0°C醇化發(fā)酵處理25天。
[0048] 同時W噴灑等量的水作為對照例。
[0049] 實驗效果分析
[0050] 對實施例2及對照例處理的煙葉進行分析，比較不同發(fā)酵時間下主要中性香氣物 質(zhì)成分含量、香氣物質(zhì)前體物含量、感官質(zhì)量。
[0051 ]其中，致香物質(zhì)色譜分析條件和定性定量分析方法：
[00對色譜條件：色譜柱DB-5MS，30m X 0.25mm X 0.25皿，柱流量1.0血/min，程序升溫，40 °C保持5min，5°C/min升到280°C，保持lOmin，進樣量化L，分流比30:1。
[OOM]質(zhì)譜條件:溶劑延遲3min，傳輸線溫度280°C，電離方式:EI，電離能量70eV，四極桿 溫度150°C，離子源溫度230°C，質(zhì)譜掃描范圍：35-550amu。
[0054] 感官質(zhì)量鑒定:對在不同發(fā)酵時間的煙葉進行評吸，分別從香氣質(zhì)、香氣量、吃味、 雜氣、刺激性、指標對樣品進行鑒定。
[0055] 1、中性香氣物質(zhì)檢測
[0056] 表1主要中性香氣物質(zhì)成分含量(yg/g)
[0化7]
[0059] 結(jié)論；
[0060] (1)致香物質(zhì)總量：由圖1可知，對于中部煙葉，在40°C，發(fā)酵時間10天，復(fù)合菌〉對 照(加水）；發(fā)酵時間15天，對照(加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間20天，對照(加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時 間25天，復(fù)合菌〉對照（加水）。可見，在40°C煙葉經(jīng)復(fù)合菌劑醇化發(fā)酵時間10天和25天后致 香物質(zhì)累計總量更多。
[0061] (2)新植二締：由圖2可知，對于中部煙葉，在40°C，發(fā)酵時間10天，對照（加水)〉復(fù) 合菌;發(fā)酵時間15天，對照(加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間20天，對照(加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間25 天的中部煙葉，復(fù)合菌〉對照（加水）?？梢?，在40°C，發(fā)酵時間25天，添加復(fù)合菌劑有利于新 植二締積累量的提高。
[0062] (3)巨豆Ξ締酬和二氨雜猴桃內(nèi)醋：由圖3、圖4可知，對于中部煙葉，在40°C，發(fā)酵 時間10天，對照（加水)〉復(fù)合菌；發(fā)酵時間15天，對照（加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間20天，對照 (加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間25天，復(fù)合菌〉對照(加水）?？梢姡?0°C，發(fā)酵時間25天，添加復(fù) 合菌劑有利于巨豆Ξ締酬和二氨雜猴桃內(nèi)醋含量的積累。
[0063] (4)茄酬：由圖5可知，對于中部煙葉，在40°C，發(fā)酵時間10天，對照(加水)〉復(fù)合菌； 發(fā)酵時間15天，復(fù)合菌〉對照(加水）；發(fā)酵時間20天，對照(加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間25天，復(fù) 合菌〉對照(加水）?？梢姡?0°C，發(fā)酵時間15天和25天，添加復(fù)合菌劑有利于茄酬含量的積 累。
[0064] 2、香氣物質(zhì)前體物檢測
[0065] 表2主要香氣物質(zhì)前體物分類(yg/g)
[0066]
[0067]
[006引結(jié)論；
[0069] (5)β-胡蘿h素降解產(chǎn)物、葉黃素降解產(chǎn)物、揮發(fā)性醒類、揮發(fā)性酬類、揮發(fā)性醇類、 直鏈脂肪酸醋類、半揮發(fā)性酬類和雜環(huán)類物質(zhì)：由圖6-13可知，對于中部煙葉，在40°C，發(fā)酵 時間10天、15天和20天，對照（加水)〉復(fù)合菌;發(fā)酵時間25天，復(fù)合菌〉對照（加水）。可見，在 40°C，發(fā)酵時間25天，添加復(fù)合菌劑有利于提高β-胡蘿h素降解產(chǎn)物、葉黃素降解產(chǎn)物、揮發(fā) 性醒類、揮發(fā)性酬類、揮發(fā)性醇類、直鏈脂肪酸醋類、半揮發(fā)性酬類和雜環(huán)類物質(zhì)積累量。
[0070] (6)直鏈脂肪酸：由圖14可知，對于中部煙葉，在40°C，發(fā)酵時間10天、15天和20天， 復(fù)合菌〉對照(加水）；而當(dāng)發(fā)酵時間達25天時，對照(加水)〉復(fù)合菌?？梢姡?0°C，發(fā)酵時間 10天、15天和20天，復(fù)合菌處理直鏈脂肪酸積累會更多。
[0071] 3、感官質(zhì)量檢測
[0072] 將40°C，不同醇化時間復(fù)合菌處理煙葉樣品和對照（加水)處理樣品進行感官評吸 質(zhì)量鑒定，結(jié)果見表3。
[0073] 表3感官質(zhì)量對比分析
[0074]
[0075] ~由表3可W看出，加入復(fù)合菌處理較對照（加水)處理煙葉評吸質(zhì)量總體較好，醇化 時間15天，煙葉雜氣和刺激性改善明顯；20天時，煙葉香氣質(zhì)、香氣量、吃味、雜氣和刺激性 均有改善;醇化時間25天，煙葉感官評吸質(zhì)量達到最好。
[0076] 綜上所述，在40°C，發(fā)酵時間25天，加入復(fù)合菌劑處理，煙葉中幾種主要中性致香 物質(zhì)含量和總量較對照(加水)處理較多。對主要香氣物質(zhì)前體物分類進行分析，發(fā)酵時間 10天、15天和20天，除直鏈脂肪酸W外，β-胡蘿h素降解產(chǎn)物、葉黃素降解產(chǎn)物、揮發(fā)性醒類、 揮發(fā)性酬類、揮發(fā)性醇類、直鏈脂肪酸醋類、半揮發(fā)性酬類和雜環(huán)類運幾類物質(zhì)含量變化趨 勢基本一致，即發(fā)酵時間25天左右，各類物質(zhì)含量均為復(fù)合菌處理最多。
[0077] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可W對之作一些修改或改進，運對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的運些修改或改進，均屬于本發(fā)明要求保護的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種復(fù)合菌劑，其特征在于，由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉酶芽孢桿菌混 合而成；其中，枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)不小于l〇 9cfu/ml，地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)不小于 109cfu/ml，解淀粉酶芽孢桿菌的活菌數(shù)不小于10 9cfu/ml; 其中，所述枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分離自茅臺酒曲； 所述枯草芽孢桿菌經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌MTLB01(Bacillus subtilis MTLB01)，保藏 編號為CCTCC NO:M 2015575; 所述地衣芽孢桿菌經(jīng)鑒定為地衣芽孢桿菌MTLB02(Bacillus licheniformis MTLB02)，保藏編號為CCTCC N0:M 2015576。2. 權(quán)利要求1所述復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，所述復(fù)合菌劑中，枯草芽孢桿菌 的活菌數(shù)109cfu/ml，地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)10 9cfu/ml，解淀粉酶芽孢桿菌的活菌數(shù) 109cfu/ml〇3. 權(quán)利要求1或2所述復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，將枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿 菌、解淀粉酶芽孢桿菌分別接種于PDA培養(yǎng)基中，于36-37°C培養(yǎng)22-24h，收集菌液，按比例 混合即可。4. 權(quán)利要求1或2所述復(fù)合菌劑在煙葉醇化發(fā)酵過程中的應(yīng)用。5. -種煙葉醇化處理方法，其特征在于，將權(quán)利要求1或2所述復(fù)合菌劑噴灑于煙葉表 面進行醇化發(fā)酵處理;其中，噴灑量為lmL菌液/kg煙葉。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的煙葉醇化處理方法，其特征在于，所述醇化發(fā)酵條件為:溫度 38-40°C，時間23-25天。
【專利摘要】一種復(fù)合菌劑及其在煙葉醇化中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及一種復(fù)合菌劑，其是由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、解淀粉酶芽孢桿菌分別培養(yǎng)后按比例混合而成。所述枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌分離自茅臺酒曲。本發(fā)明將茅臺酒致香微生物的功能開發(fā)與提高煙草質(zhì)量聯(lián)系起來，首次將茅臺酒曲微生物發(fā)酵產(chǎn)物應(yīng)用于煙葉發(fā)酵中，通過這些致香微生物的活動或其代謝產(chǎn)物的添加，可增加煙葉發(fā)酵中優(yōu)質(zhì)微生物的種類，增加香味物質(zhì)的種類，起到類似添加茅臺酒增香的效果，從而提高煙葉醇化質(zhì)量。CCTCC NO: M201557520150925
【IPC分類】C12R1/125, A24B15/28, C12R1/10, C12N1/20, C12R1/07
【公開號】CN105543122
【申請?zhí)枴緾N201510866196
【發(fā)明人】王芳, 連賓, 張慶明, 王玉平, 丁根勝, 姬厚偉
【申請人】貴州中煙工業(yè)有限責(zé)任公司, 南京師范大學(xué)
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2015年12月1日