胞的產(chǎn)量(數(shù)量)和質(zhì)量是 有益的。在不受任何理論約束的情況下，除了其它有益的生物活動(dòng)外，一種或多種微量元素 的存在還提供了抗氧化活性。該一種或多種微量元素優(yōu)選以離子或螯合物存在。離子可以 是僅包含單個(gè)元素的簡(jiǎn)單離子或可以是包含兩個(gè)或更多個(gè)元素的復(fù)雜離子。離子可以是僅 包含一個(gè)單個(gè)元素的簡(jiǎn)單離子或可以是包含兩個(gè)或更多個(gè)元素的復(fù)雜離子。優(yōu)選地，所述 元素可以是過(guò)渡金屬元素，例如，選自 Sc、Ti、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu5Zn、Ga、As、Se、Br、Al、 Si、P、Y、Zr、Nb、Mo、Tc、Ru、Rh、Rb、Ce、Ag、Pd、Ag、Cd、In、Sn、Sb、F、Te、Au、Pt5Bi、Ir、0s、Re、W、 Ta和Hf的元素。
[0113] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物可包含選自Mn、Si、Mb、V、Ni、Sn、AL、 Ag、Ba、K、Cd、Co、CR、F、Ge、I、Rb和Zr的一種或多種微量元素，優(yōu)選所有微量元素。
[0114] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，一種或多種微量元素可選自MnS〇4.H20、Na 2Si03.9H20、鉬酸 和銨鹽（（ΝΗ4)6Μ〇7〇24· 4H2〇)、NH4V〇3、NiS〇4.6H20、SnCl2 (無(wú)水）、AlCl3.6H2〇、AgN〇3、Ba (〇2出〇2)2、仙『、〇(1(：12、(：〇(：12.6!12〇、0(：13(無(wú)水）、恥卩、66〇2、1(1、肋(：1和2抑(：12.8!12〇。
[0115] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物可包含MnS〇4.H20、Na 2Si03.9H20、鉬 酸銨鹽（（ΝΗ4)6Μ〇7〇24· 4H2〇)、NH4V〇3、NiS〇4.6H20、SnCl2 (無(wú)水）、AlCl3.6H2〇、AgN〇3、Ba (〇2出〇2)2、仙『、〇(1(：12、(：〇(：12.6!12〇、0(：13(無(wú)水）、恥卩、66〇2、1(1、肋(：1和2抑(：12.8!12〇。
[0116] 適合于本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基制備的微量元素制劑在本領(lǐng)域中是眾所周知的，且可 市場(chǎng)上買到。例如，市場(chǎng)上可買到的微量元素制劑B(來(lái)自Corning，目錄號(hào)：25-02)和微量元 素制劑C(來(lái)自Corning，目錄號(hào):25-023)可用于本發(fā)明。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，對(duì)于最佳的結(jié)果，優(yōu) 選制劑C和制劑B以約30:1-1:30、優(yōu)選約5:1-20:1的比例混合，更優(yōu)選10:1 (即制劑C是制劑 B的10倍）。技術(shù)人員知道如何制備微量元素混合物以及如何選擇一個(gè)有效比例。例如，通過(guò) 制劑C和制劑B以10:1 (即制劑C是制劑B的10倍)的比例混合得到的微量元素混合物，可通過(guò) 將約0.05ml到5ml的制劑B添加到10000ml的培養(yǎng)基中，優(yōu)選將約0.01到4ml的制劑B添加到 10000ml的培養(yǎng)基中，優(yōu)選將約0.5ml到3ml的制劑B添加到10000ml的培養(yǎng)基中，優(yōu)選將 0.75ml到2ml的制劑B添加到10000ml的培養(yǎng)基中，更優(yōu)選將約Iml的制劑B添加到10000ml的 培養(yǎng)基中，也可通過(guò)將〇. 〇5ml到5ml的制劑C添加到1000 ml的培養(yǎng)基中，優(yōu)選將約0.01到4ml 的制劑C添加到1000ml的培養(yǎng)基中，優(yōu)選將約0.5ml到3ml的制劑C添加到1000ml的培養(yǎng)基 中，優(yōu)選將0.75ml至Ij2ml的制劑C添加到1000 ml的培養(yǎng)基中，更優(yōu)選將約Iml的制劑C添加到 1000 ml的培養(yǎng)基中，按一定比例，例如上面給出的，例如制劑C與制劑B的比例為10:1。來(lái)源 于混合其它微量元素制劑或來(lái)源于使用自制制劑或混合物的其它等同的微量元素混合物， 也可用于制備本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物，但本文所教導(dǎo)的微量元素和微量元素混合物是優(yōu)選 的。
[0117] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可進(jìn)一步包含聚乙烯醇(PVA)。在 不受任何理論約束的情況下，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物缺少PVA的情況 相比，在本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物中存在PVA對(duì)促進(jìn)衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒 樣(不成熟的）心肌細(xì)胞之間的三維排列的形成和保持是特別有利的。對(duì)于由衍生自體外培 養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞產(chǎn)生的成體樣(成熟的）心肌細(xì)胞，也觀 察到相同的優(yōu)點(diǎn)。
[0118] PVA在本領(lǐng)域中是眾所周知的，且可在市場(chǎng)上買到。PVA類似物或衍生物也可用于 制備根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)基，但本文所公開的PVA是優(yōu)選的。技術(shù)人員知道如何制備和溶解 PVA以獲得合適的PVA液體形式。
[0119]在實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基可進(jìn)一步包含2mg/ml到約7mg/ml的PVA。
[0120] 在本發(fā)明的實(shí)施方案中，培養(yǎng)基組合物可包含約0 . lmg/ml到10mg/ml的PVA，優(yōu)選 約 3mg/ml 到 8mg/ml 的 PVA，更優(yōu)選約 4mg/ml 到 6mg/ml 的 PVA。
[0121] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，培養(yǎng)基組合物可包含至少約1.25mg/ml的PVA，優(yōu)選約5mg/ ml 的PVA〇
[0122] 在實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基可進(jìn)一步包含選自以下的一種或多種化合物:必 需氨基酸和非必需氨基酸、維生素、有機(jī)物、無(wú)機(jī)鹽、高度純化的牛血清白蛋白、生長(zhǎng)添加劑 (如Ham F12營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)混合物）、抗氧化劑、抗生素、單硫代甘油(monothiolglycerol)、谷氨 酰胺和葡萄糖。所述培養(yǎng)基組合物也可進(jìn)一步包含生理上可接受的鹽溶液，優(yōu)選等滲鹽溶 液。
[0123] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物可進(jìn)一步包含牛血清白蛋白、葡萄 糖、維生素、抗生素、單硫代甘油、谷氨酰胺、氨基酸和Ham的F12營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)混合物。
[0124] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)的無(wú)血清培養(yǎng)基，使用具有更低葡萄糖濃度的無(wú)血清 培養(yǎng)基對(duì)本發(fā)明培養(yǎng)基的制備是有利的。例如，標(biāo)準(zhǔn)的無(wú)血清培養(yǎng)基包含約3000mg/L (17.5mM)的葡萄糖。市場(chǎng)上可買到的低葡萄糖無(wú)血清培養(yǎng)基包含約1000mg/L(5.5mM)的葡 萄糖。
[0125] 在實(shí)施方案中，這樣的低葡萄糖無(wú)血清培養(yǎng)基制劑可用于制備本發(fā)明培養(yǎng)基組合 物。市場(chǎng)上可買到的低葡萄糖無(wú)血清培養(yǎng)基或任何其它自制制劑的稀釋液可用于制備本發(fā) 明的培養(yǎng)基組合物。
[0126] 在實(shí)施方案中，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可包含約I-IOmM的葡萄糖，優(yōu)選約2-8mM的葡萄糖，優(yōu)選3-7mM的葡萄糖，優(yōu)選4.5-6.5mM的葡萄糖，更優(yōu)選約5.0-6 . OmM的葡萄 糖。
[0127] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可包含至少約ImM的葡萄 糖和不多于約5.5mM的葡萄糖。
[0128] 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可包含約10-200μΜ的葡萄 糖，優(yōu)選約25-150μΜ的葡萄糖，更優(yōu)選約45-120μΜ的葡萄糖。優(yōu)選，培養(yǎng)基組合物包含至少 約55μΜ的葡萄糖和不多于約ΙΙΙμΜ的葡萄糖。
[0129] 在實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物可以是無(wú)葡萄糖的。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 所述葡萄糖是D-葡萄糖。
[0130] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可以是液體形式、半液體形式或 固體形式或半固體形式。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物是液體形式。
[0131] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可以是固體組合物，優(yōu)選是粉末 組合物，其中所述組合物可溶解于水溶液中，從而獲得本文所教導(dǎo)的組合物。
[0132] 固體形式的非限制性實(shí)例包括粉末、顆粒、片劑、糊劑、漿、濕混合物、丸、凍干形 式、冷凍干燥形式等。
[0133] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，固體形式是粉末。
[0134] 本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物也可稱為"成熟培養(yǎng)基組合物"。
[0135] 本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物可缺少甲狀腺激素樣化合物。換句話說(shuō)，具有如上文 詳細(xì)描述的相同成分但沒有任何甲狀腺激素樣化合物添加或存在的相同培養(yǎng)基，可用于使 用本文所公開的方法或試劑盒使衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心 肌細(xì)胞成熟。
[0136] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的這種可選的培養(yǎng)基組合物（即無(wú)甲狀腺激素樣化合物)可 用于使衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞成熟，如實(shí)施例驗(yàn) 證。但是，本發(fā)明人觀察到，本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物(但缺少甲狀腺激素樣化合物)對(duì)衍 生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞的成熟的影響，沒有用本發(fā) 明的培養(yǎng)基組合物(但其包含至少一種甲狀腺激素樣化合物)得到的（本文所教導(dǎo)的）影響 明顯（效率較低，不太強(qiáng)）。該可選擇的培養(yǎng)基，即具有正如上文詳細(xì)描述的相同組分但不存 在任何甲狀腺激素樣化合物培養(yǎng)基，可單獨(dú)使用，或與本文所公開的但至少包含甲狀腺激 素樣化合物的培養(yǎng)基組合使用。例如，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，可首先將胎兒樣心肌細(xì)胞暴露 于本文所公開的培養(yǎng)基(但沒有任何甲狀腺激素樣化合物），隨后例如在接種1、2、3、4、5、6 或7天后，將該培養(yǎng)基用本文所公開的但包含至少一種甲狀腺激素樣化合物的培養(yǎng)基替換， 用于使衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞成熟。
[0137] 本發(fā)明的方法
[0138] 在第二方面，本發(fā)明涉及從PESC和/或iPSC，尤其是從由所述PESC和/SiPSC^Mt 的胎兒樣心肌細(xì)胞產(chǎn)生成體樣心肌細(xì)胞的方法，該方法包括以下步驟：
[0139] (a)提供一個(gè)或多個(gè)衍生自PESC和/或iPSC的胎兒樣心肌細(xì)胞；
[0140] (b)將所述胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物接觸從而使所述胎兒樣 心肌細(xì)胞成熟為成體樣心肌細(xì)胞。
[0141] 在步驟(a)中，胎兒樣（不成熟的）心肌細(xì)胞可以從體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC獲 得，或者可以從其他來(lái)源比如市場(chǎng)上可買到的細(xì)胞系獲得。技術(shù)人員知道如何獲得以及如 何培養(yǎng)所述胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞，使得他們適合用于本發(fā)明的方法中。
[0142] 在實(shí)施方案中，胎兒樣（不成熟的（心肌細(xì)胞可以來(lái)自哺乳動(dòng)物源(mammalian origin)，例如來(lái)自小鼠、大鼠、馬、狗、?；蚍侨遂`長(zhǎng)類動(dòng)物等。
[0143] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞可以來(lái)自人源，例如，如與 Chung(Chung et al.(2008)Cell Stem Cell，Vol 2(2) :113-117)所描述的技術(shù)相同的技 術(shù)獲得。
[0144] 在步驟(b)中，本文所使用的術(shù)語(yǔ)"接觸"指本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物和細(xì)胞(例 如，心肌細(xì)胞)或細(xì)胞培養(yǎng)(心肌細(xì)胞培養(yǎng))之間的直接相互作用。
[0145] 在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物接 觸至少約1天高達(dá)約4周。
[0146] 在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物接 觸至少約1天，優(yōu)選約2天，優(yōu)選約3天，優(yōu)選約4天，優(yōu)選約5天，優(yōu)選約6天，優(yōu)選約7天，優(yōu)選 約8天，優(yōu)選約9天，優(yōu)選約10天，優(yōu)選約11天，優(yōu)選約12天，優(yōu)選約13天，優(yōu)選約14天，更優(yōu)選 約15天。
[0147] 在實(shí)施方案中，步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物接觸至 少約3天，高達(dá)約15天。
[0148] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物 接觸至少約15天。
[0149] 在實(shí)施方案中，步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的包含至少一種甲狀腺 激素樣化合物的培養(yǎng)基組合物接觸之前，所述胎兒樣心肌細(xì)胞首先與本文所教導(dǎo)的但缺少 甲狀腺激素樣化合物的培養(yǎng)基組合物接觸一段時(shí)間，例如，1-10天，例如1、2、3、4、5、6、或7 天。例如，步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞可以在教導(dǎo)的但缺乏任何一種甲狀腺激素樣化合物的 培養(yǎng)基組合物中培養(yǎng)2天的時(shí)間，接著用本文所教導(dǎo)的但包含至少一種甲狀腺激素樣化合 物(如T3)的培養(yǎng)基組合物更換所述培養(yǎng)基組合物，以及例如從第3天到第4天，或從第3天到 第5天，或從第3天到第6天，或從第3天到第7天，或從第3天到第8天，或從第3天到第9天，或 從第3天到第10天，或從第3天到第11天，或從第3天到第12天，或從第3天到第13天，或從第3 天到第14天或從第3天到第15天開始，允許所述胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的但包含至 少一種用于治療提醒的甲狀腺激素樣化合物的培養(yǎng)基組合物接觸。換句話說(shuō)，可以使用本 文所教導(dǎo)的方法，使用缺少任何甲狀腺激素樣化合物的培養(yǎng)基組合物，開始成熟過(guò)程，同時(shí) 繼續(xù)隨后的本文所教導(dǎo)的包含至少一種甲狀腺激素樣化合物的培養(yǎng)基組合物。
[0150] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在與本文所教導(dǎo)的但包含至少一種甲狀腺激素樣化合物的本發(fā)明 的培養(yǎng)基組合物接觸之前，首先將衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣心肌細(xì)胞與 本文所教導(dǎo)的但缺少甲狀腺激素樣化合物的本發(fā)明的培養(yǎng)基組合物接觸可能是有利的，從 而在體外培養(yǎng)中提高和促進(jìn)單層心肌細(xì)胞的形成。
[0151] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將通過(guò)分化(未分化的）PESC和/或iPSC為心肌細(xì)胞獲得的 胎兒樣心肌細(xì)胞培養(yǎng)在增加量的甲狀腺激素樣化合物例如T3的條件下。換句話說(shuō)，適時(shí)增 加甲狀腺激素樣化合物的濃度(或通過(guò)添加到培養(yǎng)基，或通過(guò)用本文所公開但與之前的培 養(yǎng)基相比具有增加的T3濃度的新培養(yǎng)基替換之前的培養(yǎng)基）。例如，可首先將通過(guò)分化(未 分化的)PESC和/或iPSC獲得的胎兒樣心肌細(xì)胞在本文公開的培養(yǎng)基(缺少甲狀腺激素樣化 合物）中培養(yǎng)例如1天、2天、3天或4天(或更多天）。1天、2天、3天或4天(或更多天)后，該培養(yǎng) 基被本發(fā)明含有，例如，l〇ng/ml的T3的培養(yǎng)基所替換，并額外培養(yǎng)1天、2天、3天或4天(或更 多天）。然后該培養(yǎng)基被本發(fā)明的包含濃度增加的甲狀腺激素樣化合物例如T3的新鮮培養(yǎng) 基替換。例如，在接下來(lái)的步驟中的培養(yǎng)基組合物包含50ng/ml的T3。如果要求或需要，使用 與較高濃度的甲狀腺激素樣化合物相同濃度的額外的步驟可用于將所述細(xì)胞培養(yǎng)需要的 任意天數(shù)。
[0152] 在一個(gè)實(shí)施方案中，將步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物 接觸，其中培養(yǎng)基組合物在至少21°C至高達(dá)基本上不高于37°C的溫度下。
[0153] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，將步驟(b)的胎兒樣心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合 物接觸，其中培養(yǎng)基組合物在約30°C的溫度，優(yōu)選約31°C，優(yōu)選約32°C到約33°C，優(yōu)選約34 °C，優(yōu)選約35°C，優(yōu)選約36°C，更優(yōu)選約37°C下。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將步驟(b)的胎兒樣 心肌細(xì)胞與本文所教導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物接觸，其中培養(yǎng)基組合物在約37°C的溫度下。
[0154] 在一個(gè)實(shí)施方案中，在本文所教導(dǎo)的處理持續(xù)期間，每天補(bǔ)充本文所教導(dǎo)的培養(yǎng) 基組合物。
[0155] 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在本文所教導(dǎo)的處理持續(xù)期間，每2天或3天補(bǔ)充本文所教 導(dǎo)的培養(yǎng)基組合物。
[0156] 在實(shí)施方案中，步驟(b)的培養(yǎng)基組合物是固體形式，優(yōu)選粉末形式，其可溶解于 水溶液中，從而獲得步驟(b)的液體培養(yǎng)基。
[0157] 在一個(gè)實(shí)施方案中，由衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心 肌細(xì)胞產(chǎn)生的成體樣(成熟的）心肌細(xì)胞的成熟，可通過(guò)評(píng)價(jià)所述成體樣(成熟的）心肌細(xì)胞 的形態(tài)特征，并將結(jié)果與從成人個(gè)體(或其它來(lái)源，例如細(xì)胞系）獲得的成體心肌細(xì)胞的形 態(tài)特征以及與衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞的形態(tài)特征 相比來(lái)確定，所述胎兒樣心肌細(xì)胞暴露于本文所教導(dǎo)的但缺少至少一種甲狀腺激素樣化合 物培養(yǎng)基組合物。評(píng)價(jià)細(xì)胞形態(tài)特征(例如形狀)和/或組織學(xué)特征(例如存在某些結(jié)構(gòu)或細(xì) 胞成分，細(xì)胞骨架組織等）以便獲得關(guān)于給定細(xì)胞的形態(tài)和外觀的信息的方法，在本領(lǐng)域中 是眾所周知的。例如，在本發(fā)明中，免疫組織化學(xué)技術(shù)可用于檢測(cè)或揭示心肌細(xì)胞特定的細(xì) 胞標(biāo)記或細(xì)胞骨架標(biāo)記。這樣的標(biāo)記的代表性的非限制性實(shí)例是α-輔肌動(dòng)蛋白。標(biāo)記的其 它非限制性實(shí)例包括肌鈣蛋白C、肌鈣蛋白I、肌鈣蛋白Τ、肌球蛋白重鏈6、肌球蛋白重7、肌 球連接蛋白-C基因、肌球蛋白輕鏈、原肌球蛋白、肌聯(lián)蛋白、肌間蛋白等。
[0158] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，暴露于本文所教導(dǎo)的包含至少一種甲狀腺激素樣化合物的培養(yǎng)基 組合物的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞，成熟為成體樣心肌細(xì)胞，這可由其讓人聯(lián)想到成體 (或成體樣)階段的形態(tài)特征變化所證明，例如細(xì)胞極化、肌節(jié)組織化增加和形狀延長(zhǎng)。這樣 的形態(tài)特征變化在體外培養(yǎng)成熟過(guò)程中沒有暴露于至少一種甲狀腺激素樣化合物的胎兒 樣(不成熟的）心肌細(xì)胞中較少觀察到。
[0159] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)本文所教導(dǎo)的方法由衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或 iPSC的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞產(chǎn)生的成體樣(成熟的）心肌細(xì)胞的成熟，可通過(guò)評(píng)價(jià)所 述成體樣心肌細(xì)胞的功能特性，并將結(jié)果與從成人個(gè)體(或其它來(lái)源，例如細(xì)胞系)獲得的 成體心肌細(xì)胞的功能特性以及與衍生自體外培養(yǎng)的PESC和/或iPSC的胎兒樣(不成熟的）心 肌細(xì)胞的功能特性相比來(lái)確定，所述胎兒樣心肌細(xì)胞暴露于本文所教導(dǎo)的但缺少至少一種 甲狀腺激素樣化合物培養(yǎng)基組合物中。評(píng)價(jià)細(xì)胞(例如心肌細(xì)胞)的功能特性以便獲得關(guān)于 給定細(xì)胞的功能特性的信息的方法，在本領(lǐng)域中是眾所周知的。例如在本發(fā)明中，電生理技 術(shù)(除了其它技術(shù)外)可用于檢測(cè)或揭示細(xì)胞(例如心肌細(xì)胞)的特定功能或功能表型。這類 生理學(xué)技術(shù)的非限制性實(shí)例是所謂的"膜片鉗"技術(shù)。
[0160] 膜片鉗技術(shù)是眾所周知的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，其允許研究細(xì)胞的單個(gè)或多個(gè)離子通道。 這種技術(shù)可用于各種細(xì)胞，在可興奮細(xì)胞(例如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰島β-細(xì)胞）的 研究中特別有用。在本發(fā)明中，這類技術(shù)可用于研究所謂的"動(dòng)作電位"的特性，其作為細(xì)胞 (例如心肌細(xì)胞)從一個(gè)細(xì)胞到另一個(gè)細(xì)胞傳達(dá)電脈沖能力的指示。例如，關(guān)于最大上升速 率、動(dòng)作電位持續(xù)時(shí)間、靜止膜電位和動(dòng)作電位的振幅的信息可通過(guò)使用膜片鉗技術(shù)獲得。
[0161] 本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，暴露于本文所教導(dǎo)的包含至少一種甲狀腺激素樣化合物培養(yǎng)基組 合物的胎兒樣(不成熟的）心肌細(xì)胞，成熟為成體樣心肌細(xì)胞，這可以由其讓人聯(lián)想到成體 (或成體樣)階段的電生理特征變化證明，