目標(biāo)基因，從而對(duì)于所述表達(dá)是 是優(yōu)選的啟動(dòng)子是aER或細(xì)胞周期蛋白D1啟動(dòng)子。
[0169] siRNA可從所謂的shRNA(短發(fā)夾RNA)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生，其特征在于通過(guò)環(huán)或發(fā)夾區(qū)連 接的形成siRNA的反向平鏈。siRNA可由質(zhì)粒或病毒，特別是逆轉(zhuǎn)錄病毒編碼，并且在啟動(dòng)子 的控制之下。適合用于表達(dá)shRNA的啟動(dòng)子是關(guān)于siRNA表達(dá)的前述段落中指示的啟動(dòng)子。 [0170] 適合用于siRNA和shRNA表達(dá)的載體包括原核生物表達(dá)載體諸如pUC18、pUC19、 口1311168〇1^。1:及衍生物、115)18、115)194131?3224]\1139、&3此14〇?1、1^4、卩策菌體和穿梭載體諸如 pSA3和pAT28、酵母表達(dá)載體諸如2-微米質(zhì)粒、整合質(zhì)粒、YEp載體、著絲粒質(zhì)粒和類似載體、 昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)載體諸如pAC系列和pVL系列載體、植物細(xì)胞中的表達(dá)載體諸如pIBI系 列、pEar 1 eyGate、pAVA、pCAMBI A、pGSA、pGWB、pMDC、pMY、pORE 和類似載體，和基于病毒載體 (腺病毒、與腺病毒相關(guān)的病毒以及逆轉(zhuǎn)錄病毒，具體地，慢病毒）以及非病毒載體（諸如 pcDNA3、pHCMV/Zeo、pCR3.1、pEFI/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、pTRACER-HCMV、 pUB6/V5-His、pVAXI、pZeoSV2、pCI、pSVL 和 口1(5￥-1〇48?￥-14]^2(1和口了01'1)的大的真核細(xì) 胞表達(dá)載體。慢病毒載體是用于開(kāi)發(fā)的優(yōu)選載體。
[0171]本發(fā)明的siRNA和shRNA可通過(guò)使用本領(lǐng)域?qū)＜乙阎囊幌盗屑夹g(shù)來(lái)獲得。用作設(shè) 計(jì)siRNA的基礎(chǔ)的核苷酸序列區(qū)域不受限制，并且可含有編碼序列的區(qū)域(起始密碼子與末 端密碼子之間）或，可選擇地，其可含有5 '或3 '非翻譯區(qū)的序列（優(yōu)選地長(zhǎng)度為25至50個(gè)核 苷酸），和相對(duì)于起始密碼子在有義3'位置中的任何位置。設(shè)計(jì)siRNA的方法包括鑒定AA (N19)TT基序，其中N可以是基因序列特別是PTHLH或P0DXL中的任何核苷酸，和具有高GC含 量的基因序列的選擇。如果未發(fā)現(xiàn)這樣的基序列，可能鑒定NA(N21)，其中N可以是任何核苷 酸。
[0172]基因特異性DNA酶是用于抑制基因表達(dá)的優(yōu)選試劑。DNA酶整合了反義技術(shù)和核酶 的一些機(jī)械地征。DNA酶被設(shè)計(jì)來(lái)識(shí)別特定核酸的靶序列，與反義寡核苷酸類似，但與核酶 一樣，它們催化并特異性切割靶核酸。
[0173] 抑制基因表達(dá)的優(yōu)選的試劑是被設(shè)計(jì)來(lái)催化切割靶mRNA的轉(zhuǎn)錄物以防止編碼期 望抑制其活性的PTHLH或P0DXL的mRNA的翻譯的核酶。核酶是能夠催化RNA的特異性切割的 RNA酶分子。（關(guān)于綜述，參見(jiàn)，Rossi，Current Biology 4:469-471，1994)。核酶作用機(jī)制包 括與互補(bǔ)靶RNA的特異性分子序列雜交，隨后進(jìn)行內(nèi)切核苷酸的切割事件。核酶分子的組成 優(yōu)選地包括一個(gè)或多個(gè)針對(duì)祀mRNA的互補(bǔ)序列，和負(fù)責(zé)mRNA切割的公知序列或功能上等同 的序列（參見(jiàn)例如美國(guó)專利號(hào)5093246)。
[0174] 用于本發(fā)明的核酶包括錘頭核酶、內(nèi)切核糖核酸酶RNA(在下文中稱為"Cech核酶" (Zaug等人，Science 224:574-578，1984〇
[0175] 核酶可由經(jīng)修飾的寡核苷酸（例如，以提高穩(wěn)定性、引導(dǎo)性等)組成并且應(yīng)當(dāng)被分 配至體內(nèi)表達(dá)靶基因的細(xì)胞。優(yōu)選的分配方法包括以使轉(zhuǎn)染的細(xì)胞將產(chǎn)生充足量的核酶來(lái) 破壞內(nèi)源靶信使并抑制翻譯的方式，使用"編碼"在強(qiáng)p〇l III或p〇l II組成型啟動(dòng)子的控 制下的核酶的DNA構(gòu)建體。因?yàn)楹嗣福c其它反義分子不同，它們需要極低的細(xì)胞內(nèi)濃度來(lái) 起作用。
[0176] 在抑制基因產(chǎn)物的活性的化合物的情況下，這些化合物可通過(guò)使用能夠測(cè)定此種 產(chǎn)物的活性的特定測(cè)定來(lái)鑒定。作為偏好，抑制基因產(chǎn)物的活性的化合物可通過(guò)使用本發(fā) 明的實(shí)施例3中解釋的測(cè)定來(lái)鑒定，所述測(cè)定的特征在于抑制劑在具有高轉(zhuǎn)移群集能力的 乳腺癌轉(zhuǎn)移的動(dòng)物模型中減少溶骨性病變的形成和/或分化破骨細(xì)胞體外轉(zhuǎn)移性病灶的能 力的測(cè)定。在本發(fā)明中，當(dāng)化合物能夠使此種產(chǎn)物的活性降低至少10%、至少20%、至少 30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或100%降低（基因產(chǎn) 物的完全滅活），則所述化合物被認(rèn)為是基因產(chǎn)物的活性的抑制劑。
[0177] 用于本發(fā)明的抑制基因產(chǎn)物活性的試劑的實(shí)例包括，但不限于，針對(duì)基因產(chǎn)物的 特異性抑制抗體、基因產(chǎn)物的陰性顯性變體和基因產(chǎn)物的抑制肽。
[0178] 抑制基因產(chǎn)物的另一個(gè)優(yōu)選試劑是針對(duì)該產(chǎn)物的特異性抑制性抗體。所述抗體可 通過(guò)使用本領(lǐng)域?qū)＜乙阎娜魏畏椒▉?lái)制備，其中的一些方法先前已進(jìn)行了說(shuō)明。因此，多 克隆抗體可通過(guò)用希望被抑制的蛋白質(zhì)免疫動(dòng)物來(lái)制備。單克隆抗體可通過(guò)使用由 Kohler，Milstein等人(Nature, 1975,256:495)描述的方法來(lái)制備。本發(fā)明的說(shuō)明書中的適 當(dāng)抗體包括包含結(jié)合抗原的可變區(qū)和恒定區(qū)的完整抗體、Fab、F(ab'）2和Fab'片段、Fv、 scFv、納米抗體、雙鏈抗體和雙特異性抗體。在已通過(guò)蛋白質(zhì)-結(jié)合能力（特別是針對(duì)PTHLH 或P0DXL的）鑒定抗體后，能夠抑制該蛋白的活性的那些抗體將通過(guò)使用用于將試劑鑒定為 抑制劑的測(cè)定來(lái)選擇。
[0179] 用于抑制基因產(chǎn)物活性的另一個(gè)優(yōu)選試劑是所述產(chǎn)物的抑制肽。
[0180]用于抑制基因產(chǎn)物活性的另一種優(yōu)選試劑是該基因產(chǎn)物的"陰性顯性突變體"。本 發(fā)明考慮使用基因產(chǎn)物的陰性顯性突變體以及編碼所述突變體的多核苷酸?？捎糜谡{(diào)控本 發(fā)明的多核苷酸的轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子可以是組成型啟動(dòng)子，意指它們可以主要指導(dǎo)其中轉(zhuǎn)錄活 性需要外來(lái)信號(hào)的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄。用于調(diào)控轉(zhuǎn)錄的適當(dāng)?shù)慕M成型啟動(dòng)子，除其它以 外，是CMV啟動(dòng)子、SV40啟動(dòng)子、DHFR啟動(dòng)子、小鼠乳房瘤病毒(MMTV)啟動(dòng)子、延伸因子la (EFla)啟動(dòng)子、白蛋白啟動(dòng)子、ApoAl啟動(dòng)子、解蛋白啟動(dòng)子、CD3啟動(dòng)子、重-或輕-免疫球蛋 白鏈啟動(dòng)子、神經(jīng)絲啟動(dòng)子、神經(jīng)元特異性稀醇酶啟動(dòng)子、L7啟動(dòng)子、CD2啟動(dòng)子、肌球蛋白 輕鏈啟動(dòng)子、Η0Χ啟動(dòng)子、胸苷激酶啟動(dòng)子、RNA聚合酶II啟動(dòng)子、MyoD啟動(dòng)子、磷酸甘油激酶 (PGK)、低密度脂蛋白啟動(dòng)子、肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子。調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活物表達(dá)的優(yōu)選啟動(dòng)子是PGK啟 動(dòng)子。調(diào)控本發(fā)明的多核苷酸轉(zhuǎn)錄的優(yōu)選的啟動(dòng)子是噬菌體T7RNA聚合酶。
[0181] 優(yōu)選地，可用于本發(fā)明的背景的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是對(duì)誘導(dǎo)劑起反應(yīng)的，在誘導(dǎo)劑不 存在的情況下未顯示基線表達(dá)或顯示不顯著的基線表達(dá)并且能夠促進(jìn)位于位置3'的基因 的激活的那些啟動(dòng)子。基于誘導(dǎo)劑的類型，誘導(dǎo)型啟動(dòng)子被分類為Tet開(kāi)/關(guān)型啟動(dòng)子 (Gossen，M.y H.Bujard( 1992)Proc .Natl .Acad. Sci ·USA,89:5547-5551 ;Gossen，Μ·等人， 1995,Science 268:1766-1769；Rossi,F.M.V.y H . M . Blau , 1 998, Curr.Opin.Biotechnol .9:451-456) ;Pip開(kāi)/關(guān)型啟動(dòng)子(US6287813);抗孕酮-依賴性啟動(dòng) 子（US2004132086)、蛻皮激素-依賴性啟動(dòng)子（Christopherson等人，1992， Proc .Natl .Acad. Sci.USA,89 :6314-6318;No等人，1996，Proc.Natl .Acad. Sci.USA,93: 3346-3351，Suhr等人，1998，Proc · Natl · Acad · Sci · USA，95:7999-8004y W09738117)、金屬 硫蛋白-依賴性啟動(dòng)子（W08604920)、雷帕霉素-依賴性啟動(dòng)子（Rivera等人，1996， Nat.Med.2:1028-32)。
[0182] 適合于編碼c-MAF的顯性陰性變體[sic:變體]的多核苷酸的表達(dá)的載體包括原核 生物中的表達(dá)載體的載體衍生物諸如pUC18、pUC19、Bluescript及其衍生物、mpl8、mpl9、 ?81?322、？?jī)?cè)9、(：〇比1、？0^、1^4、噬菌體，以及〃穿梭〃載體諸如？343和?4了28、酵母中的表達(dá) 載體諸如2微米質(zhì)粒載體、整合質(zhì)粒、Yep載體、著絲粒和類似質(zhì)粒、昆蟲細(xì)胞表達(dá)載體諸如 pAC和pVL系列載體、植物表達(dá)載體諸如pIBI、pEarleyGate、pAVA、pCAMBIA、pGSA、pGWB、 pMDC、pMY、p0RE系列載體和類似載體，以及高等真核細(xì)胞中的基于病毒載體(腺病毒或與其 結(jié)合的病毒，諸如逆轉(zhuǎn)錄病毒，特別是慢病毒）以及非病毒載體(諸如pSilencer 4.1-CMV (Ambion)、pcDNA3、pcDNA3.1/hyg pHCMV/Zeo、pCR3.l、pEFl/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、 pSV40/Zeo2、pTracer-HCMV、pUB6/V5-His、pVAXl、pZeoSV2、pCI、pSVU^pKSV-10、pBPV-l、 pML2d和pTDTl)的表達(dá)載體。
[0183] 在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇其表達(dá)響應(yīng)腫瘤尤其是乳腺腫瘤、結(jié)腸腫瘤、肺腫瘤、腎 腫瘤或甲狀腺腫瘤，更特別地是乳腺腫瘤中的c-MAF表達(dá)水平的升高而增加，或其表達(dá)響應(yīng) 腫瘤尤其是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別地是乳腺癌中的c-MAF表達(dá)水平 的升尚而減少的基因，表1中描述的基因。
[0184] 在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案中，其表達(dá)在乳腺腫瘤中響應(yīng)c-MAF表達(dá)水平的升高而 增加的基因是PHTLH基因。在可選擇的優(yōu)選實(shí)施方案中，其表達(dá)在乳腺腫瘤中響應(yīng)c-MAF表 達(dá)水平的升高而增加的基因是P0DXL基因。
[0185] 因此，抑制PHTHL表達(dá)或所述基因的產(chǎn)物活性的試劑包括，但不限于，針對(duì)PHTHL基 因的特異性siRNA、針對(duì)PHTHL基因的特異性反義寡核苷酸、針對(duì)PHTHL基因的特異性核酶、 針對(duì)PHTHL蛋白的特異性抗體抑制劑、所述表達(dá)產(chǎn)物的顯性陰性PHTHL變體和PHTHL抑制肽。
[0186] P0DXL表達(dá)或所述基因的表達(dá)產(chǎn)物活性的抑制劑包括，但不限于，針對(duì)P0DXL基因 的特異性siRNA、針對(duì)P0DXL基因的特異性反義寡核苷酸、針對(duì)P0DXL基因的的特異性核酶、 針對(duì)P0DXL蛋白的特異性抑制性抗體、所述表達(dá)產(chǎn)物的顯性陰性P0DXL變體和P0DXL抑制肽。 [0187] PTHLH-特異性s iRNA包括，但不限于，商購(gòu)可得的s iRNA，諸如Abgent ' s被步設(shè)計(jì)的 針對(duì)PTHLH的siRNA(目錄號(hào)RI14318)、針對(duì)小鼠 PTHLH的Qiagen's siRNA(GS19227)、針對(duì)人 PTHLH的Cambridge Bioscience's siRNA雙鏈體（catalog No.SR303874)等等。
[0188] P0DXL-特異性siRNA包括，但不限于，商購(gòu)可得的siRNA，諸如Santa Cruz Biotechnology ' s sc-44765siRNA、針對(duì)人P0DXL的OriGene ' s siRNA雙鏈體（SR303611)，或 針對(duì)人P0DXL的Cambridge Bioscience's siRNA雙鏈體（目錄號(hào)SR303611)，等等。
[0189] 有效地用于本發(fā)明的PTHLH抑制性抗體包括，但不限于，識(shí)別人PTHLH的Abeam ' s 3H1-5G8小鼠單克隆抗體(abll5488)、識(shí)別大鼠、小鼠和人PTHLH的Abbiotech's P12272兔 多克隆抗體（目錄號(hào)251478)、識(shí)別人PTHLH的BioVision ' s兔多克隆抗體（目錄號(hào)5652- 100)，或識(shí)別人PTHLH的Novus Biologicals'小鼠單克隆抗體（目錄號(hào)NBP1-26542)，等等。 [0190]有效地用于本發(fā)明的P0DXL抑制抗體包括，但不限于，識(shí)別人P0DXL的N末端區(qū)的 ab62594兔多克隆抗體，或由Santa Cruz Bio techno logy提供的識(shí)別人P0DXL的sc-23903小 鼠單克隆抗體。
[0191] PTHLH抑制性肽包括，但不限于：
[0192] -PTHLH截短變體諸如具有序列LLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTA(SEQ ID N0:8)的 hPTHrP(7-34)、PTHrP(3-34)、PTHrP(8-34)、PTHrP(9-34)、PTHrP( 10-34)，以及酰胺化變體 和因 Asn (Asn 10變體）、Leu (Leu 11變體)和D-Trp (D-Trp 12變體)分別對(duì)對(duì)應(yīng)于PTHLH位置10、 11和12的氨基酸的取代而產(chǎn)生的變體和，具體地，如Nutt等人，1990, Endocrinology 127: 491-493，Doppelt等人，1986，Proc.Natl .Acad. Sci.USA 83:7557-7560以及US6362163和 US5527772)中描述的肽[祖68'18，丁7￥4幾卩1'!1(7-34)順2、[了7￥ 4幾？1'!1(7-34)順2、1^1'!1沖（7- SOJLeu'D-TrpUlhPTHrPG-SAhJAsr/QLeuH^PTHrPG-SO-Nfe^PEAsn'Leu'D- Trp12 ] hPTHrP (7-34) -NH2。
[0193] -TIP(結(jié)節(jié)漏斗肽)截短衍生物如TIP肽（1-39)(結(jié)節(jié)漏斗肽1-39)和如Hoare等人， P印tides 23:989-998，2002中描述的其衍生物。
[0194] -肽NCT00051779(Chugai Pharmaceuticals)
[0195] -US2007203071AA的表1至5中描述的肽
[0196] -其結(jié)構(gòu)示于W004103273A2的式1的肽
[0197] -由 01s tad 等人（Peptides 1995,16:1031-1037)和 Roub ini 等人（Biochemistry， 1992，31:4026-4033)描述的肽
[0198] -由Nutt等人（Endocrinology，1990，127:491-3)描述的肽[AsnlOLeul 1 ]_PTHrP (7-34)-NH2和[Asn10，1eu11，D-Trp12]-PTHrP-(7-34)-NH2
[0199] -述肽的任一個(gè)的Fc綴合物，諸如W004060386肽中描述的那些綴合物.
[0200]-這些肽的功能上等同的變體。
[0201] 如本發(fā)明中所用，術(shù)語(yǔ)"功能性等同變體"是通過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸的修飾、插入 和/或缺失從本發(fā)明的肽的序列衍生的那些肽，只要所述肽的功能維持至少20%、至少 50%、至少80%的無(wú)修飾、插入和/或缺失的本發(fā)明的對(duì)應(yīng)肽的功能。適合用于本發(fā)明的變 體包括展現(xiàn)與上述肽序列的至少25 %、至少40 %、至少60 %、至少70%、至少80 %、至少 90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列同一性的那些變體。兩個(gè)氨 基酸序列之間的相同程度可通過(guò)常規(guī)方法，例如通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)中的已知序列的標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)算 法諸如BLAST(Altschul SF等人Basic Local Alignment Search Tool.J Mol Biol .19900ct5; 215(3) :403-10)來(lái)測(cè)定。
[0202] 其它PTHLH抑制劑包括，但不限于，如W02011003935中描述的特異性結(jié)合PTHLH N 末端區(qū)的多肽。
[0203] 在本發(fā)明的第一用途的具體形式中，癌癥是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲狀腺 癌，優(yōu)選地乳腺癌。
[0204]在本發(fā)明的第二用途的更具體形式中，乳腺癌是ER+類型或三陰性類型。
[0205]在本發(fā)明的用途的具體形式中，癌癥轉(zhuǎn)移，特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲 狀腺癌，優(yōu)選地乳腺癌的轉(zhuǎn)移是骨轉(zhuǎn)移。在更具體形式中，骨轉(zhuǎn)移是溶骨性轉(zhuǎn)移。
[0206] 基于具有與c-MAF表達(dá)反相關(guān)的表達(dá)的基因激活的治療方法 [0207]本發(fā)明的發(fā)明人已顯示RERG基因的表達(dá)水平與c-MAF表達(dá)水平反相關(guān)并且乳腺腫 瘤的RERG表達(dá)的增加能夠減少轉(zhuǎn)移細(xì)胞的數(shù)目。因此，這表明其表達(dá)受c-MAF下調(diào)的基因的 表達(dá)的調(diào)節(jié)可用于治療和/或預(yù)防乳腺癌轉(zhuǎn)移。在該情況下，本發(fā)明人已顯示，RERG激活劑 的使用能夠減少轉(zhuǎn)移細(xì)胞的數(shù)目。
[0208]因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及刺激基因的表達(dá)或所述基因的表達(dá)產(chǎn)物的活性的 試劑用于制備藥劑的用途，所述藥劑用于治療和/或預(yù)防癌癥轉(zhuǎn)移，特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、 肺癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別是乳腺癌的轉(zhuǎn)移，其中所述基因的特征在于其在腫瘤細(xì)胞 (特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別地是乳腺癌的細(xì)胞）中的表達(dá)響應(yīng) 所述細(xì)胞中的c-MAF的表達(dá)水平的升高而減少，或因?yàn)槠浔磉_(dá)響應(yīng)所述細(xì)胞中的c-MAF的表 達(dá)水平的降低而增加。
[0209]在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及刺激基因的表達(dá)或所述基因的表達(dá)產(chǎn)物的活性的試劑 用于制備藥劑的用途，所述藥劑用于治療和/或預(yù)防癌癥轉(zhuǎn)移，特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺 癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別地是乳腺癌的轉(zhuǎn)移，其中所述基因的特征在于其在腫瘤細(xì)胞 (特別地是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別地是乳腺癌的細(xì)胞）中的表達(dá)響 應(yīng)所述細(xì)胞中的c-MAF的表達(dá)水平的升高而減少，或在于其表達(dá)響應(yīng)所述細(xì)胞中的c-MAF的 表達(dá)水平的降低而增加。
[0210]在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及用于治療和/或預(yù)防受試者的癌癥轉(zhuǎn)移，特別是乳腺 癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別地是乳腺癌的轉(zhuǎn)移的方法，所述方法包括向所述 受試者施用刺激基因的表達(dá)或所述基因的表達(dá)產(chǎn)物的活性的試劑，其中所述基因的特征在 于其腫瘤細(xì)胞的表達(dá)，特別是乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、腎癌或甲狀腺癌，更特別地是乳腺的細(xì) 胞表達(dá)響應(yīng)所述細(xì)胞中的C-MAF的表達(dá)水平的升高而減少或在于其表達(dá)響應(yīng)所述細(xì)胞中的 c-MAF的表達(dá)水平的降低而增加。
[0211]在優(yōu)選實(shí)施方案中，刺激所述基因的表達(dá)的試劑是含有所述基因的編碼序列的多 核苷酸或其中刺激所述基因的表達(dá)產(chǎn)物的活性的試劑是由所述基因編碼的多肽。
[0212] 在另一個(gè)方面，刺激該基因的表達(dá)的多核苷酸可成為基因構(gòu)建體的部分。優(yōu)選地， 所述基因構(gòu)建體含有與適合于調(diào)節(jié)多核苷酸的表達(dá)的區(qū)域(包括啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止子、5'和 3'非翻譯區(qū)、多腺苷酸化信號(hào)和類似區(qū)域)一起的本發(fā)明的多核苷酸。
[0213] 原則上，任何啟動(dòng)子可用于在本發(fā)明的背景中克隆載體，只要所述啟動(dòng)子與其中 期望其表達(dá)多核苷酸的細(xì)胞相容。因此，適合用于本發(fā)明的實(shí)施方案的啟動(dòng)子包括但不必 限于，組成型啟動(dòng)子諸如真核生物病毒(諸如多瘤病毒、SV40、CMV、禽肉瘤病毒，、乙型肝炎 病毒）的基因的衍生物、金屬流蛋白基因啟動(dòng)子、單純皰疹病毒胸苷激酶基因啟動(dòng)子、逆轉(zhuǎn) 錄病毒的LTR區(qū)、免疫球蛋白a[sic:免疫球蛋白]基因啟動(dòng)子、肌動(dòng)蛋白基因啟動(dòng)子、EF-la 基因啟動(dòng)子，以及其中蛋白質(zhì)的表達(dá)依賴于分子或外源信號(hào)的添加的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，諸如 四環(huán)素系統(tǒng)、NFkB/UV光系統(tǒng)、Cre/Lox系統(tǒng)和熱激基因啟動(dòng)子、如W0/2006/135436中描述的 可調(diào)節(jié)RNA聚合酶II啟動(dòng)子。
[0214]在優(yōu)選實(shí)施方案中，多核苷酸有效地偶聯(lián)于乳腺組織特異性啟動(dòng)子。用于本發(fā)明 的乳腺組織的合適的特異性啟動(dòng)子的實(shí)例，舉例說(shuō)明性地包括：
[0215]-基質(zhì)金屬蛋白酶3啟動(dòng)子(Basset等人，Nature 348.:699,1990)
[0216] -粘蛋白樣糖蛋白（DF3，MUCI)的啟動(dòng)子（（Abe等人 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：282,1993)
[0217] -c-erbB-3、c-erbB-2 或 c-erbB-4 啟動(dòng)子
[0218] -小鼠乳房腫瘤病毒(麗TV)的啟動(dòng)子，
[0219]-乳清酸性蛋白的啟動(dòng)子
[0220]-人α-乳白蛋白啟動(dòng)子 [0221]-牛β_乳球蛋白啟動(dòng)子.
[0222] 在優(yōu)選實(shí)施方案中，刺激基因的表達(dá)的試劑是載體的部分。因此，本發(fā)明考慮使用 來(lái)載體，所述載體源于原核生物中的表達(dá)載體諸如口1^1841](：19、1311168〇1^口1:及其衍生物、 1^18、1^19481?3224冊(cè)9、(：〇比14〇?1、1^4、噬菌體和〃穿梭〃載體諸如口543和口4了28、酵母中 的表達(dá)載體諸如2-微米質(zhì)粒型載體、整合質(zhì)粒、YEP載體、著絲粒質(zhì)粒等、昆蟲表達(dá)載體諸如 pAC和pVL系列載體、植物表達(dá)載體諸如pIBI、pEarleyGate、pAVA、pCAMBIA、pGSA、pGWB、 pMDC、pMY、pORE系列載體等、基于病毒載體和[sic:或]非病毒載體的高等真核生物中的表 達(dá)載體諸如pcDNA3、pHCMV/Zeo、pCR3·l、pEFL/His、pIND/GS、pRc/HCMV2、pSV40/Zeo2、 pTRACER-HCMV pUB6/V5-His、pVAXI、pZeoSV2、pCI、pSVL和pKSV-10、pBPV-l、pML2c^PpTDTI。
[0223] 在優(yōu)選實(shí)施方案中，以病毒載體的形式遞送刺激基因的表達(dá)的試劑。用于本發(fā)明 的合適的病毒載體包括，但不限于，腺病毒載體、慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、痘苗病毒來(lái) 源的載體、腺相關(guān)病毒(AAV)和皰疹病毒的載體。
[0224] 本發(fā)明包括幾種用于將表達(dá)構(gòu)建體轉(zhuǎn)移進(jìn)培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的非病毒方法。這 些方法包括磷酸鈣沉淀、DEAE-葡聚糖、電穿孔、直接顯微注射、載有DNA的脂質(zhì)體和 lipofectamine-DNA復(fù)合物、細(xì)胞超聲處理、使用基因槍加速的微彈轟擊和受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn) 染。這些技術(shù)中的一些技術(shù)可被改造以在體內(nèi)或離體正確使用。
[0225] 在本發(fā)明的其它實(shí)施方案中，可將刺激基因的表達(dá)的試劑封裝在脂質(zhì)體內(nèi)。脂質(zhì) 體是特征在于磷脂雙層膜和內(nèi)部水性介質(zhì)的小囊泡結(jié)構(gòu)。
[0226] 本發(fā)明考慮局部、區(qū)域性或全身性施用促進(jìn)基因的表達(dá)或所述基因的表達(dá)產(chǎn)物的 活性的試劑。所述試劑的施用可以局限性方式進(jìn)行，在該情況下，將試劑直接施用進(jìn)腫瘤、 腫瘤血管系統(tǒng)、腫瘤相關(guān)淋巴管或與