-琉基乙醇的含量，使其濃度都達到了 〇.5-2%，0-琉基乙醇提供還原條件，二者協(xié)同作 用，使得多酪類物質(zhì)不易被氧化，而與PVPP充分結(jié)合形成馨合物。再通過后續(xù)的步驟抽提除 去，有效抑制了酪類物質(zhì)對DNA提取的影響。
[0029] 試驗中使用PVPP而不用PVP，運是因為PVP是聚乙締化咯燒酬，水溶性好，可溶于各 種有機溶劑，而PVPP是交聯(lián)聚乙締化咯燒酬，是聚乙締化咯燒酬的交聯(lián)聚合物，幾乎不溶于 任何溶劑。不溶性PVPP替代可溶性的PVP，可溶性PVP與酪的抽提不兼容而干擾DNA沉淀;不 溶性PVPP既能結(jié)合多酪，又能結(jié)合多糖，從而阻止核酸與多糖多酪結(jié)合而導(dǎo)致DNA產(chǎn)量減 少，可溶性PVP粉只結(jié)合多酪而不結(jié)合多糖，從而不能去除多糖污染物;PVP粉的使用量受到 限制，緩沖液PVP粉不能超過的1%，否則DNA的產(chǎn)量會顯著地減少，而PVPP不受限制。
[0030] 2、加入前處理緩沖溶液，溶解多糖類物質(zhì) 在第一步研磨的樣品粉末中迅速加入前處理緩沖液500-10001x1，滿旋儀上高速混勻， 離屯、機上低速90化pm離屯、5min，棄上清，取沉淀物。
[0031] 3、抽提DNA，清除多糖類產(chǎn)物 在沉淀物中加入65°C預(yù)熱、500-10(K)山的提取裂解液中，滿旋儀上充分混勻，恒溫水浴 鍋65 °C溫浴1小時，充分震蕩混勻后高速離屯、機1200化pm離屯、IOmin。
[0032] CTAB提取液中包含有較高濃度的CTAB(2%)，化Cl (1.4M)，e-琉基乙醇(0.2-0.5〇/〇) W及25mM EDTA和IOOmM Tris-HCl (pH值8.0) dCTAB是一種陽離子去污劑，能溶解細胞膜，對 植物細胞具有較好的裂解作用，而且同e-琉基乙醇共同對蛋白質(zhì)的強烈變性作用，使核酸 從蛋白-核酸復(fù)合物中徹底被釋放出來。在高離子濃度的化Cl溶液中（化C1〉0.7M)，釋放出 來的核酸與較高濃度的CTAB(2%(w/v))形成可溶性的復(fù)合物，而變性蛋白質(zhì)與CTAB形成不 溶性的復(fù)合物，隨著氯仿的抽提蛋白質(zhì)被去除。同時，e-琉基乙醇不但可W作為強還原劑防 止多酪氧化，提供pH值為8.0緩沖環(huán)境，還能有效降低多酪物質(zhì)在酸性條件下被氧化的幾 率。
[0033] 4、取上清加入新的2ml微量離屯、管，加等體積(800山乂 I純化液混勻，抽提一次，室 溫下，高速離屯、機上12000巧m離屯、5min。
[0034] 5、取上清加入新的2ml微量離屯、管，加入1/2體積預(yù)冷的異丙醇放入冰箱冷凍室，-20°C 沉淀DNA 30-60min。
[00對 6、取出2ml微量離屯、管，在4°C 12000rpm轉(zhuǎn)速離屯、5-lOmin，棄去液體部分，取沉淀 用75%乙醇清洗兩遍。
[0036] 荒漠植物葉片中富含多糖，其成分W及理化性質(zhì)和核酸很接近，不容易分離，盡管 大量的多糖在DNA的抽提過程中被高鹽的前處理緩沖液已經(jīng)去除，但還是有極少量的多糖 在低溫沉淀過程中滲入到DNA水相中與DNA-起沉淀，而使抽提到的DNA中還含有極少量多 糖的污染，所W后期再用低溫預(yù)冷的異丙醇沉淀，運樣可有效徹底去除殘留多糖的干擾。并 用75%的乙醇洗涂兩次，運樣可有效去除離子的干擾。運樣，經(jīng)過對多酪、多糖、蛋白質(zhì)及離 子物質(zhì)的有效去除，獲得純凈的DNA樣品。
[0037] 7、放入通風(fēng)廚吹干至乙醇充分揮發(fā)，加入40-100iil滅菌水溶解，貼標簽放入冰箱 冷凍室凍存盒保存。
[003引實施例1 一、荒漠植物葉片DNA提取方法具體如下： 1、 材料研磨 取0.1-0.5g荒漠植物葉片（12種，為沙米、紅砂、珍珠豬毛菜、巧條、沙冬青、油葛、沙拐 要、沙木寥、文冠果、花棒、蒙古親、霸王)置于研鉢中，在研鉢里直接撒交聯(lián)聚乙締化咯燒酬 (PVPP)粉，加入量為荒漠植物葉片質(zhì)量的1%，加入液氮與葉片一起快速研磨S次； 2、 加入前處理緩沖溶液，溶解多糖類物質(zhì) 將第一步研磨的粉末樣品迅速加入前處理緩沖液500-1000山，充分混勻后90化pm 離屯、5min，棄上清，取沉淀物。
[0039] 3、抽提DNA，清除蛋白質(zhì)與多糖類產(chǎn)物 將上一步的沉淀物加入65°C預(yù)熱、SOO-IO(K)山的提取裂解液中，總?cè)芤簼M旋2min，65°C 溫浴1小時，之后室溫12000rpm離屯、lOmin;加等體積的苯酪/氯仿/異戊醇混合液(苯酪:氯 仿:異戊醇的體積比為25:24:1)的純化溶劑，抽提1次，室溫下，12000巧m，離屯、5min。
[0040] 4、沉淀DNA，獲取純凈高產(chǎn)DNA 向上清中加1 /2體積預(yù)冷的異丙醇，混勻，冰浴-20°C冰箱放置30min。在4 °C 1200化pm 離屯、IOmin，倒掉上清液，用濃度為75 %乙醇溶劑漂洗二次，4°C 12000巧m離屯、5-lOmin，收集 沉淀，驚干，得純凈的DNA產(chǎn)品，溶于20-5化1無菌水中。
[0041 ] 二、總DNA質(zhì)量和產(chǎn)量檢測階段： 1、 完整性檢測 每個樣品中取化1總DNA溶液通過凝膠電泳檢測其完整性，其它DNA樣品保存在-20°C冰 箱中。將1山5倍上樣緩沖液和化1總DNA溶液室溫混合，然后上樣到1%瓊脂糖凝膠舊加化1 漠化乙錠邸)樣孔中，在北京六一小型電泳槽中IOOV電泳中跑膠30min后，用全自動數(shù)碼凝 膠成像系統(tǒng)上海培清380C儀器拍照記錄。結(jié)果參見圖1，從左到右依次為巧條、沙米、紅砂、 珍珠豬毛菜、霸王、油葛、沙木寥、沙冬青、蒙古親、沙拐要、文冠果、花棒所提取的DNA電泳結(jié) 果。由圖1可W看出，12種荒漠植物提取的DNA完整性好。 2、 總DNA純度和產(chǎn)量檢測 取化1提取獲得的DNA溶液，用Nano化OP2000C型微量紫外分光光度計測定〇〇26日、〇〇280和 OD230處的吸光值（W無菌水為空白液調(diào)零），計算DNA產(chǎn)量及純度?？侱NA產(chǎn)量計算根據(jù)公式： DNA產(chǎn)量為50 X0〇26日X樣品的體積(iil)/材料重(mg)。0魁、蛋白質(zhì)和多糖、多酪分別在OD260、 0D28日和OD23日有最大的吸光值，常用A260/230、A260/280的比值來表示DNA的純度，A260/230、 A260/280大于1.8表示DNA有較高的純度，A260/230小于1.8說明DNA有多糖、多酪污染， A260/280小于1.8說明DNA有蛋白質(zhì)污染。結(jié)果參見表1。
[0042] 表1 12種荒漠植物葉片DNA質(zhì)量Nano化OP測定結(jié)果
實施例2 一、荒漠植物根DNA提取方法具體如下： 1、材料研磨 取0.2g荒漠植物的根部（12種，為沙米、紅砂、珍珠豬毛菜、巧條、沙冬青、油葛、沙拐要、 沙木寥、文冠果、花棒、蒙古親、霸王）置于研鉢中，在研鉢里直接撒交聯(lián)聚乙締化咯燒酬 (PVPP)粉，加入量為荒漠植物葉片質(zhì)量的0.5%，加入液氮與葉片一起快速研磨S次； 2、加入前處理緩沖溶液，溶解多糖類物質(zhì) 將第一步研磨的粉末樣品迅速加入前處理緩沖液50化1，前處理液中0琉基乙醇的含量 為0.5%，充分混勻后90化pm離屯、5min，棄上清，取沉淀物。
[0043] 3、抽提DNA，清除蛋白質(zhì)與多糖類產(chǎn)物 將上一步的沉淀物加入65°C預(yù)熱、SOOiil的提取裂解液中，提取裂解液中0琉基乙醇的 含量為0.2%，總?cè)芤簼M旋2min，65 °C溫浴1小時，之后室溫1200化pm離屯、1 Omin;加等體積的 苯酪/氯仿/異戊醇混合液(苯酪:氯仿:異戊醇的體積比為25:24:1)的純化溶劑，抽提1次， 室溫下，12000巧m，離屯、5min。
[0044] 4、沉淀DNA，獲取純凈高產(chǎn)DNA 向上清中加1 /2體積預(yù)冷的異丙醇，混勻，冰浴-20°C冰箱放置30min。在4 °C 1200化pm 離屯、lOmin，倒掉上清液，用濃度為75%乙醇溶劑漂洗二次，放入通風(fēng)廚吹干至乙醇充分揮 發(fā)，得純凈的DNA產(chǎn)品，溶于40iU無菌水中。
[0045] 實施例3 一、荒漠