，卵巢 腫瘤，淋巴瘤，急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病，急性和慢性粒細(xì)胞白血病，膀胱癌，前列腺癌， 胰腺癌，乳腺癌和胃癌。通過本發(fā)明的產(chǎn)物和/或方法優(yōu)選治療的疾病包括黑色素瘤，非小 細(xì)胞肺癌，胰腺癌和肝小膽管癌。
[0060] 本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的醫(yī)學(xué)用途涉及免疫療法，優(yōu)選過繼性T細(xì)胞療法。本發(fā)明的 產(chǎn)物和方法特別用于過繼性T細(xì)胞療法方面。例如，本發(fā)明的化合物的施用可涉及將本發(fā) 明的T細(xì)胞注入所述患者。優(yōu)選地，這樣的T細(xì)胞為患者的自體T細(xì)胞，其在體外轉(zhuǎn)導(dǎo)有本 發(fā)明的核酸或抗原識別構(gòu)建體。
[0061] 又一方面，本發(fā)明公開了用于制備表達(dá)MGE-Al特異性抗原識別構(gòu)建體（ARC)的 細(xì)胞系的方法，其包括：
[0062] a.提供合適的宿主細(xì)胞，
[0063] b.提供編碼ARC的遺傳構(gòu)建體，其中所述ARC包含⑶R3,其具有與選自SEQ ID No. 1-6 的氨基酸序列具有至少 50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%或100%序列 同一性的氨基酸序列。
[0064] c.將所述遺傳構(gòu)建體引入所述合適的宿主細(xì)胞，
[0065] d.通過所述合適的宿主細(xì)胞表達(dá)所述遺傳構(gòu)建體。
[0066] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，上述方法還包括所述ARC的細(xì)胞表面呈現(xiàn)的步驟。
[0067] 當(dāng)然，也優(yōu)選本發(fā)明該方面的內(nèi)容，所述ARC為根據(jù)本文如上所述的發(fā)明方面的 ARC。在這方面，另外或可選擇的，也優(yōu)選所述ARC為哺乳動(dòng)物來源的ARC，優(yōu)選人來源的 ARC。
[0068] 用于在本發(fā)明的方法中使用的優(yōu)選的合適的宿主細(xì)胞為哺乳動(dòng)物，特別為人細(xì) 胞，如人T-細(xì)胞。用于在本發(fā)明使用的T細(xì)胞在本文的上文中有詳細(xì)描述。
[0069] 在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法所產(chǎn)生的ARC為TCR。例如也包括具有另外 (功能）結(jié)構(gòu)域的TCR或提供有可選擇的結(jié)構(gòu)域的TCR，例如提供有外來跨膜結(jié)構(gòu)域作為膜 錨著點(diǎn)的TCR。例如，根據(jù)本發(fā)明所產(chǎn)生的TCR為α / β TCR、γ / δ TCR或單鏈TCR(scTCR)。 另外，由本發(fā)明包括的TCR形式通常為本領(lǐng)域已知的任何TCR，特別是本文所述的那些TCR。
[0070] 預(yù)期地，用于在根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的轉(zhuǎn)染體系為逆轉(zhuǎn)錄病毒載體體系。這 樣的體系為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。
[0071] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明也包含從細(xì)胞中純化ARC，任選地，重構(gòu)T細(xì)胞中翻譯 的ARC-片段的額外的方法步驟。
[0072] 在本發(fā)明的可選的方面中，通過用于生產(chǎn)T細(xì)胞受體（TCR)的方法獲得或可獲得T 細(xì)胞，其對腫瘤細(xì)胞是特異性的并且具有本文上述的高親和力。這樣的T細(xì)胞取決于本發(fā) 明的方法中所用的宿主細(xì)胞，例如人或非-人T細(xì)胞，優(yōu)選人TCR。
[0073] 因此也提供藥物組合物，其包含任何本文所述的本發(fā)明的產(chǎn)物，具體為任何蛋白 質(zhì)，核酸或宿主細(xì)胞。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物組合物用于免疫療法。
[0074] 用于本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑的實(shí)例包括穩(wěn)定劑，如SPGA、碳水化 合物（例如山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、葡聚糖）、蛋白質(zhì)，如白蛋白或酪蛋白、含有 蛋白質(zhì)的制劑如牛血清或脫脂奶和緩沖液（例如磷酸鹽緩沖液）。
[0075] 將在以下的實(shí)施例中結(jié)合附圖和序列進(jìn)一步描述本發(fā)明，然而，并非限于此。為了 本發(fā)明的目的，本文所引用的全部參考文獻(xiàn)通過引用的方式以其整體并入本文。在圖和序 列中：
[0076] 附圖簡述
[0077] 圖1 :顯示過繼性T細(xì)胞療法的概念
[0078] 圖2 :顯示MAGE-Al和它的表位定位
[0079] 圖3 :顯示ABabDII小鼠中針對MAGE-Al的免疫應(yīng)答
[0080] 圖4 :顯不TCR載體的不意圖
[0081] 圖5 :顯示TCR轉(zhuǎn)導(dǎo)的Jurkat 76細(xì)胞的FACS結(jié)果
[0082] 圖6 :顯示MGE-Al特異性T細(xì)胞的功能親和力
[0083] 圖7 :顯示通過轉(zhuǎn)導(dǎo)有本發(fā)明的MAGE-Al特異性TCR的T細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞識別 MAGE-Al
[0084] 圖8 :pMP71-TCR1367hc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 13的核苷酸1041 和2864之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1970之間，α鏈在2037和2864之間。
[0085] 圖9 :pMP71-TCR1367mc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 14的核苷酸1041 和2834之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1952之間，α鏈在2019和2834之間。
[0086] 圖10 :pMP71-TCR1367mmc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 15的核苷酸 1041和2864之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1970之間，α鏈在2037和2864之間。
[0087] 圖11 :pMP71-TCR1405hc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 16的核苷酸 1041和2855之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1967之間，α鏈在2034和2855之間。
[0088] 圖12 :pMP71-TCR1405mc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 17的核苷酸 1041和2825之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1949之間，α鏈在2016和2825之間。
[0089] 圖13 :pMP71-TCR1405mmc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 18的核苷酸 1041和2854之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1967之間，α鏈在2034和2854之間。
[0090] 圖14 :pMP71-TCR1705hc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 19的核苷酸 1041和2894之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和2006之間，α鏈在2073和2894之間。
[0091] 圖15 :pMP71-TCR1705mc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 20的核苷酸 1041和2864之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和1988之間，α鏈在2055和2864之間。
[0092] 圖16 :pMP71-TCR1705mmc的載體圖。TCR編碼序列位于SEQ ID No. 21的核苷酸 1041和2894之間。TCRP鏈位于核苷酸1041和2006之間，α鏈在2073和2894之間。
[0093] 圖17 :T2細(xì)胞與濃度漸增的MAGE-A1278孵育并且與已轉(zhuǎn)染有如所示的不同TCR 的人T細(xì)胞共培養(yǎng)。12小時(shí)后，通過測定培養(yǎng)物中的IFNy來評價(jià)功能應(yīng)答。
[0094] 圖18 :Τ2細(xì)胞負(fù)載10 5mol/lMAGE-A1278或與MAGE-A1278僅有2個(gè)氨基酸不同的 在人蛋白組學(xué)上兩個(gè)最相似的表位（MAGE-B16和MAGE-B5)，并且與TCR修飾的T細(xì)胞共培 養(yǎng)?；贗FNy的產(chǎn)生評價(jià)功能應(yīng)答。
[0095] 圖19 :T2細(xì)胞負(fù)載114種不同的HLA-A2限制性自體肽的其中一種（濃度 10 5mol/l)，并且與來自兩個(gè)不同供體的轉(zhuǎn)導(dǎo)有TCR 1367的T細(xì)胞共培養(yǎng)。供體1的結(jié)果 用黑色圓點(diǎn)表示，供體2的結(jié)果通過白色圓點(diǎn)表示。
[0096] SEQ ID No 1-6:顯示本發(fā)明的TCR的α和0CDR3序列。
[0097] SEQ ID No 7-10 :顯示健康人體的α和β鏈CDR3序列。
[0098] SEQ ID No 11-12 :顯示人（11)和小鼠（12) MAGE-Al 的表位序列。
[0099] SEQ ID No 13-21 :顯示圖8-16的載體核苷酸序列。
[0100] SEQ ID No 22-39 :顯示本發(fā)明的TCR的α和β鏈的完整的氨基酸序列
[0101] SEQ ID No 40-51 :顯示 Va 和 νβ 基因的 α 和 PCDRl 和 CDR2 序列 實(shí)施例
[0102] 實(shí)施例1 :使用ABabDII小鼠產(chǎn)生具有MAGE表位的T細(xì)胞
[0103] 圖2顯示HLA-A2限制性表位MAGE-Al278 286的位置在有關(guān)全長MAGE-Al蛋白質(zhì)中 的定位（頂端）。人MAGE-Al2782s6表位與它的小鼠同源物顯著不同以放置ABabDII小鼠中 人MGE-Al 278 286的耐受性（底部）。
[0104] MAGE-Al在多種人腫瘤中表達(dá)，而它在正常人組織中的表達(dá)據(jù)信限于睪丸。因此， 特異性靶向表達(dá)MGE-Al的細(xì)胞應(yīng)該將毒性限于最小。
[0105] ABabDII小鼠用不完全弗氏佐劑中的包含九聚物MAGE-Al278 286加 CpG的30肽免 疫。用不完全弗氏佐劑中的九聚物MAGE-Al2782s6加 CpG進(jìn)行加強(qiáng)。在分析的那天，取血并 用MAGE-A1/HLA-A2特異性四聚體和用于某個(gè)TRBV鏈的抗體（niGT命名法）染色。數(shù)次加 強(qiáng)后，MAGE-Al特異性T細(xì)胞的單克隆群體在ABabDII小鼠的血液中是可檢測的。圖3顯 示被免疫動(dòng)物的免疫應(yīng)答和免疫方案。用四聚體染色觀察到被免疫的細(xì)胞的FACS分析中 的明顯轉(zhuǎn)移，其表明產(chǎn)生了 MGE特異性T細(xì)胞。
[0106] 實(shí)施例2 :T細(xì)胞受體的分離和鑒定
[0107] 來自實(shí)施例1中所產(chǎn)生的MAGE-Al特異性T細(xì)胞克隆的cDNA通過5' -RACE擴(kuò)增 并測序。
[0108] 表1顯示來自ABabDII小鼠的三種不同的TCR和從健康人中獲得的兩種TCR 的α和β鏈的互補(bǔ)決定區(qū)3 (Q)R3)的氨基酸序列（Otta