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      反應容器、核酸分析裝置及核酸分析方法_3

      文檔序號:9829460閱讀:來源:國知局
      分別地設置,在將核酸分配到槽中之后使各試劑槽與定量槽或分析槽相連通,配置試劑。
      [0081]作為在將樣品所含有的核酸分配到定量槽或分析槽中之前配置試劑的方法,例如可舉出使試劑干燥固定在定量槽或分析槽內壁的方法。
      [0082]因此,本實施方式中,優(yōu)選將所述定量試劑及所述核酸分析試劑中的至少I個以干燥狀態(tài)進行配置,更優(yōu)選將所述定量試劑及所述核酸分析試劑中的至少I個以干燥狀態(tài)且與海藻糖的混合狀態(tài)進行配置。通過將試劑以干燥狀態(tài)進行配置,可以減少試劑的劣化。此夕卜,通過將試劑以與海藻糖的混合狀態(tài)進行配置,可以進一步減少試劑的劣化。
      [0083]作為試劑的固定方法,例如通過用吸液管等將液體試劑滴加到第I基材7的槽部分中,利用離心裝置以2000?3000rpm將基材離心5分鐘左右,按照適量的液體試劑以使液面為平坦狀態(tài)殘留的方式將殘留的液體試劑干燥,從而可以將試劑固定在槽中。
      [0084]另外,也可在將核酸分配到定量槽或分析槽之前不配置試劑所含的全部物質。還可以在將核酸分配到定量槽或分析槽之前和之后,將試劑分開配置。作為這樣的例子,例如可舉出將樣品注入到事先固定有核酸分析試劑中在核酸的擴增中使用的物質的分析槽中,使核酸擴增之后,將能夠檢測所擴增的核酸的量的物質注入到分析槽中。
      [0085]本實施方式的反應容器具備能夠將所述樣品含有的核酸分配到定量槽和分析槽中的流路。流路的分支位置、方向等并無特別限定,例如可舉出圖3A?圖3C所示的構成。從在含有核酸的樣品分析之前能夠對自生物體樣品通過核酸提取獲得的核酸量進行定量的觀點出發(fā),優(yōu)選將定量槽2配置在較分析槽I更靠近注入口 6的位置,由此能夠容易地將核酸較分析槽更早地分配到定量槽中。
      [0086]另外,例如若為圖3B或圖3C所示的構成,則通過在較連接于定量槽的流路和連接于分析槽的流路的分支點更靠近分析槽的流路的位置上設置能夠開關流路的樣品溶液的攔阻部,可以通過在定量槽中算出的核酸的量來判斷可否向分析槽送液以控制送液。
      [0087]本實施方式的反應容器的基材7優(yōu)選是具有透光性的樹脂。作為基材7的材料,可以優(yōu)選使用具有透光性的樹脂。另外,當對分析槽I或定量槽2內的溶液進行光學分析(熒光測定或比色測定等)時,優(yōu)選基材7的透明性高。例如,基材7的材料只要是不對試樣造成影響的材料則無特別限定,特別是當使用含有聚丙烯、聚碳酸酯、丙烯酸中的任一者的樹脂材料時,可以確保良好的可見光透過性。作為聚丙烯,可以使用均聚丙烯或聚丙烯與聚乙烯的無規(guī)共聚物。另外,作為丙烯酸,可以使用聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯與其他甲基丙烯酸酯、丙烯酸酯、苯乙烯等單體的共聚物。另外,使用這些樹脂材料時,還可以確保反應容器的耐熱性或強度。樹脂材料以外,還可舉出鋁、銅、銀、鎳、黃銅、金等金屬材料。使用金屬材料時,導熱率及密封性能更加優(yōu)異。
      [0088]另外,通過使基材7的分析槽I或定量槽2的底部為透明的,還可以從外部進行熒光等的檢測、分析。其中,本實施方式中的“透明”及“透光性”是指形成基材7時的光域(波長230?780nm)的總平均透過率優(yōu)選為70%以上。
      [0089]作為基材7的加工方法,為樹脂材料時,可以使用注射成型、真空成型等各種樹脂成型法或者機械切削等。為金屬材料時,還可以通過實施使用了厚基材的研削加工或刻蝕、沖壓加工或拉深加工成薄的金屬片來形成。
      [0090]另外,基材7的厚度在50μπι?3mm的范圍內時,可以確保良好的透光性、耐熱性、強度,能夠確實地進行凹部的加工,因此優(yōu)選。
      [0091][第二實施方式]
      [0092]本發(fā)明第二實施方式的反應容器具備配置有核酸分析中使用的核酸分析試劑且能夠對含有核酸的樣品進行分析的分析槽,和能夠對該樣品所含有的核酸的量進行定量的定量槽,并且按照該樣品含有的核酸被分配到該定量槽和該分析槽中的方式構成。詳細而言,由于在上述第一實施方式中已經敘述過,因此進行省略,但本實施方式的反應容器的定量槽中也可未配置有定量試劑,優(yōu)選在不使用試劑的情況下對核酸量進行定量時使用。例如可舉出通過紫外線照射來求出樣品中的核酸量的情況。
      [0093]如上述實施方式中說明過的那樣,在同一基材上設置分析槽I和定量槽2這兩者,在相同環(huán)境下測定樣品中含有的核酸量。因此,能夠在定量槽中以高的可靠度獲得在分析槽中進行核酸分析之前的樣品中所含的核酸量。
      [0094]《核酸分析裝置》
      [0095][第三實施方式]
      [0096]本發(fā)明第三實施方式的核酸分析裝置具備之前記載的反應容器、對核酸進行提取的提取部、和對提取部中獲得的核酸進行純化的純化部。另外,本實施方式的核酸分析裝置優(yōu)選具備對分析槽I或定量槽2內的溶液進行光學分析的測定部。提取部及純化部可以是作為本發(fā)明反應容器的一部分設置在基材上,也可以是與反應容器不同的構成。將本實施方式的核酸分析裝置的構成的示意圖示于圖4中。核酸分析裝置20具備反應容器10、提取部21、純化部22和測定部23。將在提取部21、純化部22和反應容器10中獲得的含有核酸的各樣品溶液送液至核酸分析裝置20內的其他部分或反應容器中進行核酸分析。
      [0097]提取部21中具備用于進行自試樣提取核酸的試劑。這樣的試劑類是公知的,可以根據核酸來源的試樣的種類來適當選擇適合的試劑種類。另外,純化部22中優(yōu)選具備具有吸附核酸的性質的載體。作為這樣的載體,可以舉出二氧化硅、玻璃絲等纖維材料。
      [0098]如此,具備反應容器10的核酸分析裝置20可以在不從核酸分析裝置20中將樣品取出的情況下,容易且以高可靠度對提取部或純化部中獲得的樣品所含有的核酸量進行分析。
      [0099]《核酸分析方法》
      [0100][第四實施方式]
      [0101]本發(fā)明第四實施方式的核酸分析方法使用之前記載的反應容器或之前記載的核酸分析裝置,所述核酸分析方法包含核酸定量工序B,所述核酸定量工序B具有以下工序:b I)將含有與可在所述分析槽中分析的核酸相同的核酸的樣品注入到所述定量槽中的工序,b2)在該定量槽中形成使該樣品含有的核酸與所述定量試劑締合而成的締合狀態(tài)的工序,b3)對以該締合狀態(tài)產生的信號進行測定的測定工序,和b4)由通過該測定工序測定的信號算出可在所述分析槽中分析的樣品中含有的核酸的量的工序;所述核酸分析方法還包含在所述核酸定量工序B之前進行的、進行自生物體試樣提取核酸的核酸提取工序A,和在該核酸提取工序A之后進行的、將含有核酸的樣品注入到分析槽中并在分析槽中進行該核酸識別的核酸分析工序C,其中,該核酸是在所述核酸提取工序A中獲得的核酸?!芭c可在所述分析槽中分析的核酸相同的核酸”是指按照能夠算出可在分析槽中分析的核酸的量的方式,具有與可在分析槽中分析的核酸相同組成的核酸。
      [0102]以下參照圖5說明本實施方式的核酸分析方法。首先,自生物體試樣提取核酸,獲得核酸8(工序A)。其中,工序B與工序C可以同時進行,也可以是其中一個先進行。例如,可以是如圖6左所示、在工序B之后進行工序C的情況,或者也可以是如圖6右所示、同時進行工序B和工序C。將含有工序A中獲得的核酸8的樣品注入到分析槽I中,利用核酸分析試劑3進行核酸的識別(工序C)。同樣,將工序A中獲得的含有核酸8的樣品注入到定量槽2中(工序bl)。注入到定量槽2中的樣品所含有的核酸8與定量試劑4締合、形成締合狀態(tài)(工序b2)。接著,測定自與核酸8形成締合狀態(tài)的定量試劑4發(fā)出的信號33(工序b3)。
      [0103]以所測定的信號強度為基礎,計算進行工序C的核酸的擴增之前的樣品所含有的核酸8的量(工序b4)。
      [0104]核酸分析方法通過包含工序B,可以算出在分析槽中實施的核酸分析中使用的擴增前的核酸量。因此,可以提高分析槽中實施的核酸分析結果的可靠度和準確性。特別是在基因突變的分析中由于核酸的量重要,因此能夠在工序C之前確認核酸的量足夠是非常有意義的。
      [0105][第五實施方式]
      [0106]本發(fā)明第五實施方式的核酸分析方法包含在所述核酸提取工序A及所述核酸定量工序B之后進行的、利用通過該核酸定量工序B算出
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