L異丙醇中，向其中加入式4-b所 示化合物（I. 53g，5. 76mmol)和對(duì)甲苯磺酸（993mg，5. 76mmol)，將混合物在80°C溫度下，攪 拌反應(yīng)6小時(shí)。TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢后，減壓蒸去溶劑，將殘留固體物分散于200mL乙酸乙酯 中，依此用飽和碳酸氫鈉水溶液，水和飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得式 5-1所示化合物（2. 58g，產(chǎn)率88 % )。
[0154] 實(shí)施例27:制備式5-m所示化合物
[0156] 將式3-g所示化合物（I. 76g, 5. 24mmol)溶于60mL異丙醇中，向其中加入式4-a 所示化合物（I. 53g，5. 76mmol)和對(duì)甲苯磺酸（993mg，5. 76mmol)，將混合物在60°C溫度下， 攪拌反應(yīng)12小時(shí)。TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢后，減壓蒸去溶劑，將殘留固體物分散于200mL乙酸乙 酯中，依此用飽和碳酸氫鈉水溶液，水和飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得 式5-m所示化合物（1479mg，產(chǎn)率50 % )。
[0157] 實(shí)施例28:制備式5-n所示化合物
[0159]將式3-g所示化合物（I. 76g, 5. 24mmol)溶于60mL異丙醇中，向其中加入式4-b 所示化合物（I. 53g，5. 76mmol)和對(duì)甲苯磺酸（993mg，5. 76mmol)，將混合物在80°C溫度下， 攪拌反應(yīng)5小時(shí)。TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢后，減壓蒸去溶劑，將殘留固體物分散于200mL乙酸乙 酯中，依此用飽和碳酸氫鈉水溶液，水和飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮得 式5-n所示化合物（I. 625g，產(chǎn)率55% )。
[0160] 實(shí)施例29 :制備式I-I所示化合物
[0161] 將式5-g所示化合物（400mg, 0. 694mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，20°C條件下攪拌2小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式I-I 所示化合物的產(chǎn)物（281mg，產(chǎn)率85% )。
[0162] MS m/z(ESI) ：475. 9(M+H+)
[0163] 實(shí)施例30 :制備式1-2所示化合物
[0164] 將式5-h所示化合物（400mg，0? 694mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，15°C條件下攪拌5小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-2 所示化合物的產(chǎn)物（231mg，產(chǎn)率70% )。
[0165] MS m/z(ESI) ：475. 9(M+H+)
[0166] 實(shí)施例31 :制備式1-3所示化合物
[0167] 將式5-i所示化合物（400mg，0. 688mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽酸 二氧六環(huán)（2M)，20°C條件下攪拌2. 5小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-3 所示化合物的產(chǎn)物（385mg，產(chǎn)率92% )。
[0168] MS m/z(ESI) :481.0 (M+H+)
[0169] 實(shí)施例32 :制備式1-4所示化合物
[0170] 將式5-j所示化合物（400mg，0? 688mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽酸 二氧六環(huán)（2M)，25°C條件下攪拌1. 5小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-4 所示化合物的產(chǎn)物（352mg，產(chǎn)率84% )。
[0171] MS m/z(ESI) ：480. 9(M+H+)
[0172] 實(shí)施例33 :制備式1-5所示化合物
[0173] 將式5-k所示化合物（400mg，0? 715mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，20°C條件下攪拌3小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-5 所示化合物的產(chǎn)物（356mg，產(chǎn)率85% )。
[0174] MS m/z (ESI) :459. 5 (M+H+)
[0175] 實(shí)施例34 :制備式1-6所示化合物
[0176] 將式5-1所示化合物（400mg，0? 715mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，20°C條件下攪拌2小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-6 所示化合物的產(chǎn)物（335mg，產(chǎn)率80% )。
[0177] MS m/z (ESI) ：459. 5(M+H+)
[0178] 實(shí)施例35 :制備式1-7所示化合物
[0179] 將式5-m所示化合物（400mg，0? 709mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽酸 二氧六環(huán)（2M)，15°C條件下攪拌2. 5小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-7 所示化合物的產(chǎn)物（293mg，產(chǎn)率70% )。
[0180] MS m/z (ESI) ：464. 6(M+H+)
[0181] 實(shí)施例36 :制備式1-8所示化合物
[0182] 將式5-n所示化合物（400mg，0? 709mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，18°C條件下攪拌4小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-8 所示化合物的產(chǎn)物（327mg，產(chǎn)率78% )。
[0183] MS m/z(ESI) ：464. 6(M+H+)
[0184] 實(shí)施例37:制備式1-9所示化合物
[0185] 將式5-c所示化合物（400mg，0? 676mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，25°C條件下攪拌2小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-9 所示化合物的產(chǎn)物（399mg，產(chǎn)率93% )。
[0186] MS m/z(ESI) ：507. 5(M+H+)
[0187] 實(shí)施例38:制備式1-10所示化合物
[0188] 將式5-d所示化合物（400mg，0? 676mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，20°C條件下攪拌5小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-10 所示化合物的產(chǎn)物（390mg，產(chǎn)率91% )。
[0189] MS m/z(ESI) ：507. 5(M+H+)
[0190] 實(shí)施例39:制備式I-Il所示化合物
[0191] 將式5-e所示化合物（400mg，0. 670mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽酸 二氧六環(huán)（2M)，25°C條件下攪拌1. 5小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式I-Il 所示化合物的產(chǎn)物（343mg，產(chǎn)率80% )。
[0192] MS m/z(ESI) ：512. 6(M+H+)
[0193] 實(shí)施例40:制備式1-12所示化合物
[0194] 將式5-f所示化合物（400mg，0? 670mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，25°C條件下攪拌2小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-12 所示化合物的產(chǎn)物（360mg，產(chǎn)率84% )。
[0195] MS m/z(ESI) ：512. 6(M+H+)
[0196] 實(shí)施例41:制備式1-13所示化合物
[0197] 將式5-a所示化合物（400mg，0. 677mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，15°C條件下攪拌3小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-13 所示化合物的產(chǎn)物（317mg，產(chǎn)率74% )。
[0198] MS m/z(ESI) ：506. 5(M+H+)
[0199] 實(shí)施例42:制備式1-14所示化合物
[0200] 將式5-b所示化合物（400mg，0. 677mmol)置于IOOmL反應(yīng)瓶中，加入50毫升鹽 酸二氧六環(huán)（2M)，20°C條件下攪拌2小時(shí)，監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后過濾，用乙醚洗滌濾餅得式1-14 所示化合物的產(chǎn)物（334mg，產(chǎn)率78% )。
[0201] MS m/z(ESI) ：506. 5(M+H+)
[0202] 實(shí)施例43 :ALK激酶抑制活性的測(cè)定
[0203] 采用以下方法來測(cè)定本發(fā)明的化合物在體外對(duì)ALK激酶的抑制活性，該抑制活性 采用IC50這一指標(biāo)來表示，IC50即ALK激酶的活性被抑制50%時(shí)的化合物的濃度。
[0204] 簡(jiǎn)寫及定義
[0205] mg 毫克
[0206] mL 毫升
[0207] yg 微克
[0208] y1微升
[0209] mM毫摩爾
[0210] EDTA乙二胺四乙酸
[0211] DMSO 二甲亞砜
[0212] SD 標(biāo)準(zhǔn)偏差
[0213]SOP標(biāo)準(zhǔn)操作程序
[0214] 實(shí)驗(yàn)材料：
[0215] ALK(Carna, Cat. No 08-105, Lot. No. 08CBS-0112)
[0216] ALK LI 196M (Carna, Cat. No 08-529, Lot. No. 11CBS-1134)
[0217] Peptide FAM-P22(GL Biochem, Cat. No. 112393, Lot. No. P080401-XY112393)
[0218] ATP (Sigma, Cat. No. A7699-1G, CAS No. 987-65-5)
[0219] DMSO (Sigma, Cat. No. D2650, Lot. No. 474382)
[0220] EDTA (Sigma, Cat. No. E5134, CAS No. 60-00-4)
[0221] 96 孔板（Corning, Cat. No. 3365, Lot. No. 22008026)
[0222] 384 孔板（Corning, Cat. No. 3573, Lot. No. 12608008)
[0223] Staurosporine(Sigma, Cat. No. S4400-1MG, Lot. No. 046K4080)
[0224] 實(shí)驗(yàn)方法：
[0225]I.配制I倍的激酶緩沖液和終止液
[0226] I) 1倍激酶緩沖液
[0227] 50mM HEPES, pH 7. 5
[0228] 0. 0015% Brij-35
[0229] IOmM MgCl2
[0230] 2mM DTT
[0231] 2)終止液
[0232] IOOmM HEPES, pH 7. 5
[0233] 0. 015% Brij-35
[0234] 0. 2% Coating Reagent#3
[0235] 50mM EDTA
[0236]2?化合物配制
[0237] I)將化合物稀釋50倍最終所需的最高抑制濃度的100% DMSO溶液。轉(zhuǎn)移100 y L 這個(gè)化合物稀釋液在96孔板中。例如，如果需要最高的抑制劑濃度為I y M，在這一步就制 備50 yM的DMSO溶液。
[0238] 2)將化合物按3倍序列稀釋成10個(gè)濃度。
[0239] 3)添加100 y 1 100% DMSO到2個(gè)空的沒有化合物控制和無酶控制的相同的96 孔板中。標(biāo)記源板。
[0240] 4)中間板的制備
[0241] 從源板中轉(zhuǎn)移10 y L化合物到一個(gè)新的96孔板中作為中間板。
[0242] 添加90 y Ll倍激酶緩沖液到每一個(gè)中間板的孔中。<