1.一種四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒,包括檢測(cè)板、樣本稀釋液和一次性塑料吸管三個(gè)部分,所述檢測(cè)板包括塑料模具和位于塑料模具內(nèi)的試紙條,所述試紙條包括吸收墊、包被膜、標(biāo)記墊、樣品墊,其特征在于,所述包被膜為硝酸纖維素膜,自上而下依次設(shè)有質(zhì)控區(qū)和檢測(cè)區(qū),所述質(zhì)控區(qū)和檢測(cè)區(qū)上分別設(shè)有質(zhì)控線和檢測(cè)線,所述檢測(cè)線由自上而下依次排列的艾滋病毒1/2型抗體檢測(cè)線、乙型肝炎表面抗原檢測(cè)線、丙型肝炎抗體檢測(cè)線、梅毒螺旋體抗體檢測(cè)線組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒,其特征在于,所述試紙條長度為60mm以上,寬度為3mm以上,所述艾滋病毒1/2型抗體檢測(cè)線、乙型肝炎表面抗原檢測(cè)線、丙型肝炎抗體檢測(cè)線、梅毒螺旋體抗體檢測(cè)線距離試紙條底邊的距離分別為35.5mm、32.5mm、29.5mm、26.5mm。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒的制備工藝,其特征在于,制備工藝流程包括以下步驟:
(1)將硝酸纖維素膜粘在塑料大卡上面,然后用蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑將檢測(cè)用抗體/抗原配進(jìn)行標(biāo)記,配制成溶液,并通過機(jī)器將溶液均勻的噴在粘好的硝酸纖維素膜上,烘干后,得到處理好的含有質(zhì)控區(qū)和檢測(cè)區(qū)的片材備用;
(2)將抗體/抗原和膠體金/乳膠顆粒聯(lián)結(jié)在一起,并配制成溶液,通過機(jī)器將溶液處理到載體上,最后烘干,得到處理好的標(biāo)記墊備用;
(3)用樣品墊處理溶液處理玻璃纖維,烘干后,得到處理好的樣品墊備用;
(4)配置樣本稀釋液;
(5)將上述處理好的片材、標(biāo)記墊、樣品墊組裝在一起,并加上濾紙,最后用切割機(jī)將其切割成所需寬度的單人份試紙條,用塑料模具包裝成檢測(cè)板,放入樣本稀釋液和一次性塑料吸管,封口,待檢,待檢品抽檢其靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等合格后入庫。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒的制備工藝,其特征在于,所述標(biāo)記墊的制備方法為:
(1)丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物制備:
將氯金酸用純水稀釋至0.01%~0.04%,采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30~60nm之間膠體金溶液,加入丙型肝炎重組抗原后使用攪拌機(jī)攪拌均勻,經(jīng)離心機(jī)離心,取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物;
(2)梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物制備:
將乳膠顆粒用純水稀釋至1%,加入梅毒螺旋體重組抗原和蛋白偶聯(lián)劑后,室溫下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)8h~23h,經(jīng)離心機(jī)離心,取沉淀物經(jīng)乳膠濃縮系統(tǒng)制備成乳膠顆粒重懸液即得到梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物;
(3)艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物制備:
將乳膠顆粒用純水稀釋至1%,分別加入HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重組抗原和蛋白偶聯(lián)劑后,分別室溫下旋轉(zhuǎn)混合反應(yīng)8h~24h,經(jīng)離心機(jī)離心,取沉淀物經(jīng)乳膠濃縮系統(tǒng)制備成乳膠顆粒重懸液即得到HIV-1型和HIV-2型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物;
(4)鼠IgG-膠體金溶液制備:
將氯金酸用純水稀釋至0.01%~0.04%,采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30~60nm之間膠體金溶液,加入鼠IgG后使用攪拌機(jī)攪拌均勻,經(jīng)離心機(jī)離心,取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到鼠IgG-膠體金溶液;
(5)抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物制備:
將氯金酸用純水稀釋至0.01%~0.04%,采用還原法制備成帶負(fù)電的紫紅色疏水的、金顆粒大小在30~60nm之間膠體金溶液,加入抗乙肝表面抗原抗體后使用攪拌機(jī)攪拌均勻,經(jīng)離心機(jī)離心,取沉淀物經(jīng)金標(biāo)濃縮系統(tǒng)制備成金標(biāo)濃縮原液即得到抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物;
(6)將上述膠體金結(jié)合物或乳膠結(jié)合物包被:
將梅毒螺旋體重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.025~0.3mg/ml、HIV-1型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.1~0.5mg/ml、HIV-2型艾滋病毒重組抗原-乳膠結(jié)合物用Tris緩沖液稀釋成0.05~0.3mg/ml、鼠IgG-膠體金溶液用Tris緩沖液稀釋成0.01~1.0mg/ml,并加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一和蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑二,包被到聚酯膜上,于37℃環(huán)境下恒溫干燥2h~24h;
將丙型肝炎重組抗原-膠體金結(jié)合物、抗乙肝表面抗原抗體-膠體金結(jié)合物加入蛋白穩(wěn)定劑一和蛋白穩(wěn)定劑二,并用羊血清釋成分別稀釋成0.1~0.35mg/ml、0.05~0.3mg/ml,包被到聚酯膜上,37℃恒溫干燥2h~24h;
所述Tris緩沖液稀釋液是含有三羥甲基氨基甲烷6g/L、酪蛋白鈉鹽5g/L、聚乙烯吡咯烷酮10g/L、防腐劑0.2-0.4g/L的純化水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒的制備工藝,其特征在于,所述檢測(cè)線的制備方法為:
將HIV-1型重組抗原、HIV-2型重組抗原分別加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一,用磷酸緩沖液一分別稀釋成0.1~2.0mg/ml、0.05~1.0mg/ml;將抗乙肝表面抗原抗體加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一,用磷酸緩沖液二稀釋成0.5~3.0mg/ml;將丙型肝炎重組抗原加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑二,用磷酸緩沖液二稀釋成0.1~2.0mg/ml;將梅毒螺旋體重組抗原加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑一,用磷酸緩沖液二稀釋成0.1~1.0mg/ml,然后用點(diǎn)膜劃膜設(shè)備機(jī)依次包被于硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)的艾滋病毒1/2型抗體檢測(cè)線、乙型肝炎表面抗原檢測(cè)線、丙型肝炎抗體檢測(cè)線、梅毒螺旋體抗體檢測(cè)線上,將包被以上原料的硝酸纖維素膜在45℃環(huán)境下恒溫干燥2h~24h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒的制備工藝,其特征在于,所述磷酸緩沖液一含有氯化鈉8.775g/L、磷酸氫二鈉2.13g/L、聚乙二醇2.5g/L、聚乙烯吡咯烷酮3g/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒的制備工藝,其特征在于,所述質(zhì)控線的制備方法為:
取羊抗鼠IgG加入蛋白穩(wěn)定劑一,并用磷酸緩沖液二稀釋成0.1-3.0mg/ml,然后用點(diǎn)膜劃膜設(shè)備機(jī)包被于硝酸纖維素膜的質(zhì)控區(qū)的質(zhì)控線上,將包被羊抗鼠IgG后的硝酸纖維素膜在45℃環(huán)境下恒溫干燥2h~24h。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或7所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒的制備工藝,其特征在于,所述磷酸緩沖液二含有氯化鈉8.775g/L、磷酸氫二鈉2.13g/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒,其特征在于,所述樣品墊的制備方法為:
取48.5ml±2ml含0.2g/L~20g/L表面活性劑的樣品墊處理溶液噴灑在玻璃纖維材料上,然后將其放置于37℃環(huán)境下恒溫干燥8h~24h,備用;
所述樣品墊處理液是添加抗-RBC和碳酸鈉的母液,其母液是含有三羥甲基氨基甲烷、酪蛋白鈉鹽、聚乙烯吡咯烷酮、防腐劑Proclin-300的純化水溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的四合一聯(lián)合檢測(cè)試紙盒,其特征在于,所述樣本稀釋液是含有氯化鈉、磷酸氫二鈉、酪蛋白鈉鹽、防腐劑Proclin300的的純化水溶液。