入到10ml冰水中，沉淀產(chǎn)物，得到淡黃色沉淀，真空過濾，用重蒸水徹底清洗，真空干燥。
[0084](3)、得到BCPDA:取上述得到的固體0.42g，分批緩慢加入到攪拌著的2.1ml冷的97 %的冷氯磺酸中，油浴加熱，維持溫度80 0C4h，當(dāng)反應(yīng)物自然冷卻到室溫后，小心將其加入到80ml攪拌著的冰水中，外面還要冰浴;立即有淡黃色固體生成。將其在真空過濾，用冷去離子水，快速冼至中性；真空(0.1torr)干燥12h，得到一定數(shù)值(0.1484g)的BCPDA(C26Hi4Cl2N2S208M=617)。
[0085]具體實(shí)施例5制備BCPDA-Eu3+熒光納米微球:
[0086](D、原材料預(yù)備:
[0087]按重量預(yù)備原材料:30g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、0.1Og過硫酸鉀(KPS)、12g苯乙烯(St)、120ml乙醇或水和4，7-二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸(BCPDA);
[0088](2)、制備復(fù)合微球:
[0089]I)、制備氨基化納米微球:
[0090]將30g聚乙烯吡咯烷酮、0.1(^過硫酸鉀、128苯乙烯加入到12011^乙醇或水介質(zhì)中溶解后置于超聲波反應(yīng)器中，通氮?dú)馀懦w系中的氧氣，開啟超聲波發(fā)生器進(jìn)行聚合反應(yīng)，在反應(yīng)10小時(shí)后得到聚苯乙烯納米微球分散液；[0091 ]離心搜集聚苯乙稀納米微球，以5mL無水乙醇懸浮，加入5yL氨基娃燒，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集；
[0092]2)、制備稀土熒光納米微球:
[0093]將4，7_二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸(80?04)配制成111^/1^，按等體積加入到氨基化納米微球懸浮液中，室溫避攪拌15min，離心收集，懸浮于50mmol/L pH = 7.8磷酸鹽緩沖液中，加入等體積0.lmol/L EuC13溶液，室溫避光攪拌反應(yīng)lOmin，
[0094]離心收集后懸浮于等體積無水乙醇溶液中，加入5yL氨基硅烷，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集，即得到穩(wěn)定的稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物。
[0095]具體實(shí)施例6制備BCPDA-Eu3+熒光納米微球:
[0096](I)、原材料預(yù)備:
[0097]按重量預(yù)備原材料:25g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、0.06g過硫酸鉀(KPS)、1g苯乙烯(St)、100ml乙醇或水和4,7-二氯磺基苯-1,10菲咯啉-2,9二羧酸(BCPDA);
[0098](2)、制備復(fù)合微球:
[0099]I)、制備氨基化納米微球:
[0100]將25g聚乙烯吡咯烷酮、0.06g過硫酸鉀、1g苯乙烯加入到10mL乙醇或水介質(zhì)中溶解后置于超聲波反應(yīng)器中，通氮?dú)馀懦w系中的氧氣，開啟超聲波發(fā)生器進(jìn)行聚合反應(yīng)，在反應(yīng)8小時(shí)后得到聚苯乙烯納米微球分散液；
[Ο?Ο? ]離心搜集聚苯乙稀納米微球，以5mL無水乙醇懸浮，加入5yL氨基娃燒，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集；
[0102]2)、制備稀土熒光納米微球:
[0103]將4，7_二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸(80?04)配制成111^/1^，按等體積加入到氨基化納米微球懸浮液中，室溫避攪拌15min，離心收集，懸浮于50mmol/L pH = 7.8磷酸鹽緩沖液中，加入等體積0.lmol/L EuC13溶液，室溫避光攪拌反應(yīng)lOmin，
[0104]離心收集后懸浮于等體積無水乙醇溶液中，加入5yL氨基硅烷，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集，即得到穩(wěn)定的稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物。
[0105]其中BCPDA激發(fā)光、發(fā)射光測定:
[0106]取0.0023g BCPDA溶于37ul水中，配制成10—Vol/L母液，稀釋成10—3mol/L，取
1.5ml與同摩爾濃度的EuCl31.5ml混合均勻測定熒光值。
[0107]所述4，4，-雙(I，I，I，2，2，3，3_七氟_4，6_己二酮基)氯磺基_鄰-三聯(lián)苯或4，7-二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸與乙醇或水的體積比為3:1。
[0108]所述聚合反應(yīng)過程中通循環(huán)水維持的反應(yīng)溫度為60°C，且保持恒定的功率300W和恒定的氮?dú)鈿饬魉?所述氮?dú)鈿饬魉俑鶕?jù)使用氮?dú)夤艿赖闹睆讲煌煌?，通常情況下是2-3個(gè)氮?dú)鈿馀?秒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物，其特征在于，先將聚乙烯吡咯烷酮、過硫酸鉀、苯乙烯加入乙醇或水介質(zhì)中溶解后置于超聲波反應(yīng)器中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下產(chǎn)生聚合反應(yīng);在一定溫度下、且保持恒定的功率和氮?dú)鈿饬魉?，反?yīng)一定時(shí)間后得到聚苯乙烯納米微球分散液;再利用帶有活性基團(tuán)的有機(jī)硅烷在二氧化硅微球引入活性基團(tuán)，再將稀土熒光絡(luò)合物4，7-二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸-銪或4，4，-雙(I，I，I，2，2，3，3，-七氟_4，6,-己二酮基)氯磺基-鄰-三聯(lián)苯-銪通過化學(xué)鍵合的形式固定于二氧化娃微球的表面，而后在微球表面以帶有活性基團(tuán)的有機(jī)硅烷再次引入活性基團(tuán)，制成稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物。2.—種如權(quán)利要求1所述的一種稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、原材料預(yù)備: 按重量預(yù)備原材料:15_30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.10g過硫酸鉀、8-12g苯乙烯、80-l20ml乙醇或水和4，4，-雙(l ,1,1,2,2,3,3 h氣_4，6_己二酬基)氣橫基-鄰-二聯(lián)苯； (2)、制備復(fù)合微球: 1)、制備氨基化納米微球: 將15-30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.1(^過硫酸鉀、8-128苯乙烯加入到80-1201111乙醇或水介質(zhì)中溶解后置于超聲波反應(yīng)器中，通氮?dú)馀懦w系中的氧氣，開啟超聲波發(fā)生器進(jìn)行聚合反應(yīng)，在反應(yīng)6-10小時(shí)后得到聚苯乙烯納米微球分散液； 離心搜集聚苯乙稀納米微球，以5mL無水乙醇懸浮，加入5yL氨基娃燒，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集； 2)、制備稀土熒光納米微球: 將4，4，-雙(1,1,1,2,2,3,3h氣-4,6-己二酮基)氯橫基-鄰-二聯(lián)苯配制成lmg/mL，按等體積加入到氨基化納米微球懸浮液中，室溫避攪拌15min，離心收集，懸浮于50mmol/L、pH值=7.8的磷酸鹽緩沖液中，加入等體積0.lmol/L氯化銪溶液，室溫避光攪拌反應(yīng)1min， 離心收集后懸浮于等體積無水乙醇溶液中，加入5yL氨基硅烷，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集，即得到穩(wěn)定的稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物。3.—種如權(quán)利要求1所述的一種稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)、原材料預(yù)備: 按重量預(yù)備原材料:15-3(^聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.1(^過硫酸鉀、8-128苯乙烯、80-120ml乙醇或水和4，7-二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸； (2)、制備復(fù)合微球: 1)、制備氨基化納米微球: 將15-30g聚乙烯吡咯烷酮、0.03-0.1(^過硫酸鉀、8-128苯乙烯加入到80-1201111乙醇或水介質(zhì)中溶解后置于超聲波反應(yīng)器中，通氮?dú)馀懦w系中的氧氣，開啟超聲波發(fā)生器進(jìn)行聚合反應(yīng)，在反應(yīng)6-10小時(shí)后得到聚苯乙烯納米微球分散液； 離心搜集聚苯乙稀納米微球，以5mL無水乙醇懸浮，加入5yL氨基娃燒，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集； 2)、制備稀土熒光納米微球: 將4，7-二氯磺基苯-1，10菲略啉-2，9二羧酸配制成lmg/mL，按等體積加入到氨基化納米微球懸浮液中，室溫避攪拌15min，離心收集，懸浮于50mmoI/L、pH值=7.8的磷酸鹽緩沖液中，加入等體積0.lmol/L氯化銪溶液，室溫避光攪拌反應(yīng)1min， 離心收集后懸浮于等體積無水乙醇溶液中，加入5yL氨基硅烷，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)I小時(shí)，以等體積無水乙醇洗滌后收集，即得到穩(wěn)定的稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物的制備方法，其特征在于，所述4，4，-雙(I，I，I，2，2，3，3-七氟-4，6-己二酮基)氯磺基_鄰-三聯(lián)苯或4，7-二氯磺基苯-1，10菲咯啉-2，9二羧酸與乙醇或水的體積比為3:1。5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物的制備方法，其特征在于，所述聚合反應(yīng)過程中通循環(huán)水維持的反應(yīng)溫度為60-80°C，且保持恒定的功率300W和恒定的氮?dú)鈿饬魉佟?br>【專利摘要】一種稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物及其制備方法。本發(fā)明涉及功能高分子生物材料技術(shù)領(lǐng)域，其制備方法是：先將聚乙烯吡咯烷酮、過硫酸鉀、苯乙烯加入乙醇或水介質(zhì)中溶解后置于超聲波反應(yīng)器中，在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下產(chǎn)生聚合反應(yīng)后得到聚苯乙烯納米微球分散液；再將稀土熒光絡(luò)合物4,7-二氯磺基苯-1,10菲咯啉-2,9二羧酸-銪或4,4,-雙(1,1,1,2,2,3,3,-七氟-4,6,-己二酮基)氯磺基-鄰-三聯(lián)苯-銪通過化學(xué)鍵合的形式固定于二氧化硅微球的表面，最終制成稀土熒光標(biāo)記的復(fù)合微球標(biāo)記物；本發(fā)明具有熒光壽命長、穩(wěn)定性好、易合成、成本較低和易標(biāo)記的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】C09K11/06, C09K11/02, B01J13/02
【公開號(hào)】CN105623651
【申請?zhí)枴緾N201610126200
【發(fā)明人】曾驥孟, 胡鵬, 唐振洲, 蒙明慧, 林輝暖
【申請人】江蘇醫(yī)諾萬細(xì)胞診療有限公司
【公開日】2016年6月1日
【申請日】2016年3月7日