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      基于移動反應界面電泳滴定的定量酶聯(lián)免疫吸附檢測方法與流程

      文檔序號:12466214閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.一種基于移動反應界面電泳滴定的定量酶聯(lián)免疫吸附檢測方法,其特征在于,通過在相同條件下分別對抗原濃度不同且已知的標準樣品進行ELISA‐MRB‐ET,從而建立移動反應界面的移動距離與抗原濃度的數(shù)學模型,并沿電泳通道標注抗原濃度標尺;在測試階段通過對待測樣品在相同條件下進行ELISA‐MRB‐ET,測得的移動反應界面的停留位置所應的濃度刻度即為樣品中的抗原濃度。

      2.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法,其特征是,所述的ELISA‐MRB‐ET包括:ELISA測定和移動反應界面電泳滴定,其中:MRB‐ET滴定通過滴定ELISA酶催化產物間接實現(xiàn)抗原濃度檢測,ELISA測定通過抗原與固相一抗結合,洗去未結合物質后加入酶標二抗進行孵育,洗去未結合的酶標二抗,形成的抗原抗體復合物,滴加底物后在酶的催化作用下形成帶有顏色的弱堿性/弱酸性的酶催化產物,酶催化產物生成發(fā)光或吸光產物。

      3.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法,其特征是,移動反應界面電泳滴定通過以下方式實現(xiàn):弱堿性/弱酸性的酶催化產物在兩端施加電場的電泳通道內向陽極/陰極移動,與電泳通道內的填充介質中的緩沖溶液相遇并發(fā)生中和反應,發(fā)生明顯的顏色變化。

      4.根據(jù)權利要求1或3所述的檢測方法,其特征是,所述的電泳通道兩端分別設有陰極室和陽極室。

      5.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法,其特征是,所述的填充介質為凝膠支持介質或全液相介質;所述的凝膠支持介質采用:瓊脂糖或聚丙烯酰胺;所述的緩沖溶液為與弱堿性/弱酸性的酶催化產物相對應的弱酸性/弱堿性溶液。

      6.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法,其特征是,所述的移動反應界面進一步包括:移動絡合界面、移動氧化還原界面、移動沉淀界面和移動親和界面。

      7.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法,其特征是,所述的數(shù)學模型具體為:其中:Cantigen為抗原濃度,dMRB為MRB的移動距離,t1為電泳時間,h、k和i均為常數(shù),通過標準樣品濃度與對應的MRB移動距離擬合得到。

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