植物莖部DNA提取方法具體如下： 1、 材料研磨 取1.Og荒漠植物的莖(12種，為沙米、紅砂、珍珠豬毛菜、巧條、沙冬青、油葛、沙拐要、沙 木寥、文冠果、花棒、蒙古親、霸王）置于研鉢中，在研鉢里直接撒交聯(lián)聚乙締化咯燒酬 (PVPP)粉，加入量為荒漠植物葉片質(zhì)量的2%，加入液氮與葉片一起快速研磨S次； 2、 加入前處理緩沖溶液，溶解多糖類物質(zhì) 將第一步研磨的粉末樣品迅速加入前處理緩沖液1000 yi，前處理液中e琉基乙醇的含 量為2%，充分混勻后90化pm離屯、5min，棄上清，取沉淀物。
[0046] 3、抽提DNA，清除蛋白質(zhì)與多糖類產(chǎn)物 將上一步的沉淀物加入65°C預(yù)熱、IO(K)山的提取裂解液中，提取裂解液中0琉基乙醇的 含量為0.5%，總?cè)芤簼M旋2min，65°C溫浴1小時，之后室溫1200化pm離屯、IOmin;加等體積的 苯酪/氯仿/異戊醇混合液(苯酪:氯仿:異戊醇的體積比為25:24:1)的純化溶劑，抽提1次， 室溫下，12000巧m，離屯、5min。
[0047] 4、沉淀DNA，獲取純凈高產(chǎn)DNA 向上清中加1 /2體積預(yù)冷的異丙醇，混勻，冰浴-20°C冰箱放置30min。在4 °C 1200化pm 離屯、lOmin，倒掉上清液，用濃度為75%乙醇溶劑漂洗二次，放入通風(fēng)廚吹干至乙醇充分揮 發(fā)，得純凈的DNA產(chǎn)品，溶于10化1無菌水中。
[004引實施例4 一、荒漠植物花DNA提取方法具體如下： 1、 材料研磨 取0.Sg荒漠植物的花(12種，為沙米、紅砂、珍珠豬毛菜、巧條、沙冬青、油葛、沙拐要、沙 木寥、文冠果、花棒、蒙古親、霸王）置于研鉢中，在研鉢里直接撒交聯(lián)聚乙締化咯燒酬 (PVPP)粉，加入量為荒漠植物葉片質(zhì)量的1.5%，加入液氮與葉片一起快速研磨S次； 2、 加入前處理緩沖溶液，溶解多糖類物質(zhì) 將第一步研磨的粉末樣品迅速加入前處理緩沖液80化I，前處理液中e琉基乙醇的含量 為1.5%，充分混勻后90化pm離屯、5min，棄上清，取沉淀物。
[0049] 3、抽提DNA，清除蛋白質(zhì)與多糖類產(chǎn)物 將上一步的沉淀物加入65°C預(yù)熱、SOOiil的提取裂解液中，提取裂解液中0琉基乙醇的 含量為0.4%，總?cè)芤簼M旋2min，65°C溫浴1小時，之后室溫1200化pm離屯、IOmin;加等體積的 苯酪/氯仿/異戊醇混合液(苯酪:氯仿:異戊醇的體積比為25:24:1)的純化溶劑，抽提1次， 室溫下，12000巧m，離屯、5min。
[(K)加]4、沉淀DNA，獲取純凈高產(chǎn)DNA 向上清中加1 /2體積預(yù)冷的異丙醇，混勻，冰浴-20°C冰箱放置30min。在4 °C 1200化pm 離屯、lOmin，倒掉上清液，用濃度為75%乙醇溶劑漂洗二次，放入通風(fēng)廚吹干至乙醇充分揮 發(fā)，得純凈的DNA產(chǎn)品，溶于SOiil無菌水中。
[0化1] 實施例5 一、荒漠植物果實DNA提取方法具體如下： 1、 材料研磨 取〇.6g荒漠植物的果實（12種，為沙米、紅砂、珍珠豬毛菜、巧條、沙冬青、油葛、沙拐要、 沙木寥、文冠果、花棒、蒙古親、霸王）置于研鉢中，在研鉢里直接撒交聯(lián)聚乙締化咯燒酬 (PVPP)粉，加入量為荒漠植物葉片質(zhì)量的1.4%，加入液氮與葉片一起快速研磨S次； 2、 加入前處理緩沖溶液，溶解多糖類物質(zhì) 將第一步研磨的粉末樣品迅速加入前處理緩沖液60化1，前處理液中0琉基乙醇的含量 為1.4%，充分混勻后90化pm離屯、5min，棄上清，取沉淀物。
[0052] 3、抽提DNA，清除蛋白質(zhì)與多糖類產(chǎn)物 將上一步的沉淀物加入65°C預(yù)熱、eOOiil的提取裂解液中，提取裂解液中0琉基乙醇的 含量為0.3%，總?cè)芤簼M旋2min，65°C溫浴1小時，之后室溫1200化pm離屯、IOmin;加等體積的 苯酪/氯仿/異戊醇混合液(苯酪:氯仿:異戊醇的體積比為25:24:1)的純化溶劑，抽提1次， 室溫下，12000巧m，離屯、5min。
[0化3] 4、沉淀DNA，獲取純凈高產(chǎn)DNA 向上清中加1 /2體積預(yù)冷的異丙醇，混勻，冰浴-20°C冰箱放置30min。在4 °C 1200化pm 離屯、lOmin，倒掉上清液，用濃度為75%乙醇溶劑漂洗二次，放入通風(fēng)廚吹干至乙醇充分揮 發(fā)，得純凈的DNA產(chǎn)品，溶于60iU無菌水中。
[0054]最后應(yīng)說明的是：W上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可 W對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種荒漠植物總DNA的提取方法，其特征在于:步驟如下： (1) 將荒漠植物樣品置于容器中，加入PVPP粉，然后加入液氮充分研磨三次以上，得到 樣品粉末； (2) 在步驟（1)得到的樣品粉末中迅速加入前處理緩沖液，混勻后低速離心，棄上清，取 沉淀物;所述前處理緩沖液的配方為：200mM Tris-HCl+50mM EDTA+250mM NaCl+O.5-2%0巰 基乙醇； (3) 在沉淀物中加入65°C預(yù)熱、等體積的提取裂解液，混勻后，65°C溫浴1小時，離心;所 述提取裂解液的配方為：2% CTAB(W/V)+1.4M NaCl+0.02M EDTA+0.1M Tris-HCl+0.2-0.5% β 巰基乙醇（V/V);pH=8.0; (4) 取上清，加入酚/氯仿/異戊醇(體積比為25:24:1)混合液混勻，抽提，離心； (5) 取上清，加入預(yù)冷的異丙醇，-20°C沉淀DNA 30-60min; (6) 之后在低溫下高速離心，取沉淀用乙醇清洗； (7 )收集沉淀，加入滅菌水溶解。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中所述荒漠植物樣品的加入量為 0.2g-l.0g〇3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(2)中所述樣品粉末與前處理緩沖液 的比值為 〇 · 2-1 · 0g: 500-1000μ1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟（1)中所述PVPP粉的加入量為荒漠植 物葉片質(zhì)量的0.5-2%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中所述低速離心為900rpm離心 5min〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)中所述酚/氯仿/異戊醇混合液的 加入量與上清液的體積相同。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(5)中所述異丙醇的加入量為上清液 體積的1/2。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（6)中所述高速離心是在4 °C 12000rpm轉(zhuǎn)速離心5-10min;所述取沉淀用乙醇清洗是用75%乙醇清洗兩遍。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種荒漠植物總DNA的提取方法，步驟如下：（1）將荒漠植物樣品置于容器中，加入PVPP粉，然后加入液氮充分研磨三次以上，得到樣品粉末；（2）在樣品粉末中迅速加入前處理緩沖液，混勻后低速離心，棄上清，取沉淀物；（3）在沉淀物中加入65℃預(yù)熱、等體積的提取裂解液，混勻后，65℃溫浴1小時，離心；（4）取上清，加入酚/氯仿/異戊醇混勻，抽提，離心；（5）取上清，加入預(yù)冷的異丙醇，-20℃沉淀DNA 30-60min；（6）之后在低溫下高速離心，取沉淀用乙醇清洗；（7）收集沉淀，加入滅菌水溶解。本發(fā)明的方法操作簡單，耗時短，DNA損失少，產(chǎn)量高，純度高，完整性好，適用性強。
【IPC分類】C12N15/10
【公開號】CN105713902
【申請?zhí)枴緾N201610231035
【發(fā)明人】趙昕, 張繼偉, 陳國雄, 趙鵬善
【申請人】中國科學(xué)院寒區(qū)旱區(qū)環(huán)境與工程研究所
【公開日】2016年6月29日
【申請日】2016年4月14日