所述組合物的活性成分由所述組分A和所述組分B組成，所述組分A為水蘇堿或其鹽酸鹽， 所述組分B為葫蘆己堿或其鹽酸鹽。
[0064] 實(shí)驗(yàn)證明，采用本發(fā)明的用于制備根瘤菌培養(yǎng)基的組合物制備的根瘤菌種衣 劑均提高了中首一號(hào)紫花首猜的產(chǎn)量和品質(zhì)，與對(duì)照組的中首一號(hào)紫花首猜單株干重 (1. 06 + 0. 21g/ 株）相比，S1+T1 組化 04 + 0. 48g/ 株，增加率為 186. 79 % )和S化T1 組 (1. 98 + 0. 55g/株，增加率為86. 79% )的中首一號(hào)紫花首猜的單株干重的增加率均高于對(duì) 照組1(1. 39 + 0. 04g/株，增加率為31. 13%);與對(duì)照組的中首一號(hào)紫花首猜單株根瘤總數(shù) (0. 34 + 0. 14個(gè)/株）相比，S1+T1組化32 + 0. 48個(gè)/株，增加率為582. 35% )和S2巧！ 組（1. 66 + 0. 75個(gè)/株，增加率為388. 24% )的中首一號(hào)紫花首猜的單株根瘤總數(shù)的增加 率均高于對(duì)照組1(0.89 + 0. 31個(gè)/株，增加率為161.76% );與對(duì)照組的中首一號(hào)紫花首 猜單株莖葉粗蛋白含量（185.6±12.0邑/1^莖葉干重）相比，51+1'1組（226.6±14.0邑/1^莖 葉干重，增加率為22. 09% )和S2+T1組（215. 6 + 10. 8g/kg莖葉干重，增加率為16. 16% ) 的中首一號(hào)紫花首猜的單株莖葉粗蛋白含量的增加率均高于對(duì)照組1 (204. 8 + 3.Og/kg莖 葉干重，增加率為10. 34% )。上述結(jié)果顯示，適宜濃度的水蘇堿和葫蘆己堿的組合物對(duì)于 中首一號(hào)紫花首猜的產(chǎn)量、品質(zhì)和單株根瘤菌總數(shù)都具有明顯的促進(jìn)作用；濃度為ΙΟμΜ 的水蘇堿和濃度為10μΜ的葫蘆己堿的組合物對(duì)于中首一號(hào)紫花首猜具有最強(qiáng)的促進(jìn)生 長(zhǎng)作用，濃度為20μΜ的水蘇堿和濃度為10μΜ的葫蘆己堿的組合物對(duì)中首一號(hào)紫花首猜 的促進(jìn)生長(zhǎng)作用次之，濃度為10μΜ的水蘇堿和濃度為20μΜ的葫蘆己堿的組合物對(duì)中首 一號(hào)紫花首猜無(wú)明顯促進(jìn)生長(zhǎng)作用。本發(fā)明的中首一號(hào)紫花首猜種子根瘤菌種衣劑的原料 易得，包衣方式簡(jiǎn)單可行，包衣種子適合儲(chǔ)存、運(yùn)輸和播種，且包衣的方式能為接種根瘤菌 侵染根系提供有利的侵染時(shí)間和空間。
【具體實(shí)施方式】
[0065] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0066] 下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0067] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。 !；00側(cè) 下述實(shí)施例中所用的首猜中華根瘤菌（Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631于 本申請(qǐng)的申請(qǐng)日前收藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)農(nóng)業(yè)微生物中屯、（中國(guó)農(nóng)業(yè)微 生物菌種保藏管理中屯、HAgri州huralQiltureCollectionofQiina，簡(jiǎn)稱(chēng)ACCC，地 址：北京市海淀區(qū)中關(guān)村南大街12號(hào)，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與農(nóng)業(yè)區(qū)劃研究所，郵編 100081)，自收藏之日起，公眾可從中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)農(nóng)業(yè)微生物中屯、獲得運(yùn) 株菌株，該生物材料只為重復(fù)本發(fā)明的相關(guān)實(shí)驗(yàn)所用，不可作為其它用途使用。 W例下述實(shí)施例中的鹽酸水蘇堿（產(chǎn)品目錄號(hào)：8214似）和葫蘆己堿鹽酸鹽產(chǎn)品目錄 號(hào)：B20522)均為上海源葉生物科技有限公司的產(chǎn)品。
[0070] 下述實(shí)施例中的ΥΜΑ液體培養(yǎng)基：甘露醇lOg、K2HPO40. 25g、KH2PO40. 25g、 Μ拆O4· 7&0 0. 2g、酵母粉 0.8g、化Cl0.Ig、蒸饋水 1000血，pH6. 8-7. 0。
[0071] 下述實(shí)施例中與實(shí)驗(yàn)直接相關(guān)的試劑、儀器、操作無(wú)特殊說(shuō)明的，均嚴(yán)格按照消毒 滅菌操作和無(wú)菌操作進(jìn)行。
[0072] 下述實(shí)施例中的莖葉粗蛋白含量的測(cè)定方法為凱式定氮法，儀器為FOSS凱式定 氮儀KjelteTM2300。
[0073] 實(shí)施例1、水蘇堿和葫蘆己堿組成的組合物對(duì)中首一號(hào)紫花首猜種子根瘤菌種衣 劑接種效果的影響
[0074] 一、利用水蘇堿和葫蘆己堿組成的組合物制備中首一號(hào)紫花首猜種子根瘤菌種衣 劑及丸衣首猜種子
[0075] 中首一號(hào)紫花首猜種子根瘤菌種衣劑，由根瘤菌劑、作為粘著劑的簇甲基纖維素 鋼、作為基質(zhì)的膨潤(rùn)上和脫脂乳組成，根瘤菌劑、粘著劑、基質(zhì)和脫脂乳運(yùn)四種組分每種組 分均獨(dú)立包裝。中首一號(hào)紫花首猜種子根瘤菌種衣劑中，根瘤菌劑、粘著劑、基質(zhì)和脫脂乳 的質(zhì)量比滿(mǎn)足100:1.6:300:0. 02。根瘤菌劑由用于提高首猜產(chǎn)量和/或品質(zhì)的根瘤菌培養(yǎng) 物（下文簡(jiǎn)稱(chēng)根瘤菌培養(yǎng)物）與含鋼根瘤菌吸附劑混勻而成。每532. 505g含鋼根瘤菌吸 附劑由488. 5g作為菌劑載體的草炭、Ig作為碳源的薦糖、0. 5g過(guò)憐酸巧、lOg石灰、1. 5g鋼 酸錠、0. 005g棚酸和31g水組成。根瘤菌劑中，鋼酸錠的質(zhì)量百分含量為0. 2%，首猜中華 根瘤菌（Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631的含量為5Xl〇9cfu/g。根瘤菌劑中，根瘤菌 培養(yǎng)物與根瘤菌吸附劑的配比滿(mǎn)足根瘤菌劑中鋼酸錠和首猜中華根瘤菌（Sinorhizobium meliloti)ACCC17631 的配比為 0. 2g鋼酸錠：5Xl〇iicfu首猜中華根瘤菌（Sinorhizobium meliloti)ACCC17631。中首一號(hào)紫花首猜種子根瘤菌種衣劑對(duì)照組1為將中首一號(hào)紫花首 猜種子根瘤菌種衣劑中的根瘤菌培養(yǎng)物替換為普通根瘤菌培養(yǎng)物，其余成分保持不變。
[0076] 1. 1、根瘤菌培養(yǎng)物的制備
[0077] 水蘇堿溶液配制：稱(chēng)取0. 0359g鹽酸水蘇堿，用蒸饋水定容到200mU配成濃度為 ImM的水蘇堿溶液；取50mL濃度為ImM水蘇堿溶液，用蒸饋水稀釋到lOOmU配成濃度為 0. 5mM的水蘇堿溶液。
[0078] 葫蘆己堿溶液配制：稱(chēng)取0. 0347g葫蘆己堿鹽酸鹽，用蒸饋水定容到200血，配成 濃度為ImM葫蘆己堿溶液；取50mL濃度為ImM的葫蘆己堿溶液液，用蒸饋水稀釋到lOOmL， 配成濃度為0. 5mM的葫蘆己堿溶液。
[0079] 將400μL濃度為0. 5mM的水蘇堿溶液和400μL濃度為0. 5mM的葫蘆己堿溶液加 入到19. 2mL的YMA液體培養(yǎng)基中，配置成根瘤菌培養(yǎng)基1 (記為S1巧1)，根瘤菌培養(yǎng)基1中 水蘇堿和葫蘆己堿的濃度均為10μΜ;將400μL濃度為ImM的水蘇堿溶液和400μL濃度為 0. 5mM的葫蘆己堿溶液加入到19. 2mL的ΥΜΑ液體培養(yǎng)基中，配置成根瘤菌培養(yǎng)基2 (記為 S化T1)，根瘤菌培養(yǎng)基2中水蘇堿的濃度為20μM，葫蘆己堿的濃度為10μΜ;將400μL濃 度為0. 5mM的水蘇堿溶液和400μL濃度為ImM的葫蘆己堿溶液加入到19. 2mL的ΥΜΑ液體 培養(yǎng)基中，配置成根瘤菌培養(yǎng)基3 (記為S1+T2)，根瘤菌培養(yǎng)基3中水蘇堿的濃度為10μΜ， 葫蘆己堿的濃度為20μΜ。
[0080] 菌種活化：實(shí)驗(yàn)菌株為首猜中華根瘤菌（Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631，將 其在斜面培養(yǎng)基上28°C培養(yǎng)4化后，分別加入到根瘤菌培養(yǎng)基1、根瘤菌培養(yǎng)基2、根瘤菌 培養(yǎng)基3和ΥΜΑ液體培養(yǎng)基中，28°C，160r·mirTi轉(zhuǎn)速的搖床中震蕩培養(yǎng)4她，分別制備 成種子液1、種子液2、種子液3和普通種子液。將種子液1按照體積比1:99接種到根瘤 菌培養(yǎng)基1中，種子液2按照體積比1:99接種到根瘤菌培養(yǎng)基2中，種子液3按照體積比 1:99接種到根瘤菌培養(yǎng)基3中，普通種子液按照體積比1:99接種到Y(jié)MA液體培養(yǎng)基中，在 28°C，16化'min-i轉(zhuǎn)速的搖床中震蕩培養(yǎng)4她，分別獲得根瘤菌培養(yǎng)物1、根瘤菌培養(yǎng)物2、 根瘤菌培養(yǎng)物3和普通根瘤菌培養(yǎng)物。根瘤菌培養(yǎng)物1中首猜中華根瘤菌（Sinorhizobium meliloti)ACCC17631的含量為1.73Xl〇i°c化/g，根瘤菌培養(yǎng)物2中首猜中華根瘤菌 (Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631 的含量為 1. 73Xl〇i°cfu/g，根瘤菌培養(yǎng)物 3 中首猜 中華根瘤菌（Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631 的含量為 1. 73X10"cfu/g，普通根瘤菌 培養(yǎng)物中首猜中華根瘤菌（Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631的含量為1. 73Xl〇i°cfu/ 邑。
[0081] 1.2、根瘤菌吸附劑的制備
[0082] 每532. 505g根瘤菌吸附劑由488. 5g作為菌劑載體的草炭、Ig作為碳源的薦糖、 0. 5g過(guò)憐酸巧、lOg石灰、1. 5g鋼酸錠，0. 005g棚酸和31g水。12TC下滅菌30min，其中，草 炭過(guò)100目篩。
[0083] 1.3、根瘤菌劑的制備
[0084] 分別將步驟1. 1中的根瘤菌培養(yǎng)物1、根瘤菌培養(yǎng)物2、根瘤菌培養(yǎng)物3和普通根 瘤菌培養(yǎng)物與步驟1. 2中的根瘤菌吸附劑按29:71的質(zhì)量比混勻，分別得到根瘤菌劑1、根 瘤菌劑2、根瘤菌劑3和對(duì)照組1根瘤菌劑。根瘤菌劑1中首猜中華根瘤菌（Sinorhizobium meliloti)ACCC17631的含量為5X109c化/g，鋼酸錠的質(zhì)量百分含量為0. 2% ;根瘤菌劑 2 中首猜中華根瘤菌（Sinorhizobiummeliloti)ACCC17631 的含量為5Xl〇9cfu/g，鋼酸 錠的質(zhì)量百分含量為0.2% ;根瘤菌劑3中首猜中華根瘤菌（Sinorhizobiumm