涂W在洗脫祀分子之前，從基質(zhì)除去弱結(jié)合的污染 物和/或在加載后除去非-結(jié)合的或弱結(jié)合的祀分子。
[0046] 在運(yùn)種情況下，典型地，洗涂緩沖液和加載緩沖液是相同的。在使用病毒滅活緩沖 液的情況下，其被用來(lái)在洗脫祀分子之前，滅活某些存在的病毒。在運(yùn)種情況下，典型地，病 毒滅活緩沖液不同于加載緩沖液，因?yàn)樗珊幸环N或多種洗涂劑或具有不同的性能（pH/ 電導(dǎo)率/鹽和它們的量）。
[0047] 洗涂也可用來(lái)在洗脫祀分子之后，從基質(zhì)除去污染物。運(yùn)通過(guò)在洗脫祀分子之后， 使適當(dāng)?shù)囊后w，例如緩沖液通過(guò)或流經(jīng)基質(zhì)來(lái)進(jìn)行。在運(yùn)種情況下，典型地，洗涂緩沖液不 同于加載緩沖液。它可含有一種或多種洗涂劑或有不同的性能（pH/電導(dǎo)率/鹽和它們的 量）。洗涂緩沖液是例如酸性緩沖液。
[0048] 從色譜基質(zhì)"洗脫"分子（例如，所提及的多膚像免疫球蛋白G或雜質(zhì)）意指從 中除去分子。當(dāng)祀分子在加載緩沖液之前用溶劑洗脫時(shí)，洗脫可W流通模式直接進(jìn)行，或通 過(guò)改變?nèi)芤簵l件，W使不同于加載緩沖液的緩沖液與所設(shè)及的分子在色譜樹(shù)脂上競(jìng)爭(zhēng)配體 位點(diǎn)來(lái)進(jìn)行洗脫。非-限制性實(shí)例是通過(guò)改變離子交換材料周圍的緩沖液的離子強(qiáng)度，W 使緩沖液在離子交換材料上與所述分子競(jìng)爭(zhēng)荷電位點(diǎn)，從離子交換樹(shù)脂洗脫分子。
[0049] 術(shù)語(yǔ)"平均粒徑"或d50意指在50%的累積粒度分布的平均粒徑分布值。粒徑用 激光-衍射，優(yōu)選地用Malvern'MasterSizer測(cè)定。
[0050] 術(shù)語(yǔ)"平均孔徑"意指在50%的累積孔徑分布的平均孔徑分布值。
[0051] 在此可W互換使用的術(shù)語(yǔ)"流通過(guò)程"、"流通模式"和"流通操作"，指運(yùn)樣的分離 技術(shù)，其中意欲使包含在樣品中的至少一種祀分子（例如，包含F(xiàn)c-區(qū)的蛋白或抗體）W 及一或多種雜質(zhì)流通色譜基質(zhì)，所述基質(zhì)通常結(jié)合一或多種雜質(zhì)，其中祀分子通常不結(jié)合 (即，流通）并用加載緩沖液從基質(zhì)洗脫。
[0052]本文所用的術(shù)語(yǔ)"結(jié)合和洗脫模式"和"結(jié)合和洗脫過(guò)程"，指運(yùn)樣的分離技術(shù)， 其中包含在樣品中的至少一種祀分子（例如，包含F(xiàn)c區(qū)的蛋白）結(jié)合合適的色譜基質(zhì)（例 如，離子交換色譜介質(zhì)），隨后用不同于加載緩沖液的緩沖液洗脫。 陽(yáng)化引發(fā)巧詳沐 本純化過(guò)程的起始原料可W是包含待純化的祀分子的任何樣品。典型地，樣品是血或 血漿或從血或血漿獲得。有利地，樣品是含免疫球蛋白的血漿蛋白部分。為此起始原料可 W是正常人血漿或可來(lái)源于具有高滴度的特異性抗體，如超免疫血漿的供體。
[0054] 依據(jù)本發(fā)明的方法，運(yùn)樣的包含祀分子的樣品經(jīng)受至少一個(gè)純化步驟，其中樣品 被加載到包含陰離子交換官能度的色譜基質(zhì)上。 陽(yáng)化5] 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與例如基于甲基丙締酸醋共聚物的強(qiáng)陰離子交換劑像Macro-Prep? 化曲Q或基于瓊脂糖的陰離子交換劑像QSe地aroseFF比較，依據(jù)本發(fā)明的某種類型 的色譜基質(zhì)的使用導(dǎo)致所述祀分子的5-10%的特別更高的收率，W及更高的純度。例如， 與QSe地aroseFF比較，表示為IgG祀部分中IgA和IgM之和的純度通常為5倍高，與 Macro-Prep?化曲Q比較，祀蛋白IgG的收率通常高7. 7%，參見(jiàn)表1用于參考。
[0056] 此顯著的效果通過(guò)使用攜帶600和1200帕ol/g之間的陰離子基團(tuán)的親水性聚乙 締酸基質(zhì)而獲得。
[0057] 待使用的基質(zhì)優(yōu)選地基于親水性交聯(lián)聚合物，后者基于共聚物，所述共聚物至少 包含 a) 至少一種式I的親水取代的烷基乙締基酸
其中R1、R2、R3彼此獨(dú)立地可W是Η或C1-C6烷基，優(yōu)選地Η或-邸3， 和R4是攜帶至少一個(gè)徑基的基團(tuán) 和 b) 至少一種符合式II和/或III和/或IV的交聯(lián)劑，
其中X是具有2-5個(gè)C原子、優(yōu)選2或3個(gè)C原子的二價(jià)烷基，其中不鄰近和不位于N的直接附近的一個(gè)或多個(gè)亞甲基可W被0、C=0、S、S=0、S〇2、畑、N0H或N替代和所述亞 甲基的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、面素、Ν&、C5-C10-芳基、 ΝΗ-(C1-C8)-烷基、Ν-(C1-C8)-烷基 2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η取代，和
其中在式HI和IV中的Y1和Υ2彼此獨(dú)立地是Cl-ClO烷基或環(huán)烷基，其中一個(gè)或多個(gè) 非-鄰近的亞甲基或不位于N的直接附近的亞甲基可W被0、C=0、S、S=0、S〇2、畑、N0H或N 替代和亞甲基的一個(gè)或多個(gè)Η可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、面素、Ν&、C5-C10-芳 基、NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η取代， 或C6-C18芳基，其中芳基系統(tǒng)中的一個(gè)或多個(gè)Η可彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、 面素、畑2、NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η取代，和 A是具有2-5個(gè)C原子、優(yōu)選2或3個(gè)C原子的二價(jià)烷基，其中一個(gè)或多個(gè)非-鄰近的 亞甲基或不位于N的直接附近的亞甲基可W被0、C=0、S、S=0、S〇2、畑、N0H或N替代和所 述亞甲基的一個(gè)或多個(gè)Η可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、面素、Ν&、C5-C10-芳基、 NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η取代。
[0058] 式I中的R4典型地是攜帶至少一個(gè)徑基的烷基、環(huán)脂族基團(tuán)或芳基。
[0059] 運(yùn)意指聚合物通過(guò)來(lái)自式I的親水取代的烷基乙締基酸組的至少一種化合物和 來(lái)自式II和/或III和/或IV的交聯(lián)劑組的至少一種化合物的共聚而形成。優(yōu)選地，使 用僅僅一種來(lái)自式I的親水取代的烷基乙締基酸組的化合物和一種來(lái)自式Ii、m或IV的 交聯(lián)劑組的化合物。
[0060] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I中的R4是 直-鏈或分支C1-C10烷基，其中一個(gè)或多個(gè)非-鄰近的亞甲基可被0、C=0、S、S=0、S〇2、NH、N0H、N替代和/或其中一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被C1-C6-烷基、巧-CIO-芳 基、面素、畑2、NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0H取代和 其中至少一個(gè)0H基團(tuán)存在于C1-C10烷基上或者存在于取代基上， 或環(huán)脂族基團(tuán)，典型地具有5-10個(gè)C原子，其中一個(gè)或多個(gè)非-鄰近的亞甲基可被0、C=0、S、S=0、S〇2、NH、N0H、N替代和/或其中環(huán)脂族基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立 地被C1-C6-烷基、C5-C10-芳基、面素、畑2、NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-燒氧 基或C1-C6-烷基-0H取代，其中至少一個(gè)0H基團(tuán)存在于環(huán)脂族環(huán)上或者存在于側(cè)鏈或取 代基上，或 C6-C18芳基，其中芳基中的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、C5-C10-芳基、面素、畑2、NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η 取代，其中至少一個(gè)0H基團(tuán)存在于芳基上或者存在于側(cè)鏈或取代基上，或 巧-C18雜芳基，其中雜芳基中的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-燒 基、C5-C10-芳基、面素、畑2、NH(C1-C8)烷基、N(C1-C8)烷基2、C1-C6-烷氧基或C1-C6-燒 基-0H取代，其中至少一個(gè)0H基團(tuán)存在于雜芳基上或者存在于側(cè)鏈或取代基上。
[0061] 在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，式I中的R4是 直-鏈或分支C1-C10烷基，其中一個(gè)或多個(gè)非-鄰近的亞甲基可W被0、S、S〇2或NH替 代和/或其中一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被C1-C6-烷基、C5-C10-芳基、C1-C6-燒 氧基或C1-C6-烷基-0Η取代和其中至少一個(gè)0Η基團(tuán)存在于C1-C10烷基上或者存在于取 代基上， 或環(huán)脂族基團(tuán)，典型地具有5-10個(gè)C原子，其中一個(gè)或多個(gè)非-鄰近的亞甲基可W被 0、S、S〇2或ΝΗ替代和/或其中環(huán)脂族基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被C1-C6-燒 基、C5-C10-芳基、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η取代，其中至少一個(gè)0Η基團(tuán)存在于環(huán) 脂族環(huán)上或者存在于側(cè)鏈或取代基上，或 C6-C14芳基，其中芳基中的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、C5-C10-芳基、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-0Η取代，其中至少一個(gè)0Η基團(tuán)存在于芳基上 或者存在于側(cè)鏈或取代基上，或 C6-C14雜芳基，其中至少一個(gè)Ν原子作為雜原子存在和其中雜芳基中的一個(gè)或多個(gè)Η原子可W彼此獨(dú)立地被徑基、C1-C6-烷基、C5-C10-芳基、C1-C6-烷氧基或C1-C6-烷基-OH 取代，其中至少一個(gè)OH基團(tuán)存在于雜芳基上或者存在于側(cè)鏈或取代基上。
[0062] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所用的親水取代的烷基乙締基酸是式I的化合物，其中R4 是攜帶徑基的基團(tuán)。
[0063] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所用的親水取代的烷基乙締基酸是1,2-乙二醇單乙締基 酸、1，3-丙二醇單乙締基酸、1，4-下二