本發(fā)明涉及血液凈化領(lǐng)域，具體涉及一種通過交聯(lián)聚乙烯醇(PVA)與DNA混合包膜的DNA免疫吸附劑及其制備方法，這種DNA免疫吸附劑對ds-DNA有特異性吸附性。

背景技術(shù)：

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種較常見的累及多系統(tǒng)多器官的自身免疫性疾病，由于患者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)障礙及自身免疫耐受狀態(tài)被打破，產(chǎn)生多種自身抗體，發(fā)病機(jī)理主要是由于免疫復(fù)合物形成。多方面研究證實(shí)，抗雙鏈DNA抗體(抗ds-DNA抗體)與SLE疾病活動性正相關(guān)。特別是在狼瘡性腎炎患者體內(nèi)，抗ds-DNA抗體與DNA結(jié)合成為免疫復(fù)合物在腎小球基底膜沉積，或ds-DNA抗體直接作用于腎小球抗原而造成SLE患者的腎損傷。

免疫吸附(IA)療法是一種公認(rèn)的對SLE疾病有效的血液凈化方法。該方法的特異性吸附對正常血漿成分的影響較小，吸附效率高而不良反應(yīng)較小，避免了輸血反應(yīng)及各種血源性傳染病發(fā)生的可能性，上述優(yōu)點(diǎn)使得IA療法配合藥物治療在SLE的臨床治療模式中得到越來越多的推廣。其中，近十幾年來發(fā)展起來一種使用DNA作為吸附大分子的新興療法，這種療法利用DNA對SLE患者血液中的致病性抗ds-DNA抗體產(chǎn)生特異識別作用，通過血液灌流清除患者血液中的致病物質(zhì)。美國的Terman DS等人(Lancet,1979,2(8147):824-7)首次使用活性炭載體，采用火棉膠包埋DNA而制成吸附劑，成功開創(chuàng)了DNA吸附劑治療SLE的先河。1987年，Jones和Frank R在歐洲專利申請?zhí)朎P0272792A1的文件中對此方法進(jìn)行了詳細(xì)地描述，從而推動了此方法在臨床方法的應(yīng)用。本申請人依據(jù)專利ZL99800883.4生產(chǎn)的DNA免疫吸附柱，從2005年開始在國內(nèi)銷售，臨床數(shù)據(jù)顯示，這種DNA免疫吸附柱對SLE的具有良好的治療效果，此吸附劑以高分子聚合形成的三元共聚超大孔樹脂為原料，進(jìn)行炭化、活化后得到碳化樹脂載體，然后通過火棉膠包膜方法固定DNA，從而實(shí)現(xiàn)對抗ds-DNA抗體的有效吸附。南開大學(xué)在申請?zhí)枮镃N98102355.X的中國發(fā)明專利中公開了一種碳化樹脂DNA免疫吸附劑的制備方法，該方案從苯乙烯、二乙烯苯和丙烯腈開始，通過合成三元共聚超大孔樹脂，高溫下碳化得到碳化樹脂，經(jīng)過酸、堿、乙醇處理后烘干，利用火棉膠包膜法，將小牛胸腺DNA固定于碳化樹脂表面，得到DNA免疫吸附劑，其可以直接用于血液灌流治療SLE。

可見，在現(xiàn)有技術(shù)中，對于火棉膠包膜DNA的方法已經(jīng)得到了廣泛的研究和應(yīng)用，然而，由于火棉膠溶液與DNA溶液在混合時為兩相，需要通過攪拌使其分散均勻，這種過程在工藝的實(shí)現(xiàn)和控制上比較復(fù)雜。另外，這種方法還存在的問題是混合不均而容易導(dǎo)致最終產(chǎn)品的成膜的厚度不均一，這會影響產(chǎn)品的良品率。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中DNA免疫吸附劑采用火棉膠的包膜的厚度不均一以及吸附效率低的問題,本發(fā)明的第一目的是提供一種DNA免疫吸附劑。

針對現(xiàn)有技術(shù)中DNA免疫吸附劑的制備方法中工藝復(fù)雜的問題，本發(fā)明的第二目的是提供一種制備方法簡易的DNA免疫吸附劑的制備方法。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一目的，本發(fā)明提供的DNA免疫吸附劑包括吸附劑載體，吸附劑載體上負(fù)載有DNA，DNA免疫吸附劑還包括交聯(lián)聚乙烯醇膜,交聯(lián)聚乙烯醇膜對吸附劑載體形成包膜作用。

如圖1所示的聚乙烯醇(PVA)是聚醋酸乙烯酯水解的產(chǎn)物，其是一種無毒、無味的合成高分子材料，具有良好的親水性及成膜性。PVA的形狀有片狀、絮狀或粉末狀三種固體，它的分子結(jié)構(gòu)比較規(guī)整，具有一定的結(jié)晶度，是一種半結(jié)晶性聚合物。由于PVA分子鏈內(nèi)含有大量的羥基，因此分子內(nèi)和分子間都很容易形成氫鍵，而大量的氫鍵使其具有良好的親水性、生物相容性和反應(yīng)性。由于PVA具有良好的成膜性，其可作為載藥膜用于口腔及表皮創(chuàng)面，也可用于口服制劑，PVA凝膠則由于具有良好的機(jī)械性能(高彈性模量和高機(jī)械強(qiáng)度)及生物相溶性，因此在藥物控制釋放方面有所應(yīng)用。目前，PVA通過戊二醛交聯(lián)制備成載藥微球而用于藥物控制釋放的方法已經(jīng)在臨床上獲得了滿意的療效。

由于PVA具有良好的親水性，因此其在水溶液中具有一定的溶脹性，但根據(jù)實(shí)際的使用要求，一般需要對PVA的溶脹性進(jìn)行改性。其中，交聯(lián)是PVA改性最常用的方法，由于PVA鏈中的羥基比較活潑，容易與含有羧基、醛基、羥基等官能團(tuán)的化合物反應(yīng)而在分子間形成共價鍵，反應(yīng)生成交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)，從而減小膜在水中的溶脹度。因此，本發(fā)明使用交聯(lián)的PVA對吸附劑載體進(jìn)行包膜，通過交聯(lián)作用降低了PVA的溶脹性能，使交聯(lián)的PVA在吸附劑載體表面形成穩(wěn)定的膜片，而交聯(lián)PVA膜可以增強(qiáng)DNA在吸附劑載體上固定作用，從而更好地發(fā)揮DNA對抗雙鏈DNA抗體的吸附性能。為了更好地說明本發(fā)明提供的DNA免疫吸附劑具有的優(yōu)異性能，在實(shí)施例部分，把本發(fā)明的DNA免疫吸附劑與傳統(tǒng)的火棉膠包膜經(jīng)過對比的性能測試，結(jié)果表明，通過交聯(lián)PVA包膜的本發(fā)明的DNA免疫吸附劑的性能優(yōu)于傳統(tǒng)火棉膠包膜的對照樣。

一個優(yōu)選的方案是，交聯(lián)聚乙烯醇膜的理論交聯(lián)度為10％至30％。

作為親水性的聚合物，PVA膜在水中會逐漸溶脹或溶解，因此需要通過交聯(lián)作用降低其溶解性能，以提高其機(jī)械強(qiáng)度，增強(qiáng)膜的穩(wěn)定性。按照本發(fā)明提供的制備方法，可以制備交聯(lián)度不同的交聯(lián)PVA-DNA膜(由于DNA是負(fù)載在吸附劑載體上的，而交聯(lián)PVA膜對吸附劑載體包膜之后，就會增強(qiáng)對DNA的負(fù)載作用力，因此這種結(jié)構(gòu)也可以描述為交聯(lián)PVA膜與DNA混合形成交聯(lián)PVA-DNA膜，而交聯(lián)PVA-DNA膜對吸附劑載體形成包膜作用)。經(jīng)過實(shí)驗后發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PVA的理論交聯(lián)度小于7％時，形成的交聯(lián)PVA-DNA膜的溶脹性仍然明顯并有少量DNA脫落，而當(dāng)理論交聯(lián)度大于7％時，交聯(lián)PVA-DNA膜有一定程度的溶脹，但DNA脫落不明顯；而當(dāng)交聯(lián)PVA-DNA膜的理論交聯(lián)度大于15％時，交聯(lián)PVA-DNA膜沒有明顯的溶脹且沒有檢測到DNA的脫落。交聯(lián)度理論上的上限為100％，實(shí)際上達(dá)不到該水平，而交聯(lián)PVA膜的強(qiáng)度則會隨之增加，但過高的交聯(lián)度會降低膜上DNA的伸展而導(dǎo)致吸附性能的下降。因此，綜合考慮上面的多方面因素，在保證交聯(lián)PVA膜的強(qiáng)度及防止DNA脫落的前提下，對于不同的吸附劑載體，優(yōu)選的交聯(lián)度范圍應(yīng)該為10％至30％，且20％為最佳交聯(lián)度。

一個優(yōu)選的方案是，交聯(lián)聚乙烯醇膜是采用戊二醛、馬來酸酐、乙二酸、丙二酸、丁二酸、己二酸或這四種酸相應(yīng)的酸酐作為交聯(lián)劑制備的；吸附劑載體為大孔吸附樹脂或活性炭或炭化樹脂，吸附劑載體的粒徑范圍在0.1毫米到1.18毫米之間。

如圖2所示，是采用戊二醛作為交聯(lián)劑與PVA的交聯(lián)過程的反應(yīng)式。如圖3所示，是采用馬來酸酐作為交聯(lián)劑與PVA的交聯(lián)過程的反應(yīng)式。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第二目的，本發(fā)明提供的DNA免疫吸附劑的制備方法包括以下步驟：首先執(zhí)行步驟A或步驟B；步驟A:使聚乙烯醇水溶液中的聚乙烯醇發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，形成交聯(lián)聚乙烯醇溶液，在交聯(lián)聚乙烯醇溶液中加入DNA溶液，形成包膜液，加入吸附劑載體，用包膜液對吸附劑載體進(jìn)行包膜；步驟B:在聚乙烯醇水溶液中加入DNA溶液后與吸附劑載體混合,再加入交聯(lián)劑和催化劑，聚乙烯醇發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)形成交聯(lián)聚乙烯醇膜，交聯(lián)聚乙烯醇膜及DNA對吸附劑載體形成包膜作用；然后執(zhí)行步驟C，過濾后用水洗滌至無溶劑殘留，溶液的pH接近中性；最后，干燥得到成品。

由上述方案可見，本發(fā)明提供的DNA免疫吸附劑的制備方法簡單易行，制備得到的DNA免疫吸附劑的性質(zhì)穩(wěn)定。

在實(shí)驗過程中，發(fā)現(xiàn)理論交聯(lián)度對DNA免疫吸附劑的性質(zhì)具有重要影響。

當(dāng)理論交聯(lián)度≥15％時，包膜順序如果采用先交聯(lián)制備包膜液再對吸附劑載體進(jìn)行負(fù)載,即按照以下第一種方法的步驟：首先配制聚乙烯醇溶液；然后加入交聯(lián)劑得到交聯(lián)聚乙烯醇溶液，接著加入DNA溶液得到包膜液；接著再加入吸附劑載體如聚苯乙烯-二乙烯大孔吸附樹脂(以上步驟形成第一種方法的步驟A)；最后經(jīng)過處理得到成品；那么，按上面的第一種方法的步驟在制備DNA免疫吸附劑時，得到的包膜液的粘度較大，無法順利完成包膜，并導(dǎo)致部分吸附劑載體成團(tuán)粘結(jié)，包膜效率受到嚴(yán)重影響。因此，當(dāng)設(shè)定理論交聯(lián)度≥15％時，應(yīng)該優(yōu)選采用先包膜再交聯(lián)的順序，即按照下面的第二種方法的步驟：首先配制聚乙烯醇溶液并加入DNA溶液形成包膜液；然后加入吸附劑載體；接著加入交聯(lián)劑得到交聯(lián)聚乙烯醇膜(以上步驟形成第二種方法的步驟B)；最后經(jīng)過后處理得到DNA免疫吸附劑。

另外，當(dāng)PVA的理論交聯(lián)度小于15％時，無論采用何種包膜順序(上面的第一種方法或第二種方法)，均能順利完成對吸附劑載體的包膜。但是考慮到操作的方便性，當(dāng)PVA理論交聯(lián)度小于15％時，優(yōu)選的方案為按照上述第一種方法的步驟，即先交聯(lián)制備包膜液，再進(jìn)行對DNA的包膜，這樣得到的DNA免疫吸附劑能夠取得最佳效果。

基于上面的論述過程，一個優(yōu)選的方案是，當(dāng)聚乙烯醇的理論交聯(lián)度小于15％時，按照上面的第一種方法制備DNA免疫吸附劑，也就是選擇執(zhí)行步驟A；在執(zhí)行步驟C的過程中，用濾袋過濾后加入乙醇分散吸附劑載體并瀝干。

基于上面的論述過程，另一個優(yōu)選的方案是，當(dāng)聚乙烯醇的理論交聯(lián)度在15％以上時，按照上面的第二種方法制備DNA免疫吸附劑，也就是選擇執(zhí)行步驟B。

PVA溶液濃度的大小關(guān)系到交聯(lián)后溶液的黏度大小。如果PVA濃度較大，則在理論交聯(lián)度較小(小于15％)的情況下，交聯(lián)后的包膜液不利于在吸附劑載體上的成膜。通過制備系列濃度的PVA溶液，在不同的交聯(lián)度下試驗交聯(lián)PVA膜對吸附劑載體的成膜效果，結(jié)果表明，當(dāng)PVA濃度在2‰至2％(w/v)之間時，可通過上述步聚對吸附劑載體進(jìn)行成膜而不影響性能。而當(dāng)PVA溶液濃度較大時(如大于8％)，即使是采用先成膜(PVA膜)再交聯(lián)(交聯(lián)PVA膜)的順序(即按照上述第二種方法的步驟B)也會造成部分吸附劑載體的成團(tuán)黏結(jié)，交聯(lián)PVA膜對吸附劑載體的包膜作用降低。因此，優(yōu)選的PVA濃度范圍在2‰至2％(w/v)之間。

基于上面的論述，一個優(yōu)選的方案是，聚乙烯醇水溶液的濃度范圍是2‰至2％(w/v)。

一個優(yōu)選的方案是，加入的DNA溶液與交聯(lián)聚乙烯醇溶液的體積比為0.8：1至1.2：1。

一個優(yōu)選的方案是，聚乙烯醇水溶液與DNA溶液的體積比為1：0.8至1：1.2。

一個優(yōu)選的方案是，采用戊二醛、馬來酸酐、乙二酸、丙二酸、丁二酸、己二酸或這四種酸相應(yīng)的酸酐作為交聯(lián)劑；采用大孔吸附樹脂或活性炭或炭化樹脂作為吸附劑載體，控制吸附劑載體的粒徑范圍在0.1毫米到1.18毫米之間；聚乙烯醇的種類為PVA-1792、PVA-1788、PVA-2099、PVA-2088或PVA-1588；聚乙烯醇水溶液的配制過程為：把聚乙烯醇加入到處于攪拌狀態(tài)的水中，分散均勻后升溫至80℃，攪拌2小時后得到溶解充分、混合均勻的聚乙烯醇水溶液；DNA溶液的配制過程為：首先把純度85％以上的小牛胸腺DNA溶解于0.2mol/L的pH＝7.4的Tris-HCL緩沖溶液中，得到濃度為2mg/ml至6mg/ml的DNA原溶液；然后在DNA原液中依次加入等體積的氯化四氮唑蘭飽和溶液和等體積的無水乙醇，攪拌或振蕩至完全溶解，得到DNA溶液；在過濾和水洗滌的步驟中，用2倍至5倍吸附劑載體體積的無水乙醇分散吸附劑載體，pH被水洗滌至中性，在干燥過程中，首先風(fēng)干至具有流動性，然后在50℃至60℃下烘干2小時并冷卻；聚乙烯醇發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)的理論交聯(lián)度的計算公式為：理論交聯(lián)度＝(nCLA*Z/nPVA)×100％，其中，nCLA表示交聯(lián)劑的物質(zhì)的量，Z表示交聯(lián)劑與PVA上OH基體的結(jié)合數(shù)，nPVA表示PVA單體的物質(zhì)的量；催化劑為硫酸溶液，硫酸溶液的濃度為0.5mol/L，硫酸溶液的加入體積為交聯(lián)劑物質(zhì)的量的0.1倍至0.5倍。

附圖說明

圖1是本發(fā)明DNA免疫吸附劑實(shí)施例的聚乙烯醇的分子式。

圖2是本發(fā)明DNA免疫吸附劑實(shí)施例在使用戊二醛進(jìn)行交聯(lián)時的反應(yīng)路線圖。

圖3是本發(fā)明DNA免疫吸附劑實(shí)施例在使用馬來酸酐進(jìn)行交聯(lián)時的反應(yīng)路線圖。

以下結(jié)合附圖及實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

具體實(shí)施方式

在本發(fā)明的實(shí)施例中，聚乙烯醇在交聯(lián)反應(yīng)中使用的交聯(lián)劑并無特別限制，可以采用現(xiàn)有的任意種類的交聯(lián)劑，只要能夠保證實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的即可。作為優(yōu)選方案，采用戊二醛、馬來酸酐、乙二酸、丙二酸、丁二酸、己二酸或這四種酸相應(yīng)的酸酐作為交聯(lián)劑。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，吸附劑載體可以是現(xiàn)有技術(shù)中任意種類的用于負(fù)載DNA的吸附劑載體。作為優(yōu)選方案，可以采用大孔吸附樹脂或活性炭或炭化樹脂作為所述吸附劑載體，且控制所述吸附劑載體的粒徑范圍在0.1毫米到1.18毫米之間。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，對于聚乙烯醇的使用并無特別限制，只要能夠?qū)崿F(xiàn)本發(fā)明的發(fā)明目的即可。另外，聚乙烯醇的物理性質(zhì)受到化學(xué)結(jié)構(gòu)、醇解度和聚合度的綜合影響。其中，聚合度分為超高聚合度(分子量25萬至30萬)、高聚合度(分子量17萬至22萬)、中聚合度(分子量12萬至15萬)和低聚合度(分子量2.5萬至3.5萬)。一般來說，聚合度增大，則水溶液粘度增大，成膜后的強(qiáng)度和耐溶劑性提高。醇解度為78％至100％。

本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際需求，選取合適種類的聚乙烯醇。作為優(yōu)選的方案，PVA的分子量是3萬至17萬，具體地，聚乙烯醇的種類可以為PVA-1792、PVA-1788、PVA-2099、PVA-2088或PVA-1588。另外，作為優(yōu)選的方案，所用的PVA的形態(tài)的種類包括但不限于PVA-1792(三維)、PVA-1788(片)、PVA-2099(片)、PVA-2088(粒)、PVA-1588(片)。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，PVA的交聯(lián)反應(yīng)使用的催化劑可以是現(xiàn)有的任意一種可催化PVA交聯(lián)反應(yīng)的試劑。作為優(yōu)選方案，催化劑為硫酸溶液，且優(yōu)選的硫酸溶液的濃度為0.5mol/L。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，為了方便下面的敘述，把聚乙烯醇溶液的配制過程稱為步驟1，具體按照下面的步驟進(jìn)行。根據(jù)確定好的濃度(按重量體積比算)，稱取一定量的PVA加入到攪拌的純化水中，分散均勻后升溫到80℃攪拌2小時以上，使其充分溶解，得到均勻分散的溶液。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，把DNA溶液的配制過程稱為步驟2，具體按照下面的步驟進(jìn)行。把純度85％以上的小牛胸腺DNA溶解于0.2mol/L的pH＝7.4的Tris-HCL緩沖溶液中，配制濃度為2mg/ml至6mg/ml的DNA原溶液，然后往DNA原液中依次加入等體積的氯化四氮唑蘭飽和溶液和等體積的無水乙醇，攪拌或振蕩至完全溶解，即為DNA溶液。

聚乙烯醇發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)的理論交聯(lián)度的計算公式為：理論交聯(lián)度＝(nCLA*Z/nPVA)×100％，其中，nCLA表示交聯(lián)劑的物質(zhì)的量，Z表示交聯(lián)劑與PVA上OH基體的結(jié)合數(shù)，nPVA表示PVA單體的物質(zhì)的量。具體地，當(dāng)CLA為馬來酸酐時，Z為2；當(dāng)CLA為戌二醛時，Z為4。

在本發(fā)明的實(shí)施例中，DNA免疫吸附劑的制備方法如下?；诮宦?lián)度的不同，制備方法具體包括兩種優(yōu)選的方案。其中，當(dāng)聚乙烯醇的理論交聯(lián)度小于15％時，則按照第一種方法的步驟進(jìn)行，第一種方法的步驟如下：執(zhí)行步驟A：首先，在聚乙烯醇水溶液中加入交聯(lián)劑和催化劑發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)得到交聯(lián)聚乙烯醇溶液；然后，向交聯(lián)聚乙烯醇溶液中加入DNA溶液；接著，加入吸附劑載體，攪拌后DNA負(fù)載到吸附劑載體上，在吸附劑載體上形成交聯(lián)聚乙烯醇膜，交聯(lián)聚乙烯醇膜對吸附劑載體形成包膜作用；然后執(zhí)行步驟C，用濾袋過濾后加入乙醇分散吸附劑載體并瀝干。接著，用水洗滌至接近中性；最后，干燥得到成品。作為優(yōu)選的實(shí)施例，加入的DNA溶液與交聯(lián)聚乙烯醇溶液的體積比為0.8：1至1.2：1。

其中，當(dāng)聚乙烯醇的理論交聯(lián)度在15％以上(≥15％)時，則按照第二種方法的步驟進(jìn)行，第二種方法的步驟如下：執(zhí)行步驟B：首先，把聚乙烯醇水溶液與DNA溶液混合；然后，加入吸附劑載體,DNA負(fù)載到吸附劑載體上，在吸附劑載體上形成聚乙烯醇膜；最后，加入交聯(lián)劑和催化劑發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)得到交聯(lián)聚乙烯醇膜，交聯(lián)聚乙烯醇膜對吸附劑載體形成包膜作用。接著，過濾后用水洗滌調(diào)節(jié)pH至中性；最后，干燥得到成品。作為優(yōu)選的實(shí)施例，聚乙烯醇水溶液與DNA溶液的體積比為1：0.8至1：1.2。

根據(jù)發(fā)明內(nèi)容部分的論述，當(dāng)PVA的理論交聯(lián)度小于15％時，優(yōu)選采用第一種方法的步驟制備DNA免疫吸附劑。而當(dāng)PVA的理論交聯(lián)度大于或等于15％時，優(yōu)選采用第二種方法的步驟制備DNA免疫吸附劑。

在本發(fā)明下面的實(shí)施例中，按照上面的第一種或者第二種方法得到DNA免疫吸附劑之后，再把這種DNA免疫吸附劑與傳統(tǒng)的火棉膠包膜的DNA免疫吸附劑作對比實(shí)驗。

具體地，首先將本發(fā)明實(shí)施例得到的DNA免疫吸附劑在使用前使用生理鹽水浸泡30分鐘去除氣泡，充分潤濕后，取出一定量體積并吸干表面的水分。然后加入10倍DNA免疫吸附劑體積的SLE病人血漿，在37℃氣浴振蕩中吸附2小時后。接著進(jìn)行吸附前后SLE病人血漿中抗雙鏈DNA抗體濃度的檢測。接著再以火棉膠包膜的DNA免疫吸附劑作為對照樣進(jìn)行實(shí)驗。

結(jié)果表明，含有交聯(lián)PVA膜的DNA免疫吸附劑的吸附性能優(yōu)于對照樣。同時，由于PVA具有良好的生物相容性及親水性，因此，本發(fā)明的實(shí)施例的DNA免疫吸附劑的血液相容性較好，且對血液中其它有益成份的吸附及破壞率均較低。這就說明使用交聯(lián)PVA對DNA免疫吸附劑進(jìn)行包膜具有很大的潛力及明顯的應(yīng)用前景，有望制備成第二代性能更優(yōu)越的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例1:大孔吸附樹的制備過程如下。

在常溫下，將明膠溶解于水中，配成0.5％至5％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的反應(yīng)水相，加熱到30℃至50℃，以苯乙烯和二乙烯苯的混合單體為反應(yīng)油相，其中二乙烯苯占混合單體總質(zhì)量的0.5％至1.5％，水相與油相體積比為3：1，以過氧化苯甲酰為引發(fā)劑，引發(fā)劑用量為混合單體總質(zhì)量的1％-3％。經(jīng)懸浮聚合，首先緩慢升溫至70℃至80℃后反應(yīng)3小時以上，然后緩慢升溫到85℃反應(yīng)3小時，接著再緩慢升溫至95℃以上反應(yīng)3小時，接著經(jīng)過濾、洗滌處理后，制備出低交聯(lián)凝膠型聚苯乙烯樹脂，簡稱白球。

常溫下在三口瓶中加入白球，以氯甲醚和二氯乙烷的混合溶液充分溶脹，混合溶液用量為白球質(zhì)量的6倍至8倍，氯甲醚和二氯乙烷的體積比為1：2，加入ZnCl₂作為催化劑，催化劑用量為低交聯(lián)聚苯乙烯質(zhì)量的40％至80％，充分混勻后升溫到30℃至40℃，反應(yīng)8小時至12小時，經(jīng)過濾、洗滌處理后，制備出低交聯(lián)氯甲基化的苯乙烯樹脂，簡稱氯球。

常溫下在三口瓶中加入氯球，用二氯乙烷充分溶脹，二氯乙烷用量為氯球質(zhì)量的8倍至10倍，在攪拌下滴加四氯化錫和二氯乙烷混合溶液，混合溶液的用量為氯球質(zhì)量的50％至70％，且四氯化錫和二氯乙烷的體積比為1：1至2：1，以0.5℃/min-2.0℃/min的速度將溫度升到80℃至100℃，反應(yīng)8小時至10小時，將樹脂取出晾干，真空干燥，得到聚苯乙烯-二乙烯苯大孔吸附樹脂(以下簡稱樹脂)，這種樹脂的粒徑為0.3mm至1.0mm，比表面積為1200m²/g至1600m²/g干樹脂，平均孔徑為2nm至3nm，孔隙率為50％至80％。

使用R40/3標(biāo)準(zhǔn)篩，將合成的樹脂按0.3mm、0.5mm、0.6mm、0.71mm、0.85mm、1.0mm或1.18mm進(jìn)行篩分，得到各種不同粒徑范圍的樹脂。

本實(shí)施例的PVA溶液的濃度為2％(w/v)，PVA的理論交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

首先，按照上述步驟1配制2％(w/v)的PVA-1788溶液1000ml。然后，按照理論交聯(lián)度10％，根據(jù)交聯(lián)度公式計算加入所需馬來酸酐的量約為22mmol并得到混合溶液，往上述混合溶液中以5ml/min的速度滴加22ml稀釋的濃硫酸溶液0.5mol/L，滴加完后繼續(xù)攪拌1小時，得到均一溶液。

接著，取該均一溶液100ml，加入按上述步驟2配制的等體積濃度為4mg/ml的DNA溶液，攪拌5分鐘混合均勻后即為包膜溶液。

接著，往包膜溶液中加入160ml粒徑為0.85mm至1mm的上述的聚苯乙烯-二乙烯苯大孔吸附樹脂，攪拌5分鐘后，用濾袋過濾，倒入無水乙醇中將吸附劑充分分散后瀝干，50℃烘干4小時，冷卻后即為交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例2：相比于實(shí)施例1，本實(shí)施例將馬來酸酐替換為濃度為50％的高純度醫(yī)用級戊二醛水溶液(以下實(shí)施例中的戊二醛水溶液的濃度均為50％)，其它步驟與實(shí)施例1相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例3：相比于實(shí)施例1，本實(shí)施例將實(shí)施例1中所用的聚苯乙烯-二乙烯苯大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，活性炭的粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例1相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例4：相比于實(shí)施例3，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例1相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例5：相比于實(shí)施例1，本實(shí)施例所用的聚苯乙烯-二乙烯苯大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例1相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例6：相比于實(shí)施例5，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例5相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例7：本實(shí)施例的PVA溶液的濃度為1％(w/v)，交聯(lián)度為10％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

首先，按照步驟1配制得到PVA溶液50ml，用注射用水稀釋到100ml，設(shè)定理論交聯(lián)度的值為10％，根據(jù)理論交聯(lián)度計算公式計算加入所需馬來酸酐的量約為1.2mmol并得到混合溶液，往上述混合溶液中以2ml/min的速度滴加2ml稀釋的濃硫酸溶液0.5mol/L，滴加完后繼續(xù)攪拌1小時，得到均一溶液。

然后，向均一溶液中加入按步驟2配制的等體積濃度為3mg/ml的DNA溶液，攪拌5分鐘混合均勻后即為包膜溶液。

接著，往包膜溶液中加入實(shí)施例1中制備的0.71mm至0.85mm聚苯乙烯-二乙烯苯大孔吸附樹脂，攪拌5分鐘后，用濾袋過濾，倒入無水乙醇中將DNA免疫吸附劑充分分散后瀝干，50℃烘干4小時，冷卻后即為交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例8：相比于實(shí)施例7，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例7相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例9：相比于實(shí)施例7，本實(shí)施例所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例7相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例10：相比于實(shí)施例9，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例9相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例11：相比于實(shí)施例7，本實(shí)施例所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm-0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例7相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例12：相比于實(shí)施例11，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例11相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例13：本實(shí)施例的PVA的濃度為0.2％(w/v)，理論交聯(lián)度為10％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

首先，按照上述聚乙烯醇溶液的配制方法配制PVA溶液100ml，用注射用水稀釋到1000ml，設(shè)定理論交聯(lián)度的值為10％，根據(jù)理論交聯(lián)度公式計算出加入所需馬來酸酐的量約為2.3mmol而得到混合溶液，往上述混合溶液中以2ml/min的速度滴加2.3ml稀釋的濃硫酸溶液，稀釋后的濃度為0.5mol/L，滴加完后繼續(xù)攪拌1小時，得到均一溶液。

然后，取該均一溶液100ml，加入按步驟2配制的等體積濃度為4mg/ml的DNA溶液，攪拌5分鐘混合均勻后即為包膜溶液。

接著，往包膜溶液中加入實(shí)施例1中制備的0.85mm至1.18mm的聚苯乙烯-二乙烯苯大孔吸附樹脂，攪拌5分鐘后用濾袋過濾，倒入無水乙醇中將DNA免疫吸附劑充分分散后瀝干，50℃烘干4小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例14：相比于實(shí)施例13，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例13相同，制備成理論交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例15，相比于實(shí)施例13，本實(shí)施例將實(shí)施例13中所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例13相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例16：相比于實(shí)施例15，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例15相同，制備成理論交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例17：相比于實(shí)施例13，本實(shí)施例將實(shí)施例13中所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例13相同，制備成交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例18：相比于實(shí)施例17，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例17相同，制備成理論交聯(lián)度為10％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例19：本實(shí)施例的PVA的濃度為2％(w/v)，理論交聯(lián)度為15％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

首先，按照步驟1配制2％(w/v)的PVA-1588溶液500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1混合均勻后即為包膜液。將1000ml大孔吸附樹脂倒入上述包膜液中，其中大孔吸附樹脂按照實(shí)施例1中的方法制備，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散大孔吸附樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻后即為包膜樹脂。

按理論交聯(lián)度為15％，配制出含馬來酸酐17mmol的溶液1L，加入17ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入1L包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例20：相比于與實(shí)施例19，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例19相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例21：相比于與實(shí)施例19，本實(shí)施例中所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例19相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例22：相比于實(shí)施例21，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例21相同，制備成交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例23：相比于實(shí)施例19，本實(shí)施例中所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例22相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例24：相比于實(shí)施例23，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例23相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例25：本實(shí)施例的PVA的濃度為1％(w/v)，理論交聯(lián)度為15％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例19中配制的PVA溶液250ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1混合均勻后即為包膜液。將1000ml按實(shí)施例1中方法制備的0.6mm至0.85mm大孔吸附樹脂倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻后即為包膜樹脂。

按理論交聯(lián)度15％，計算后配制得到含馬來酸酐8.5mmol的溶液1L，加入8.5ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下加入1L包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例26：相比于實(shí)施例25，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例25相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例27:相比于實(shí)施例25，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例25相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例28：相比于實(shí)施例27，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例27相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例29：相比于實(shí)施例25，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例25相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例30：相比于實(shí)施例29，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例29相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例31：本實(shí)施例的PVA的濃度為0.2％(w/v)，理論交聯(lián)度為15％的吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例19中配制的PVA溶液50ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液按以體積比1：1混合均勻后即為包膜液。將1000ml按實(shí)施例1中方法制備的0.6mm至0.71mm大孔吸附樹脂倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻即為包膜樹脂。

按理論交聯(lián)度為15％，計算后配制得到含馬來酸酐1.7mmol的溶液1L，加入1.7ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入1L包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例32：相比于實(shí)施例31，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例31相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例33：相比于實(shí)施例31，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例31相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例34：相比于實(shí)施例33，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例33相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例35：相比于實(shí)施例31，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例31相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例36：相比于實(shí)施例35，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例35相同，制備成理論交聯(lián)度為15％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例37：本實(shí)施例的PVA的濃度為2％(w/v)，理論交聯(lián)度為20％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

按照步驟1配制2％(w/v)的PVA-2009溶液500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液按以體積比1：1.2混合均勻后即為包膜液。將880ml按實(shí)施例1中方法制備的0.71mm至1.0mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻后即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度20％，計算后配制得到含馬來酸酐23mmol的溶液1L，加入23ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例38：相比于實(shí)施例37，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例37相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例39：相比于實(shí)施例37，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例37相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例40：相比于實(shí)施例39，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例39相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例41：相比于實(shí)施例37，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例37相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例42：相比于實(shí)施例41，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例41相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例43：本實(shí)施例的PVA的濃度為1％(w/v)，理論交聯(lián)度為20％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例39中配制的PVA溶液250ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液按以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml按實(shí)施例1中方法制備的0.85mm至1.0mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。

按照理論交聯(lián)度20％，計算后配制得到含馬來酸酐12mmol的溶液1L，加入12ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例44：相比于實(shí)施例43，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例43相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例45：相比于實(shí)施例43，本實(shí)施例所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例43相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例46：相比于實(shí)施例45，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例45相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例47：相比于實(shí)施例43，本實(shí)施例所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例43相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例48：相比于實(shí)施例47，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例47相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例49：本實(shí)施例的PVA的濃度為0.2％(w/v)，理論交聯(lián)度為20％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例20-1中配制的PVA溶液50ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制等體積濃度為4mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液按以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml按實(shí)施例1中方法制備的0.71mm至1.0mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度20％，計算后配制得到含馬來酸酐2.5mmol的溶液1L，加入2.5ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例50：相比于實(shí)施例49，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例49相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例51：相比于實(shí)施例49，本實(shí)施例所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例49相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例52：相比于實(shí)施例51，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例51相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例53：相比于實(shí)施例49，本實(shí)施例中所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例49相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例54：相比于實(shí)施例53，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例53相同，制備成理論交聯(lián)度為20％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例55：本實(shí)施例的PVA的濃度為2％(w/v)，理論交聯(lián)度為25％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

按照步驟1配制2％(w/v)的PVA-2009溶液500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml按實(shí)施例1中方法制備的0.85mm至1.0mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度25％，計算，配制含馬來酸酐28mmol的溶液1L，加入28ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為25％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例56：本實(shí)施例的PVA的濃度為1％(w/v)，理論交聯(lián)度為25％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例28中配制的PVA溶液250ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8-1mm，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度25％，計算，配制含馬來酸酐15mmol的溶液1L，加入15ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為25％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例57：本實(shí)施例的PVA的濃度為2％(w/v)，理論交聯(lián)度為30％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

按照步驟1配制2％(w/v)的PVA-1588溶液500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1混合均勻后，即為包膜液。將1000ml按實(shí)施例1中方法制備的0.3-0.6mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按理論交聯(lián)度30％，計算，配制含馬來酸酐34mmol的溶液1L，加入34ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入1L包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例58：相比于實(shí)施例57，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例57相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例59：相比于實(shí)施例57，本實(shí)施例將所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例57相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例60：相比于實(shí)施例59，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例59相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例61：本實(shí)施例的PVA的濃度為0.2％(w/v)，理論交聯(lián)度為25％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例55中配制的PVA溶液50ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml粒徑0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度25％，計算，配制含馬來酸酐3mmol的溶液1L，加入3ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為25％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例62：相比于實(shí)施例57，本實(shí)施例將實(shí)施例57中所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例57相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例63：相比于實(shí)施例57，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例57相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例64：本實(shí)施例的PVA的濃度為1％(w/v)，理論交聯(lián)度為30％，DNA免疫吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例57中配制的PVA溶液250ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml按實(shí)施例1中方法制備的0.6-0.71mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度30％，計算，配制含馬來酸酐17mmol的溶液1L，加入17ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例65：相比于實(shí)施例64，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例64相同，制備成交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例66：相比于實(shí)施例64，本實(shí)施例將實(shí)施例64中所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例64相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例67：相比于實(shí)施例66，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例66相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例68：相比于實(shí)施例64，本實(shí)施例將實(shí)施例64中所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例64相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例69：相比于實(shí)施例68，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例68相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例70:本實(shí)施例的PVA的濃度為0.2％(w/v)，理論交聯(lián)度為30％的吸附劑的制備過程如下。

取實(shí)施例57中配制的PVA溶液50ml，用注射用水稀釋到500ml，按照步驟2配制3mg/ml的DNA溶液，將配制好的PVA溶液和DNA溶液以體積比1：1.2混合均勻后，即為包膜液。將880ml按實(shí)施例1中方法制備的0.6mm至0.85mm大孔吸附樹脂，倒入上述包膜液中，攪拌5分鐘后過濾，瀝干后于2L無水乙醇中充分分散樹脂，過濾并吹干表面后于烘箱中50℃烘2小時后取出，冷卻，即為包膜樹脂。按照理論交聯(lián)度30％，計算，配制含馬來酸酐3.5mmol的溶液1L，加入3.5ml濃度為0.5mol/L的硫酸溶液混合后，在60℃水浴機(jī)械攪拌下，加入上述處理過的包膜樹脂，保持2小時后冷卻，過濾樹脂并用純化水洗滌至溶液接近中性，瀝干樹脂后60℃烘干2小時，冷卻后即為理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例71:相比于實(shí)施例70，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例70相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例72：相比于實(shí)施例70，本實(shí)施例將實(shí)施例70中所用的大孔吸附樹脂改為上海匯合達(dá)產(chǎn)的活性炭，粒徑為0.8mm至1mm，其它步驟與實(shí)施例70相同，制備成PVA的理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例73：相比于實(shí)施例72，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例72相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例74：相比于實(shí)施例70，本實(shí)施例將實(shí)施例70中所用的大孔吸附樹脂改為0.71mm至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂，其它步驟與實(shí)施例70相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

實(shí)施例75：相比于實(shí)施例74，本實(shí)施例將馬來酸酐改為戊二醛水溶液，其它步驟與實(shí)施例74相同，制備成理論交聯(lián)度為30％的DNA免疫吸附劑。

根據(jù)上面本發(fā)明的具體實(shí)施例制備的含交聯(lián)PVA膜的DNA免疫吸附劑，與采用火棉膠包膜的DNA免疫吸附劑進(jìn)行SLE吸附抗雙鏈DNA抗體吸附性能的比較。

分別取制備的DNA免疫吸附劑2ml，各加入SLE病人血漿20ml，在37℃振蕩下吸附兩小時，取吸附前后血漿檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附法對抗雙鏈DNA抗體進(jìn)行定量檢測，試劑盒為上?？菩律a(chǎn)，儀器為深圳愛康全自動酶免儀Uranus AE120。

對照樣的制備過程如下。對照樣采用0.71至0.85mm的山西璀鴻產(chǎn)炭化樹脂作為吸附劑載體，根據(jù)專利CN100348268C中的DNA免疫吸附劑的制備方法，制備出的本專利對照樣的DNA免疫吸附劑。

所用DNA免疫吸附劑樣品及對照樣如下表1所示：

表1

性能檢測結(jié)果如下表2所示：

表2

根據(jù)表2的數(shù)據(jù)，從靜態(tài)的吸附性能結(jié)果來看，發(fā)現(xiàn)含交聯(lián)PVA膜的DNA免疫吸附劑對SLE病人血漿中的抗雙鏈DNA抗體的吸附性能，在總體上要優(yōu)于采用火棉膠包膜制備成的DNA免疫吸附劑。