-0. 5NNaCL部位的多糖，濃縮，超濾脫 鹽，冷凍干燥即獲得近白色的蛹蟲草多糖。
[0062] 制備所得蛹蟲草多糖得率為〇?35%。
[0063] 實(shí)施例2 :
[0064] 多糖含量的檢測(cè)：用苯酚-硫酸法測(cè)定，精密稱取本品IOmg置100mL容量瓶中，加 水約80ml，溶解后冷卻至室溫，定容至100mL。精密吸取樣品I.Oml，置15ml試管中，分別加 入苯酚、硫酸試劑，充分反應(yīng)后在490nm處測(cè)定吸光度值，以葡聚糖為標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算樣品的糖 含量。制備所得蛹蟲草多糖多糖的多糖含量為80. 4%。
[0065] 實(shí)施例3 :
[0066] 實(shí)驗(yàn)材料：
[0067] 取實(shí)施例1蛹蟲草多糖樣品用水溶解配制得到。實(shí)施例1蛹蟲草多糖樣品50mg/ kg、12. 5mg/kg，
[0068] 陽(yáng)性對(duì)照品：順鉑IOmg/瓶，齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)111024CF。
[0069] 瘤源：小鼠Lewis肺癌模型由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥效學(xué)研究評(píng)價(jià)中心 傳代維持。C57BL/6小鼠由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司提供，合格證號(hào)： SCXK(滬）2012-0002。動(dòng)物數(shù)：試驗(yàn)組及陽(yáng)性對(duì)照組每組10只小鼠，陰性對(duì)照為兩組。劑 量設(shè)置：樣品 50mg/kg、12. 5mg/kg。
[0070] 給藥方案：腹腔給藥，每天1次，連續(xù)14天。試驗(yàn)對(duì)照：陰性對(duì)照組給以與試驗(yàn)組 等體積等濃度的相應(yīng)溶劑，陽(yáng)性對(duì)照環(huán)順鉬2mg/kg/d每天腹腔給藥一次，連續(xù)七天。
[0071] 試驗(yàn)主要步驟：
[0072] 無(wú)菌條件下取生長(zhǎng)旺盛的瘤源，以I:8-10的比例勻漿制備成約2X107/ml細(xì)胞懸 液，于相應(yīng)宿主腋皮下接種0. 2ml/每鼠，次日按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案給藥，給藥結(jié)束后約次日處 死各組動(dòng)物，稱體重、脾臟重、胸腺重后剖取腫瘤稱重，按下列公式計(jì)算腫瘤抑制率：
[0073] 腫瘤抑制率％ =[(對(duì)照組平均瘤重一給藥組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤 重]X100%
[0074] 多糖樣品以腹腔注射，每天1次，連續(xù)14天（igX14qd)的給藥方案，對(duì)小鼠Lewis 肺癌的抗腫瘤療效試驗(yàn)，結(jié)果：實(shí)施例1蛹蟲草多糖樣品50mg/kg、12. 5mg/kg，腫瘤抑制率 分別為28. 41 %及12. 53%。具有一定的抗腫瘤的效果，詳見(jiàn)表。
[0075] 表.多糖樣品對(duì)小鼠Lewis肺癌的療效試驗(yàn)
[0076]
[0077] 實(shí)施例4:
[0078] 蛹蟲草多糖的劑型
[0079] 蛹蟲草多糖的片劑：蛹蟲草多糖10mg，淀粉87g，硬脂酸鎂2g
[0080] 制備工藝：取實(shí)施例1的蛹蟲草多糖過(guò)100目篩，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制成 顆粒，干燥，壓片，即得。
[0081] 蛹蟲草多糖的膠囊：蛹蟲草多糖10mg，淀粉87g，硬脂酸鎂2g
[0082] 制備工藝：取實(shí)施例1的蛹蟲草多糖過(guò)100目篩，加淀粉、硬脂酸鎂混合均勻，制成 顆粒，干燥，裝膠囊，即得。
[0083] 蛹蟲草多糖的凍干粉：
[0084] 蛹蟲草多糖2. 0g，乙二胺四乙酸二鈉4. 0g，加水定容至1000 mL;
[0085]制備工藝：蛹蟲草多糖分散在水中，在超聲或攪拌條件下將乙二胺四乙酸二鈉加 入，使成澄清透明溶液；補(bǔ)加水定容至足量；經(jīng)〇. 22yM微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥得到。
[0086] 實(shí)施例5 :片劑中蛹蟲草多糖的含量的檢測(cè)
[0087] HPLC色譜條件：
[0088]Waters2695高效液相色譜（Waters,USA)，配備TSK-GELG6000PWXL分析 柱（7.8mmX300mm),Waters2414不差折光檢測(cè)器（Waters,USA),visioStar-II粘度 計(jì)（Wyatt，USA)，DAWN8+激光散射儀（Wyatt，USA),waters2998光電二極管陣列檢測(cè)器 (Waters,USA).
[0089] 流動(dòng)相：含有 0?lmol/LNaH2POjP0? 3mol/LNaNO3的水溶液（pH至 7. 0)，，
[0090] 流動(dòng)相的配制方法：取Mi11iQwater(去離子水），使得NaH2POjPNaNO3的濃度 分別為〇?lmol/L和0? 3mol/L，用lmol/L的NaOH溶液將pH值調(diào)到7. 0,所配制的溶液用 0. 45ym的濾膜過(guò)濾，并用超聲或真空脫氣，得流動(dòng)相。
[0091] 流速為 0? 5mL/min。
[0092] 柱溫和檢測(cè)器溫度40°C。片劑樣品用流動(dòng)相配成lmg/mL溶液，上樣量50yL。對(duì) 照樣品是：實(shí)施例1的樣品。
[0093] 實(shí)施例6 :膠囊中蛹蟲草多糖的含量的檢測(cè)
[0094] HPLC色譜條件：
[0095] Waters2695 高效液相色譜（Waters,USA)，配備TSK-GELG6000PWXL分析柱 (7. 8mmX300mm)，Waters2414 不差折光檢測(cè)器（Waters,USA),visioStar-II粘度計(jì) (Wyatt，USA)，DAWN8+激光散射儀（Wyatt，USA)，waters2998光電二極管陣列檢測(cè)器 (Waters,USA).
[0096] 流動(dòng)相：含有 0?lmol/LNaH2POjP0? 3mol/LNaNO3的水溶液（pH至 7. 0)，，
[0097] 流動(dòng)相的配制方法：取Mi11iQwater(去離子水），使得NaH2POjPNaNO3的濃度 分別為〇?lmol/L和0? 3mol/L，用lmol/L的NaOH溶液將pH值調(diào)到7. 0,所配制的溶液用 0. 45ym的濾膜過(guò)濾，并用超聲或真空脫氣，得流動(dòng)相。
[0098] 流速為 0? 5mL/min。
[0099] 柱溫和檢測(cè)器溫度40°C。膠囊內(nèi)容物的樣品用流動(dòng)相配成lmg/mL溶液，上樣量 50yL。對(duì)照樣品是：實(shí)施例1的樣品。
[0100] 實(shí)施例7 :凍干粉中蛹蟲草多糖的含量的檢測(cè)
[0101] HPLC色譜條件：
[0102] Waters2695 高效液相色譜（Waters,USA)，配備TSK-GELG6000PWXL分析 柱（7. 8mmX300mm),Waters2414 不差折光檢測(cè)器（Waters,USA),visioStar-II粘度 計(jì)（Wyatt，USA)，DAWN8+激光散射儀（Wyatt，USA),waters2998光電二極管陣列檢測(cè)器 (Waters,USA).
[0103] 流動(dòng)相：含有 0?lmol/LNaH2POjP0? 3mol/LNaNO3的水溶液（pH至 7. 0)，，
[0104] 流動(dòng)相的配制方法：取MilliQwater(去離子水），使得NaH2POjPNaNO3的濃度 分別為〇?lmol/L和0? 3mol/L，用lmol/L的NaOH溶液將pH值調(diào)到7. 0,所配制的溶液用 0. 45ym的濾膜過(guò)濾，并用超聲或真空脫氣，得流動(dòng)相。
[0105] 流速為 〇? 5mL/min。
[0106] 柱溫和檢測(cè)器溫度40°C。凍干粉用流動(dòng)相配成lmg/mL溶液，上樣量50yL。對(duì)照 樣品是：實(shí)施例1的樣品。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蛹蟲草多糖，其特征在于：由如下方法制備得到： 蛹蟲草子實(shí)體超細(xì)粉碎后用沸水提取，收集上清液；上清液濃縮后加入乙醇沉淀，沉淀 部位過(guò)DEAE-sepharose柱，0-0. 5N NaCl的部位脫鹽后冷凍干燥獲得蛹蟲草活性多糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的.一種蛹蟲草多糖的制備方法，其特征在于：該方法包括： ① 蛹蟲草原料的粉碎：以蛹蟲草子實(shí)體為原料，粉碎成粗粒，再進(jìn)行超細(xì)粉碎至 300-500 目； ② 蛹蟲草粗多糖的提?。河枷x草細(xì)粉，加入20倍重量的蒸餾水中，攪勻并加熱至沸騰， 保持微沸60-120分鐘，過(guò)濾保留濾液，棄去殘?jiān)? ③ 蛹蟲草粗提液的濃縮：濾液用1000 OXg的速度離心30min，上清液減壓濃縮至料液 比為 1:1-1:2 ; ④ 乙醇沉淀及洗滌：向上述濾液中加入無(wú)水乙醇，至乙醇含量達(dá)到40% -50%，離心去 除醇沉上清，收集沉淀，用40% -50%的乙醇洗滌沉淀5-6次； ⑤ 沉淀加水溶解，過(guò)DEAE-s印harose柱，先用水洗脫，在用O-IN的NaCL洗脫，收集 0-0. 5NNaCL部位的多糖，濃縮，超濾脫鹽，冷凍干燥即得。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛹蟲草多糖，其特征在于：在提取過(guò)程中用如下方法進(jìn) 行檢測(cè)： HPLC色譜條件： Waters 2695 高效液相色譜（Waters, USA)，配備 TSK-GEL G6000PWXL 分析柱 (7. 8mmX300mm)，Waters 2414 不差折光檢測(cè)器（Waters, USA), visio Star-II 粘度 計(jì)（Wyatt，USA)，DAWN8+激光散射儀（Wyatt，USA) ,water s 2998光電二極管陣列檢測(cè)器 (Waters, USA), 流動(dòng)相為：含有 〇. lmol/L NaH2POjP 0. 3mol/L NaNO 3的水溶液，pH 7. 0,， 流速為 〇? 5mL/min， 柱溫和檢測(cè)器溫度40°C，多糖樣品用流動(dòng)相配成2mg/mL溶液，上樣量50 y L。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蛹蟲草多糖，其特征在于：由提取過(guò)程中用如下方法進(jìn) 行分離： 取醇沉得到的粗多糖溶液，洗脫程序?yàn)椋篠epharose Fast Flow柱，流速4ml/min， 0-200mL 水，時(shí)間 0-50min 200-300mLNaCl 0-0? lmol/L，時(shí)間 50-75min 300-510mL NaClO. 1-lmol/L，時(shí)間 75-127. 5min 510-630NaCl Imol/mL，時(shí)間 127. 5-157. 5min。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的蛹蟲草多糖在制備抗腫瘤活性的組合物上應(yīng)用。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的蛹蟲草多糖提取物在制備抗肺癌的組合物上應(yīng)用。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的蛹蟲草多糖在制備抗腫瘤活性的組合物，包括而不限于藥品、 食品N保健食品。8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的蛹蟲草多糖在制備抗肺癌的組合物，包括而不限于藥品、食 品N保健食品。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種蛹蟲草活性多糖，由如下方法制備得到：蛹蟲草子實(shí)體超細(xì)粉碎后用沸水提取，收集上清液；上清液濃縮后加入乙醇沉淀，沉淀部位過(guò)DEAE-sepharose柱，0-0.5N的部位脫鹽后冷凍干燥獲得。本發(fā)明涉及蛹蟲草多糖提取物在制備抗腫瘤活性的產(chǎn)品上應(yīng)用。
【IPC分類】A23L1/09, C08B37/00, A61P35/00, A61K31/715
【公開(kāi)號(hào)】CN105085704
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510585474
【發(fā)明人】唐慶九, 嚴(yán)培蘭, 朱麗娜, 劉艷芳, 王晨光, 張忠, 張勁松, 馮娜, 周帥
【申請(qǐng)人】上海瑞豐農(nóng)業(yè)科技有限公司, 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院, 上海百信生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年11月25日
【申請(qǐng)日】2015年9月15日