] ii)用結(jié)合試劑來接觸（i)中的樣品，所述結(jié)合試劑結(jié)合至編碼含有如圖1、2或 3中所示氨基酸序列的多肽或在此定義的其片段或變體的核酸分子，或在嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件下 雜交至所述核酸分子并且編碼含有如圖1、2或3中所示的氨基酸序列的變體多肽的核酸分 子；和
[0176] iii)當(dāng)與正常配對的對照樣本相比較時(shí)，確定該核酸分子在所述樣本中的表達(dá)。
[0177] 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該結(jié)合試劑是寡核苷酸引物。優(yōu)選地，該測定 法是聚合酶鏈反應(yīng)。在本發(fā)明的一個(gè)選擇性的優(yōu)選實(shí)施方案中，該結(jié)合試劑是抗體，所述抗 體特異性地結(jié)合圖1、2或3中的氨基酸序列所示的多肽，或是含有通過添加、缺失或取代至 少一個(gè)氨基酸殘基而從參考氨基酸序列中變化而來的氨基酸序列的多肽變體。
[0178] 本發(fā)明進(jìn)一步的方面提供了篩選調(diào)節(jié)RAMP蛋白活性的試劑的方法，所述RAMP蛋 白由選自如下的核酸分子來編碼：
[0179] a)由圖1、2或3中所示的核酸序列組成的核酸分子；
[0180] b)在嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件下雜交至以上（i)中所述核酸分子上并且調(diào)節(jié)CRLR功能的核 酸分子；
[0181] 所述方法包括用被測化合物接觸在細(xì)胞表面上表達(dá)RAMP蛋白的細(xì)胞，并且測定 該被測化合物調(diào)節(jié)RAMP蛋白活性的能力。
[0182] 本發(fā)明的公開內(nèi)容還提供RAMP蛋白在鑒定用于調(diào)節(jié)CRLR功能的試劑中的應(yīng)用， 其中所述RAMP蛋白選自：
[0183] i)多肽或其變體，由如圖1、2或3所示的核酸序列組成的核酸分子來編碼；
[0184] ii)多肽，由在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交至上述（i)中所定義的核酸分子并且調(diào)節(jié)CRLR功 能的核酸分子來編碼；和
[0185] iii)多肽，所述多肽包含由于遺傳密碼而與⑴和（ii)中定義的核酸序列是簡并 的核酸。
[0186] 本發(fā)明公開內(nèi)容還提供了 CRLR在鑒定用于調(diào)節(jié)CRLR和多肽相互作用的試劑中的 應(yīng)用，其中所述多肽選自：
[0187] i)多肽或其變體，由如圖1、2或3所示的核酸序列組成的核酸分子來編碼；
[0188] ii)多肽，由在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交至上述（i)中所定義的核酸分子并且調(diào)節(jié)CRLR功 能的核酸分子來編碼；和
[0189] iii)多肽，所述多肽包含由于遺傳密碼而與⑴和（ii)中定義的核酸序列是簡并 的核酸。
[0190] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供包括與核酸分子特異性反應(yīng)的結(jié)合試劑或是與含 有如圖1、2或3所示氨基酸序列的多肽或在此定義的其片段或變體特異性反應(yīng)的試劑的試 劑盒，所述核酸分子編碼含有如圖1、2或3所示氨基酸序列的多肽，或在此定義的其片段或 變體。
[0191] 在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該試劑盒進(jìn)一步含有與該核酸分子或該多肽特 異性反應(yīng)的寡核苷酸或抗體。
[0192] 優(yōu)選地，該試劑盒含有熱穩(wěn)定性的DNA聚合酶和用于進(jìn)行核酸擴(kuò)增所需的成分。 優(yōu)選地，該試劑盒包括用于進(jìn)行所述聚合酶鏈反應(yīng)的一套說明以及對照核酸。
[0193] 在本發(fā)明一個(gè)選擇性的優(yōu)選實(shí)施方案中，該試劑盒含有與多肽特異性反應(yīng)的抗 體，所述多肽含有圖1、2或3中所示的氨基酸序列，或在此定義的其片段或變體。
[0194] 優(yōu)選地，該試劑盒含有用于進(jìn)行免疫測定所需要的成分，包括例如與第一抗體特 異性反應(yīng)的第二抗體和檢測所述第二抗體與所述第一抗體結(jié)合所需的酶試劑，所述第一抗 體特異性地結(jié)合所述多肽。
[0195] 根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供一種篩選用于調(diào)節(jié)核酸分子編碼多肽活性的試劑 的方法，所述核酸分子選自如下：
[0196] a)核酸分子，由圖1、2或3中所示的核酸序列組成；
[0197] b)核酸分子，在嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件下雜交至以上（i)中定義的核酸分子上并且調(diào)節(jié) CRLR的功能；其中該方法包括：
[0198] i)形成含有多肽或者其序列變體以及至少一種待檢測試劑的制劑；
[0199] ii)測定與所述多肽活性有關(guān)的該試劑的活性。
[0200] 圖4-6中所示的氨基酸序列包括圖7-9,其對應(yīng)于RAMP的胞外域（E⑶s)，可用于 分子基于結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)，所述分子調(diào)節(jié)CRLR功能如調(diào)節(jié)RAMP-CRLR的結(jié)合。這種"基于結(jié)構(gòu) 的