1.一種檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，其特征在于：所述試劑盒由包被有3A9單克隆抗體的多孔板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體4C12。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，其特征在于：所述多孔板每孔包被3A9單克隆抗體濃度為2.0-200.0μg/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括顯色底物3'.3'.5，5'-四甲基聯(lián)苯胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，其特征在于：所述多孔板每孔包被3A9單克隆抗體的用量為100μL，濃度為10.0μg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，其特征在于：所述辣根過氧化物酶標(biāo)記單克隆抗體4C12的制備方法的步驟為,
1）按常規(guī)方法制備小鼠腹水單克隆抗體4C12，用正辛酸一飽和硫酸銨法提純小鼠腹水單克隆抗體4C12，以BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測得單克隆抗體4C12的濃度為 4.34mg/mL，單克隆抗體4C12放置于-20℃環(huán)境下 保存?zhèn)溆茫?/p>
2)稱取5mg辣根過氧化物酶溶解于1ml蒸餾水中；
3)將步驟2）獲得的溶液加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，冰浴下避光攪拌15分鐘；
4)將步驟3）獲得的溶液裝入透析袋中，用1mM pH4.4的醋酸鈉緩沖液透析，4小時換液一次，期間換液3-5次；
5)在步驟4）獲得的溶液中加入20μl 0.2M pH9.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化HRP的pH升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg IgG，冰浴避光攪拌2小時；
6)將步驟5）獲得的溶液加入0.1ml 濃度為4mg/ml NaBH4液，混勻，再在4℃環(huán)境下放置2小時；
7)將步驟6）獲得的溶液裝入透析袋中，用0.15M pH7.4 PBS透析，4小時換液一次，期間換液3-5次；
8)將步驟7）獲得的溶液在冰浴攪拌下逐滴緩慢加入等體積飽和硫酸銨，置于4℃環(huán)境下 2小時；
9)將步驟8）獲得的溶液放入離心管內(nèi)，用離心機(jī)3000rpm離心30min，棄去上清，沉淀用半飽和硫酸銨洗1-2次，最后沉淀物溶于0.15M pH7.4的PBS中；
10)將步驟9）得到的溶液裝入透析袋中，用0.15M pH7.4的PBS緩沖鹽水透析，祛除銨離子后，12000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，即酶標(biāo)4C12，酶標(biāo)4C12分裝后冰凍保存。
6.一種檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒的制備方法，其特征在于，其制備步驟如下：
（1）制備包被有3A9單克隆抗體的多孔板
用碳酸鹽緩沖液制成的包被液將3A9單克隆抗體稀釋為濃度10.0μg/mL的稀釋液，所述包被液由Na2CO3 1.59 g、NaHCO3 2.93 g，加雙蒸水定容至1000 mL制成，其在4 ℃條件下保存，然后將所述3A9單克隆抗體稀釋液加入多孔板的各孔內(nèi)，置于4℃環(huán)境下包被12小時-24小時，包被時間屆滿后，將質(zhì)量濃度5%的脫脂奶粉溶液加入多孔板的各孔內(nèi)，并在37℃進(jìn)行封閉反應(yīng)，封閉反應(yīng)時間至少1小時-1.5小時，封閉反應(yīng)結(jié)束后，用洗滌緩沖液洗滌多孔板，當(dāng)多孔板上的未反應(yīng)物被去除后即獲得包被有3A9單克隆抗體的多孔板，其保存溫度為4℃；
（2）制備辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體4C12
按常規(guī)方法：用雜交瘤細(xì)胞制備小鼠腹水單克隆抗體4C12，用正辛酸一飽和硫酸銨法提純，以BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測得單克隆抗體4C12的濃度為 4.34mg/mL，單克隆抗體至-20℃ 保存?zhèn)溆茫?/p>
（3）按常規(guī)方法配備顯色底物3'.3'.5，5'-四甲基聯(lián)苯胺；
（4）配備洗滌緩沖液，洗滌緩沖液由以下成分組成：NaCl 8.0 g，KH2PO4 0.2 g， KCl 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 3.58 g，Tween-20 0.5 mL，加雙蒸水定容至1000 mL即制成洗滌緩沖液；
（5）按常規(guī)方法將洗滌緩沖液分裝到20ML消毒過的玻璃瓶，辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體4C12和顯色底物分別分裝到環(huán)氧樹脂小試管管內(nèi)，然后與制備包被有3A9單克隆抗體的多孔板一起組合成試劑盒；
所述辣根過氧化物酶標(biāo)記4C12步驟如下：
步驟1）稱取5mg辣根過氧化物酶溶解于1ml蒸餾水中；
步驟2）于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaIO4溶液，冰浴下避光攪拌15分鐘；
步驟3）將上述溶液裝入透析袋中，用1mM pH4.4的醋酸鈉緩沖液透析，4小時換液一次， 期間換液3-5次；
步驟4）加20μl 0.2M pH9.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化辣根過氧化物酶的pH值升高到9.0～9.5，然后立即加入10mg IgG，冰浴避光攪拌2小時；
步驟5）加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混勻，再置4℃2小時；
步驟6）將上述液裝入透析袋中，用0.15M pH7.4 PBS透析，4小時換液一次， 期間換液3-5次；
步驟7）在冰浴攪拌下逐滴緩慢加入等體積飽和硫酸銨，置于4℃ 環(huán)境下2小時；
步驟8）將步驟7）獲得的溶液置于4℃ 環(huán)境下2小時的溶液置于離心管內(nèi)用離心機(jī)在3000rpm條件下離心30min，棄去上清，沉淀用半飽和硫酸銨洗1-2次，將沉淀物溶于0.15M pH7.4的PBS中；
步驟9）將步驟8）得到的溶液裝入透析袋中，用0.15M pH7.4的PBS緩沖鹽水透析，去除銨離子后，12000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，即酶標(biāo)4C12，使用時，用磷酸鹽緩沖液作1：1600倍稀釋。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種檢測無乳鏈球菌的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒的制備方法，其特征在于：所述制備包被有3A9單克隆抗體的多孔板時，所述3A9單克隆抗體稀釋液的加入量為100μL/孔，所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體4C12稀釋液的加入量為100μL/孔，所述質(zhì)量濃度5%的脫脂奶粉溶液的加入量為100μL/孔。