7為兩種酯化物的Δ δΗ差值(δκ-δ54η ppm)。
[0063] 圖8為本發(fā)明目標(biāo)化合物的實(shí)測(cè)ECD(黑色：1)和兩種模型化合物的理論計(jì)算ECD (紅色：1A;藍(lán)色：1B)圖。
[0064] 圖9為本發(fā)明目標(biāo)化合物對(duì)大鼠主動(dòng)脈的舒張作用圖：其中，橫坐標(biāo)為濃度，縱坐 標(biāo)為張力，Leonuketal是指本發(fā)明目標(biāo)化合物。
【具體實(shí)施方式】
[0065] 本發(fā)明【具體實(shí)施方式】中使用的原料、設(shè)備均為已知產(chǎn)品，通過(guò)購(gòu)買市售產(chǎn)品獲得。
[0066] 實(shí)施例1
[0067] (1)實(shí)驗(yàn)材料：
[0068] ①藥材
[0069]益母草采自四川成都溫江區(qū)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李敏教授鑒定為 唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的全草。
[0070] ②試劑和填料
[0071] 柱層析硅膠，200~300目（試劑級(jí)），購(gòu)于青島海洋硅膠干燥劑廠；
[0072]薄層層析硅膠G、GF254和H(化學(xué)純），購(gòu)于青島海洋硅膠干燥劑廠；
[0073] MCI gel CHP 20P，75~150μπι，為反相聚苯乙烯型樹(shù)脂，購(gòu)于日本三菱化學(xué)公司；
[0074] Ultimate(250X10mm2)半制備型柱，以Rp C18(5y)填裝，Welch公司生產(chǎn)；
[0075] Sephadex LH-20葡聚糖凝膠，購(gòu)于瑞典Amersham公司；
[0076] GF254硅膠制備薄層，購(gòu)于煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司；
[0077] 色譜甲醇，4L/瓶，購(gòu)于美國(guó)Fisher公司；
[0078]石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、甲醇等分析純?cè)噭?，?gòu)于成都科龍化工試劑廠。 [0079]③實(shí)驗(yàn)儀器
[0080] Cometro 6000高效液相色譜儀（美國(guó)Cometro);
[0081 ] Waters Synapt G2HDMS高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜（美國(guó)Waters);
[0082] Bruker-AV-400核磁共振儀（瑞士Bruker);
[0083] Vector 22FT-IR紅外光譜儀（瑞士Bruker);
[0084] Shimadzu UV-260紫外-可見(jiàn)分光光度儀（日本Shimadzu);
[0085] Perkin-Elmer 341 旋光測(cè)定儀（美國(guó)PerkinElmer);
[0086] BP211D十萬(wàn)分之一電子天平（瑞士Sartorius);
[0087] R-210 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(瑞士 BUCHI);
[0088] DZG-6050型真空干燥箱(上海森信）。
[0089] (2)成分的分離純化：
[0090] ①、藥材的提取:稱取益母草藥材20Kg，粉碎，加95%乙醇（3 X 160L)提取72小時(shí)， 提取3次，提取液合并后，減壓回收溶劑后，得到乙醇浸膏1.2Kg;
[0091] ②、將乙醇浸膏（1.2Kg)用水(8.0L)分散，依次用乙酸乙酯（8.0L)、正丁醇（8.0L) 萃取，萃取6次，合并乙酸乙酯部分，減壓回收溶劑，得乙酸乙酯浸膏(400g);
[0092] ③、采用硅膠柱(硅膠Η)色譜對(duì)乙酸乙酯浸膏（400g)進(jìn)行分離，按照表1進(jìn)行梯度 洗脫;取石油醚-丙酮= 5:1洗脫部分(G)上反相聚苯乙烯型樹(shù)脂柱，按照表2進(jìn)行梯度洗脫； 收集75%甲醇洗脫部分(G3)，再通過(guò)硅膠薄層色譜(硅膠H)，根據(jù)薄層追蹤，按照表3進(jìn)行梯 度洗脫，收集含有目標(biāo)化合物石油醚:丙酮= 8:1的洗脫液(G3-3)，回收溶劑，剩余物再先后 經(jīng)制備薄層色譜(GF 254硅膠制備薄層，展開(kāi)劑為石油醚-丙酮= 5:1)，再通過(guò)反相液相制備 色譜(U11imate色譜柱，85 %甲醇-水洗脫，保留時(shí)間tR = 32.5min)分離，純化，即得目標(biāo)化 合物。
[0093]表1、硅膠柱色譜的洗脫條件 [0094]
[0095]表2、反相聚苯乙烯型樹(shù)脂柱色譜的洗脫條件
[0096]
[0097] 表3、硅膠柱色譜的洗脫條件
[0098]
[0099] (4)目標(biāo)化合物的鑒定：
[0100] 無(wú)色油狀物；無(wú)暗斑，碘顯黃色，噴1 〇 %硫酸乙醇溶液在1 〇 5°c下顯黃色；由 HRESIMS m/z 433.2194[M+Na]+可確定分子式為 C22H34〇7(見(jiàn)圖 l)，[a]2QD-98.4(c 0.05， MeOH)〇
[0101] 紅外光譜中（見(jiàn)圖2)可以看出具有明顯的0H信號(hào)（ 3362CHT1)和羰基信號(hào) (1787andl726cm-4。
[0102] 化合物匪R(見(jiàn)圖3)顯示3個(gè)甲基單峰信號(hào)（δ :0.75，0.81，1.24)，2個(gè)與次甲基 相連的甲基信號(hào)（5h 0.98and 1.20)，一個(gè)連氧亞甲基信號(hào)（5h 3.69and 3.81)，4個(gè)低場(chǎng)連 氧次甲基信號(hào)(δΗ 3.46,3.96,4.48,5.31)。
[0103] 化合物13C-NMR(見(jiàn)圖4)和DEPT譜顯示22個(gè)碳信號(hào)，DEPT譜顯示這些碳信號(hào)分別歸 屬于5個(gè)甲基、6個(gè)亞甲基（包括1個(gè)連氧碳）、6個(gè)次甲基和5個(gè)季碳，其中有2個(gè)羰基（δ〇 213.8,177.3)和1個(gè)雙連氧碳(S c 100.7)，結(jié)合以上信息和不飽和度可以確定該化合物為 四環(huán)二萜。通過(guò)2D匪R實(shí)驗(yàn)進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定，在HMBC譜中，H3-18和H 3-19與C-l，C-2，C-3相關(guān)； H3-20與C-3，C-4，C-5相關(guān);H-3與C-l，C-2，C-4，C-5相關(guān)，結(jié)合4-? COSY譜中H-1 與H2-6、H2-5相關(guān)，可以推斷出A環(huán)是六元環(huán)，且C-2連有兩個(gè)甲基和C-4連有1個(gè)甲基。根據(jù)HMBC信號(hào)H 3-17與C-15、C-16相關(guān)，H2-16與羰基(Μ4(δ。213.8)相關(guān)，結(jié)合!1-15/!1 2-16/出-17之間的1!1-1!1 COSY相關(guān)信號(hào)，推斷分子中存在2-羥基丁?；ф湣＿M(jìn)一步H-3與C-14和C-15的HMBC相關(guān)信 號(hào)表明該2-羥基丁?；ф溸B接于A環(huán)的C-3位。根據(jù)HMBC信號(hào)Η-1、H-3、H 2-5、H2-8、H2-9、H-11、出-2〇同時(shí)與螺原子(：-70。1〇〇.7)相關(guān) ;!12-5、!12-6、、!12-8同時(shí)與(：-4相關(guān) ;!12-8、!1-1〇、!1-11同時(shí)與C-9相關(guān)，以及COSY信號(hào)H-l/H2-6/H 2-5相關(guān)和H2-8/H2-9/H-10/H-l 1相關(guān)，確定螺 原子C-7上的兩個(gè)氧原子分別為兩個(gè)季碳C-4和C-7相連。因此，確定了分子中含有由環(huán)A、B、 (：共同組成的橋狀螺縮酮片段。此外，!1-120 115.31)和(：-120。1〇5.9)處于明顯的化學(xué)位移 低場(chǎng)，結(jié)合NMR譜中乙氧基的信號(hào)，說(shuō)明化合物中含有一個(gè)乙基縮醛單元，進(jìn)一步通過(guò)HMBC 數(shù)據(jù)分析得到了確證。H2-9和Η-ll與酯羰基C-13(Sc 177.3)相關(guān);!1-12與(：-10、(：-11、(：-13、 C-21相關(guān);H2-21與C-12相關(guān)，確證分子中含有乙縮醛γ-內(nèi)酯(D環(huán)），并與C環(huán)結(jié)合于C-10和 C-l 1位。因此，本發(fā)明化合物的平面結(jié)構(gòu)得到了確定，見(jiàn)圖5。
[0104] 結(jié)合1Η-1!!偶合常數(shù)和N0ESY數(shù)據(jù)進(jìn)行相對(duì)構(gòu)型分析(見(jiàn)圖6)，Η 3-18與H-5a和Η2-6 相關(guān)，表明CH2-5-CH2-6和Η3-18在環(huán)的同側(cè)，Η3-19與Η-3相關(guān)，H-8a與Η-3相關(guān)，在另外一側(cè)； H-10與Η-ll相關(guān)，且Jiq,ii = 4.2Hz，表明C環(huán)和D環(huán)順式稠合。此外，根據(jù)Jn,i2( ? 0Hz)可以推 斷出Η-ll與H-12之間的夾角約90°，二者處于反式結(jié)構(gòu)，這也可以通過(guò)H-12與Η-ll呈N0ESY 相關(guān)，而不與H-10相關(guān)得到證實(shí)。Η-ll和H-10相對(duì)于螺環(huán)子C-7的相對(duì)構(gòu)型通過(guò)仔細(xì)分析C 環(huán)上的質(zhì)子偶合常數(shù)確定，3J偶合常數(shù)(JH-8a, 9a = 4.8HZ，JH-8a, 9b = 2.4HZ，JH-8b, 9a= 13.2HZ， Jh-8b, 9b = 4 · 8Hz，Jh-9a, 1。= 6 · 0Hz，Jh-9b, 1。= 2 · 4Hz，and Jh-?ο, li = 4 · 2Hz)表明H_8a、H_9b和H-10處于平伏鍵，而H-8b、H-9a和H-ll處于豎直鍵。這推斷得到了 NOESY數(shù)據(jù)的證實(shí)(H-9a與H-8a相關(guān)，H-10同時(shí)與H-9a和H-9b相關(guān)，H -11與H-9a相關(guān)）。最后，通過(guò)H3_19與H-8a、H -9a有 NOSEY相關(guān)，揭示H3-19與!1-83、!1-93、!1-10、!1-11之間空間上接近。
[0105]由于015在鏈上，1'1(^5￥不能確定其相對(duì)