本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域，涉及一種艾滋病毒1/2型(HIV1/2)抗體、梅毒螺旋體抗體、丙型肝炎抗體和乙型肝炎表面抗原的四合一聯(lián)合檢測試紙盒及制備工藝。
背景技術(shù)：
：1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay，酶聯(lián)免疫吸附劑測定)用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法，其基本原理是：1、使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；2、使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，把受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。酶聯(lián)免疫吸附劑測定的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。在建立某一酶聯(lián)免疫吸附劑測定中，應(yīng)對包被抗原或抗體的濃度和酶標(biāo)抗原或抗體的濃度予以選擇，以達(dá)到最合適的測定條件和節(jié)省測定費(fèi)用。要使酶聯(lián)免疫吸附劑測定得到準(zhǔn)確的結(jié)果，不論是定性的還是定量的，必須嚴(yán)格按照規(guī)定的方法制備試劑和實(shí)施測定，其他一般性試劑，如包被緩沖液、洗滌液、標(biāo)本稀釋液、結(jié)合物稀釋液、底物工作液和酶反應(yīng)終止液等，配制時(shí)也不可掉以輕心。緩沖液可于冰箱中短期保存，使用前應(yīng)觀察是否變質(zhì)，蒸餾水的質(zhì)量在酶聯(lián)免疫吸附劑測定中也至關(guān)重要，最好使用新鮮重蒸餾的。上述測定過程反應(yīng)時(shí)間較長，反應(yīng)條件比較局限，操作繁瑣，需要儀器輔助測量，價(jià)格昂貴，一次測試只能完成一種抗原或抗體的檢測。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種檢測簡單、低成本，可一次聯(lián)合檢測艾滋病毒1/2型抗體、梅毒抗體、丙肝等抗體和乙肝表面抗原的四合一聯(lián)合檢測試紙盒及制備工藝。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的一種四合一聯(lián)合檢測試紙盒，包括檢測板、樣本稀釋液和一次性塑料吸管三個(gè)部分，所述檢測板包括塑料模具和位于塑料模具內(nèi)的試紙條，所述試紙條包括吸收墊、包被膜、標(biāo)記墊、樣品墊，其特征在于，所述包被膜為硝酸纖維素膜，自上而下依次設(shè)有質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)，所述質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)上分別設(shè)有質(zhì)控線和檢測線，所述檢測線由自上而下依次排列的艾滋病毒1/2型抗體檢測線、乙型肝炎表面抗原檢測線、丙型肝炎抗體檢測線、梅毒螺旋體抗體檢測線組成。優(yōu)選地，所述試紙條長度為60mm以上，寬度為3mm以上，所述艾滋病毒1/2型抗體檢測線、乙型肝炎表面抗原檢測線、丙型肝炎抗體檢測線、梅毒螺旋體抗體檢測線距離試紙條底邊的距離分別為35.5mm、32.5mm、29.5mm、26.5mm。所述的四合一聯(lián)合檢測試紙盒的制備工藝包括以下步驟：(1)將硝酸纖維素膜粘在塑料大卡上面，然后用蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑將檢測用抗體/抗原配進(jìn)行標(biāo)記，配制成溶液，并通過機(jī)器將溶液均勻的噴在粘好的硝酸纖維素膜上，烘干后，得到處理好的含有質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)的片材備用；(2)將抗體/抗原和膠體金/乳膠顆粒聯(lián)結(jié)在一起，并配制成溶液，通過機(jī)器將溶液處理到載體上，最后烘干，得到處理好的標(biāo)記墊備用；(3)用樣品墊處理溶液處理玻璃纖維，烘干后，得到處理好的樣品墊備用；(4)配置樣本稀釋液；(5)將上述處理好的片材、標(biāo)記墊、樣品墊組裝在一起，并加上濾紙，最后用切割機(jī)將其切割成所需寬度的單人份試紙條，用塑料模具包裝成檢測板，放入樣本稀釋液和一次性塑料吸管，封口，待檢，待檢品抽檢其靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等合格后入庫。所述標(biāo)記墊的制備方法為：(1)丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物制備：將氯金酸用純水稀釋至0.01％～0.04％，采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30～60nm之間膠體金溶液，加入丙型肝炎重組抗原后使用攪拌機(jī)攪拌均勻，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物；(2)梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物制備：將乳膠顆粒用純水稀釋至1％，加入梅毒螺旋體重組抗原和蛋白偶聯(lián)劑后，室溫下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)8h～23h，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)乳膠濃縮系統(tǒng)制備成乳膠顆粒重懸液即得到梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物；(3)艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物制備：將乳膠顆粒用純水稀釋至1％，分別加入HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重組抗原和蛋白偶聯(lián)劑后，分別室溫下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)8h～24h，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)乳膠濃縮系統(tǒng)制備成乳膠顆粒重懸液即得到HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物；(4)鼠IgG-膠體金溶液制備：將氯金酸用純水稀釋至0.01％～0.04％，采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30～60nm之間膠體金溶液，加入鼠IgG后使用攪拌機(jī)攪拌均勻，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到鼠IgG-膠體金溶液；(5)抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物制備：將氯金酸用純水稀釋至0.01％～0.04％，采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30～60nm之間膠體金溶液，加入抗乙肝表面抗原抗體后使用攪拌機(jī)攪拌均勻，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物；(6)將上述膠體金結(jié)合物或乳膠結(jié)合物包被：將梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.025～0.3mg/ml、HIV-1型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.1～0.5mg/ml、HIV-2型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.05～0.3mg/ml、鼠IgG-膠體金溶液用Tris緩沖液稀釋成0.01～1.0mg/ml，并加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一和蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑二，包被到聚酯膜上，于37℃環(huán)境下恒溫干燥2h～24h；將丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物、抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物加入蛋白穩(wěn)定劑一和蛋白穩(wěn)定劑二，并用羊血清釋成分別稀釋成0.1～0.35mg/ml、0.05～0.3mg/ml，包被到聚酯膜上，37℃恒溫干燥2h～24h；所述Tris緩沖液稀釋液是含有三羥甲基氨基甲烷6g/L、酪蛋白鈉鹽5g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、防腐劑0.2-0.4g/L的純化水溶液。所述檢測線的制備方法為：將HIV-1型重組抗原、HIV-2型重組抗原分別加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一，用磷酸緩沖液一分別稀釋成0.1～2.0mg/ml、0.05～1.0mg/ml；將抗乙肝表面抗原抗體加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一，用磷酸緩沖液二稀釋成0.5～3.0mg/ml；將丙型肝炎重組抗原加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑二，用磷酸緩沖液二稀釋成0.1～2.0mg/ml；將梅毒螺旋體重組抗原加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一，用磷酸緩沖液二稀釋成0.1～1.0mg/ml，然后用點(diǎn)膜劃膜設(shè)備機(jī)依次包被于硝酸纖維素膜的檢測區(qū)的艾滋病毒1/2型抗體檢測線、乙型肝炎表面抗原檢測線、丙型肝炎抗體檢測線、梅毒螺旋體抗體檢測線上，將包被以上原料的硝酸纖維素膜在45℃環(huán)境下恒溫干燥2h～24h。優(yōu)選地，所述磷酸緩沖液一含有氯化鈉8.775gl/L、磷酸氫二鈉2.13g/L、聚乙二醇2.5g/L、聚乙烯吡咯烷酮3g/L。所述質(zhì)控線的制備方法為：取羊抗鼠IgG加入蛋白穩(wěn)定劑一，并用磷酸緩沖液二稀釋成0.1-3.0mg/ml，然后用點(diǎn)膜劃膜設(shè)備機(jī)包被于硝酸纖維素膜的質(zhì)控區(qū)的質(zhì)控線上，將包被羊抗鼠IgG后的硝酸纖維素膜在45℃環(huán)境下恒溫干燥2h～24h。優(yōu)選地，所述磷酸緩沖液二含有氯化鈉8.775g/L、磷酸氫二鈉2.13g/L。所述樣品墊的制備方法為：取48.5ml±2ml含0.2g/L～20g/L表面活性劑的樣品墊處理溶液噴灑在玻璃纖維材料上，然后將其放置于37℃環(huán)境下恒溫干燥8h～24h，備用。所述樣品墊處理液是添加抗-RBC和碳酸鈉的母液，其母液是含有三羥甲基氨基甲烷、酪蛋白鈉鹽、聚乙烯吡咯烷酮、防腐劑Proclin-300的純化水溶液。所述樣本稀釋液是含有氯化鈉、磷酸氫二鈉、酪蛋白鈉鹽、防腐劑Proclin300的的純化水溶液。本發(fā)明的有益效果在于：1、通過對本發(fā)明的四合一檢測試紙進(jìn)行產(chǎn)品檢驗(yàn)(檢驗(yàn)國家參考品或標(biāo)化的企業(yè)參考品)，本發(fā)明試紙盒可在一根試紙條上一次能完成四項(xiàng)傳染病(艾滋病毒1/2型抗體，梅毒螺旋體抗體，丙型肝炎抗體和乙型肝炎表面抗原)的同時(shí)檢測，靈敏度和特異性都符合要求。2、與單項(xiàng)檢測相比，將四項(xiàng)傳染病檢測統(tǒng)一于一個(gè)試紙條上，節(jié)約玻纖、NC膜和濾紙等材料，樣本需求量少。附圖說明下面結(jié)合附圖和實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。圖1為四合一聯(lián)合檢測試紙盒的各部件結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為檢測板的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。圖4為試紙條的側(cè)視示意圖。圖5為四合一聯(lián)合檢測試紙盒的制備工藝流程圖。圖6為四合一聯(lián)合檢測試紙盒的加樣及檢測結(jié)果示意圖。具體實(shí)施方式(一)四合一聯(lián)合檢測試紙盒的結(jié)構(gòu)如圖1-4所示，四合一聯(lián)合檢測試紙盒，包括檢測板1、樣本稀釋液2和一次性塑料吸管3三個(gè)部分，所述檢測板1包括塑料模具4和位于塑料模具4內(nèi)的試紙條5。如圖3-4所示，所述試紙條5包括吸收墊6、包被膜7、標(biāo)記墊8、樣品墊9，所述包被膜為硝酸纖維素膜，自上而下依次設(shè)有質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)，所述質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)上分別設(shè)有質(zhì)控線C和檢測線T，所述檢測線由自上而下依次排列有T1、T2、T3、T4四條檢測線。所述試紙條長度為60mm以上，寬度為3mm以上。(二)四合一聯(lián)合檢測試紙盒的制備工藝流程四合一聯(lián)合檢測試紙盒的制備工藝流程包括以下步驟：(1)將硝酸纖維素膜粘在塑料大卡上面，然后用蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑將檢測用抗體/抗原配進(jìn)行標(biāo)記，配制成溶液，并通過機(jī)器將溶液均勻的噴在粘好的硝酸纖維素膜上，烘干后，得到處理好的含有質(zhì)控區(qū)和檢測區(qū)的片材備用；(2)將抗體/抗原和膠體金/乳膠顆粒聯(lián)結(jié)在一起，并配制成溶液，通過機(jī)器將溶液處理到載體上，最后烘干，得到處理好的標(biāo)記墊備用；(3)用樣品墊處理溶液處理玻璃纖維，烘干后，得到處理好的樣品墊備用；(4)配置樣本稀釋液；(5)將上述處理好的片材、標(biāo)記墊、樣品墊組裝在一起，并加上濾紙，最后用切割機(jī)將其切割成所需寬度的單人份試紙條，用塑料模具包裝成檢測板，放入樣本稀釋液和一次性塑料吸管，封口，待檢，待檢品抽檢其靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等合格后入庫。工藝流程如圖5所示，其中灰色標(biāo)記的流程為質(zhì)量關(guān)鍵控制點(diǎn)。1、標(biāo)記墊制備方法標(biāo)記墊各組分如下表所示：標(biāo)記墊制備方法如下：1)丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物制備：將氯金酸膠體金顆粒用純水稀釋至0.01％～0.04％，采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30～60nm之間膠體金溶液，加入丙型肝炎重組抗原后使用攪拌機(jī)攪拌均勻，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物；2)梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物制備：將乳膠顆粒用純水稀釋至1％，加入梅毒螺旋體重組抗原和蛋白偶聯(lián)劑后，室溫下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)8h～23h，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)乳膠濃縮系統(tǒng)制備成乳膠顆粒重懸液即得到梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物；3)艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物制備：將乳膠顆粒用純水稀釋至1％，分別加入HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重組抗原和蛋白偶聯(lián)劑后，分別室溫下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)8h～24h，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)乳膠濃縮系統(tǒng)制備成乳膠顆粒重懸液即得到HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物；4)鼠IgG-膠體金溶液制備：將氯金酸膠體金顆粒用純水稀釋至0.01％～0.04％，采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30～60nm之間膠體金溶液，加入鼠IgG后使用攪拌機(jī)攪拌均勻，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到鼠IgG-膠體金溶液；5)抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物制備：將氯金酸膠體金顆粒用純水稀釋至0.01％～0.04％，采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30～60nm之間膠體金溶液，加入抗乙肝表面抗原抗體后使用攪拌機(jī)攪拌均勻，經(jīng)離心機(jī)離心，取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物；6)將上述膠體金結(jié)合物或乳膠結(jié)合物包被：將梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.025～0.3mg/ml、HIV-1型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.1～0.5mg/ml、HIV-2型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.05～0.3mg/ml、鼠IgG-膠體金溶液用Tris緩沖液稀釋成0.01～1.0mg/ml，并加入200g/L的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑蔗糖和50g/L的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑海藻糖，包被到聚酯膜上，于37℃環(huán)境下恒溫干燥2h～24h；將丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物、抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物加入200g/L的蛋白穩(wěn)定劑蔗糖和50g/L的蛋白穩(wěn)定劑海藻糖，并用羊血清釋成分別稀釋成0.1～0.35mg/ml、0.05～0.3mg/ml，包被到聚酯膜上，37℃恒溫干燥2h～24h；所述Tris緩沖液稀釋液是含有三羥甲基氨基甲烷6g/L、酪蛋白鈉鹽5g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、防腐劑0.2-0.4g/L的純化水溶液。2、檢測線制備方法各檢測線組分如下：1)HIV抗體檢測線組分含量：2)乙型肝炎表面抗原檢測線組分含量3)丙型肝炎病毒抗體檢測線組分含量4)梅毒螺旋體抗體檢測線組分含量檢測線的制備方法如下：將HIV-1型重組抗原、HIV-2型重組抗原分別加入10g/L的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑蔗糖，用磷酸緩沖液一分別稀釋成0.1～2.0mg/ml、0.05～1.0mg/ml；將抗乙肝表面抗原抗體加入10g/L的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑蔗糖，用磷酸緩沖液二稀釋成0.5～3.0mg/ml；將丙型肝炎重組抗原加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑30g/L的海藻糖，用磷酸緩沖液二稀釋成0.1～2.0mg/ml；將梅毒螺旋體重組抗原加入10g/L的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑蔗糖，用磷酸緩沖液二稀釋成0.1～1.0mg/ml，然后用點(diǎn)膜劃膜設(shè)備機(jī)按噴量0.8ul/cm依次包被于硝酸纖維素膜的檢測區(qū)的艾滋病毒1/2型抗體檢測線、乙型肝炎表面抗原檢測線、丙型肝炎抗體檢測線、梅毒螺旋體抗體檢測線上，將包被以上原料的硝酸纖維素膜在45℃環(huán)境下恒溫干燥2h～24h。上述磷酸緩沖液一含有氯化鈉8.775gl/L、磷酸氫二鈉2.13g/L、聚乙二醇2.5g/L、聚乙烯吡咯烷酮3g/L。上述磷酸緩沖液二含有氯化鈉8.775g/L、磷酸氫二鈉2.13g/L。3、質(zhì)控線的制備方法質(zhì)控線組分含量：質(zhì)控線制備方法：取羊抗鼠IgG加入10g/L的蛋白穩(wěn)定劑蔗糖，并用磷酸緩沖液二稀釋成0.1-3.0mg/ml，然后用點(diǎn)膜劃膜設(shè)備機(jī)按噴量0.8ul/cm包被于硝酸纖維素膜的質(zhì)控區(qū)的質(zhì)控線上，將包被羊抗鼠IgG后的硝酸纖維素膜在45℃環(huán)境下恒溫干燥2h～24h。上述磷酸緩沖液二含有氯化鈉8.775g/L、磷酸氫二鈉2.13g/L。4、樣品墊的制備方法樣品墊各組分含量：樣品墊制備方法：取48.5ml±2ml含0.2g/L～20g/L表面活性劑的樣品墊處理溶液噴灑在玻璃纖維材料上，然后將其放置于37℃環(huán)境下恒溫干燥8h～24h，備用。樣品墊處理液是添加1％～10％抗-RBC和1.1g/L碳酸鈉的母液，其母液是含有6g/L三羥甲基氨基甲烷、5g/L酪蛋白鈉鹽、10gL聚乙烯吡咯烷酮、0.2g/L～0.4g/L防腐劑Proclin-300的純化水溶液。5、樣本稀釋液組分：原料名稱使用濃度純化水溶劑氯化鈉8.775g/L磷酸氫二鈉7.1g/L酪蛋白鈉鹽5g/L防腐劑Proclin3000.2g/L～0.4g/L樣本稀釋液是含有氯化鈉8.775g/L、磷酸氫二鈉7.1g/L、酪蛋白鈉鹽5g/L、防腐劑Proclin3000.2g/L～0.4g/L的純化水溶液。6、檢驗(yàn)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)(檢驗(yàn)國家參考品或標(biāo)化的企業(yè)參考品)：三、具體實(shí)施例具體實(shí)施例1：1、制備過程：按上述制備工藝流程制備四合一聯(lián)合檢測試紙盒，試紙條長度為60mm，寬度為3mm，質(zhì)控線和檢測線距底邊的距離為C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm，各組分如下：(1)標(biāo)記墊各組分主要原料如下：(2)檢測線各組分主要原料如下：1)HIV抗體檢測線組分含量：2)乙型肝炎表面抗原檢測線組分含量3)丙型肝炎病毒抗體檢測線組分含量4)梅毒螺旋體抗體檢測線組分含量(3)質(zhì)控線各組分主要原料如下：(4)樣品墊各組分主要原料如下：(5)樣本稀釋液組分：2、加樣：2滴血清/血漿(約80ul)+1滴樣本稀釋液(約40ul)；3滴全血(約120ul)+1滴樣本稀釋液，加樣及檢測結(jié)果示意圖如圖6所示。分別對下述檢測線組合的試紙盒進(jìn)行靈敏度和特異性檢測。表1檢測線位置關(guān)系組合試驗(yàn)組合T1T2T3T4①HCVHBsAgHIVSYP②HBsAgHIVSYPHCV③HIVSYPHCVHBsAg④SYPHCVHBsAgHIV⑤HIVHBsAgSYPHCV⑥HIVHBsAgHCVSYP組合①的檢測結(jié)果如下：組合②的檢測結(jié)果如下：組合③的檢測結(jié)果如下：組合④的檢測結(jié)果如下：組合⑤的檢測結(jié)果如下：組合⑥的檢測結(jié)果如下：以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果的匯總數(shù)據(jù)如下：組合T1T2T3T4狀態(tài)①HCVHBsAgHIVSYP易出假陽②HBsAgHIVSYPHCV易出假陽③HIVSYPHCVHBsAg易出假陽④SYPHCVHBsAgHIV易出假陽⑤HIVHBsAgSYPHCV少量假陽⑥HIVHBsAgHCVSYP最佳從上表匯總數(shù)據(jù)看出，第⑥種組合為最佳組合，靈敏度和特異性都符合要求，因此，檢測線的最佳組合為T1：艾滋病毒1/2型抗體檢測線(HIV)、T2乙型肝炎表面抗原檢測線(HBsAg)、T3丙型肝炎抗體檢測線(HCV)、T4梅毒螺旋體抗體檢測線(SYP)。質(zhì)控線和檢測線距底邊的距離為C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm；該間距與模板窗口大小相關(guān)，對靈敏度影響不大，但間距過小，點(diǎn)膜的挑戰(zhàn)性增加，產(chǎn)品設(shè)計(jì)也不美觀。對組合⑥的四合一檢測試紙進(jìn)行產(chǎn)品檢驗(yàn)(檢驗(yàn)國家參考品或標(biāo)化的企業(yè)參考品)，結(jié)果如下：具體實(shí)施例2：1、制備過程：按上述制備工藝流程制備四合一聯(lián)合檢測試紙盒，檢測線組合為T1：艾滋病毒1/2型抗體檢測線(HIV)、T2乙型肝炎表面抗原檢測線(HBsAg)、T3丙型肝炎抗體檢測線(HCV)、T4梅毒螺旋體抗體檢測線(SYP)，試紙條長度為65mm，寬度為5mm，質(zhì)控線和檢測線距底邊的距離為C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm，各組分如下：(1)標(biāo)記墊各組分主要原料如下：(2)檢測線各組分主要原料如下：1)HIV抗體檢測線組分含量：2)乙型肝炎表面抗原檢測線組分含量3)丙型肝炎病毒抗體檢測線組分含量4)梅毒螺旋體抗體檢測線組分含量(3)質(zhì)控線各組分主要原料如下：(4)樣品墊各組分主要原料如下：(5)樣本稀釋液組分：原料名稱使用濃度純化水溶劑氯化鈉8.775g/L磷酸氫二鈉7.1g/L酪蛋白鈉鹽5g/L防腐劑Proclin3000.2g/L2、加樣：2滴血清/血漿(約80ul)+1滴樣本稀釋液(約40ul)；3滴全血(約120ul)+1滴樣本稀釋液，加樣及檢測結(jié)果示意圖如圖6所示。靈敏度和特異性檢測結(jié)果如下：產(chǎn)品檢驗(yàn)(檢驗(yàn)國家參考品或標(biāo)化的企業(yè)參考品)，結(jié)果如下：具體實(shí)施例3：1、制備過程：按上述制備工藝流程制備四合一聯(lián)合檢測試紙盒，檢測線組合為T1：艾滋病毒1/2型抗體檢測線(HIV)、T2乙型肝炎表面抗原檢測線(HBsAg)、T3丙型肝炎抗體檢測線(HCV)、T4梅毒螺旋體抗體檢測線(SYP)，試紙條長度為68mm，寬度為6mm，質(zhì)控線和檢測線距底邊的距離為C/T1/T2/T3/T4：38.5mm/35.5mm/32.5mm/29.5mm/26.5mm，各組分如下：(1)標(biāo)記墊各組分主要原料如下：(2)檢測線各組分主要原料如下：1)HIV抗體檢測線組分含量：2)乙型肝炎表面抗原檢測線組分含量3)丙型肝炎病毒抗體檢測線組分含量4)梅毒螺旋體抗體檢測線組分含量(3)質(zhì)控線各組分主要原料如下：(4)樣品墊各組分主要原料如下：(5)樣本稀釋液組分：原料名稱使用濃度純化水溶劑氯化鈉8.775g/L磷酸氫二鈉7.1g/L酪蛋白鈉鹽5g/L防腐劑Proclin3000.4g/L2、加樣：2滴血清/血漿(約80ul)+1滴樣本稀釋液(約40ul)；3滴全血(約120ul)+1滴樣本稀釋液，加樣及檢測結(jié)果示意圖如圖6所示。靈敏度和特異性檢測結(jié)果如下：項(xiàng)目全血樣本1#全血樣本2#全血樣本3#全血樣本4#全血樣本5#T1(HIV)陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰T2(HBsAg)陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰T3(HCV)陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰T4(SYP)陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰陰性，清晰產(chǎn)品檢驗(yàn)(檢驗(yàn)國家參考品或標(biāo)化的企業(yè)參考品)，結(jié)果如下：上述說明是示例性的而非限制性的。通過上述說明本領(lǐng)域技術(shù)人員可以意識到本發(fā)明的許多種改變和變形，其也將落在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3