本發(fā)明涉及食品檢測技術領域，具體是一種葡萄農藥殘留量的檢測方法。

背景技術：

農藥殘留是農藥使用后一個時期內沒有被分解而殘留于生物體、收獲物、土壤、水體、大氣中的微量農藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質的總稱。施用于作物上的農藥，其中一部分附著于作物上，一部分散落在土壤、大氣和水等環(huán)境中，環(huán)境殘存的農藥中的一部分又會被植物吸收。殘留的農藥直接通過植物果實或水、大氣到達人、畜體內，或通過環(huán)境、食物鏈最終傳遞給人、畜。對殘留農藥的徹底清除和檢測有著極為重要的意義。而目前對殘留農藥的清除手段有限，瓜果表面殘留的農藥一般主要通過清潔劑進行清除，但是清除是否徹底仍有待進一步提高。

目前，通常采用先對水果中農藥殘留進行提取，再進一步采用氣相色譜-質譜聯用儀GC-MS進行檢測。然而，在現有技術中對所有的水果，不分品種，都選用單一的乙腈溶劑提取，造成提取率不高的缺點，從而直接導致后續(xù)的氣相色譜-質譜聯用儀GC-MS檢測數據不準確。

技術實現要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種低成本、檢測結果準確的葡萄農藥殘留量的檢測方法。

為實現上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種葡萄農藥殘留量的檢測方法，包括以下步驟：將葡萄連皮研磨成汁液，得葡萄汁，備用；準確稱取10g葡萄汁于100ml離心管中，加入20ml提取液，超聲提取3min，再加入3g氯化鈉，超聲提取8min；將離心管放入離心機，5000r/min，離心2min；取10ml上清液，待凈化；將雞肝酯酶裝柱，得到分離柱，放入固定架上，加樣前先用10ml提取液預洗柱，下接雞心瓶，移入10ml上清液，并用20ml提取液洗滌柱，收集的提取液和洗滌液在40℃水浴中旋轉濃縮至1ml，備用；在Envi-Carb柱中加入2cm高無水硫酸鈉，將該柱連接在Sep-Pak氨丙基柱頂部，將串聯柱下接雞心瓶放在固定架上；加樣前先用4ml提取液和甲苯預洗柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將濃縮液轉移至凈化柱上，再每次用2ml提取液和甲苯三次洗滌樣液瓶，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，并將洗滌液移入柱中；在串聯柱上加上50ml貯液器，用25ml提取液和甲苯洗滌串聯柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，收集所有流出物于雞心瓶中，并在40℃水浴中旋轉濃縮至0.5ml；每次加入5ml正己烷進行溶劑交換兩次，最后使樣液體積為1ml，加入內標，待進樣分析；其中，所述的提取液由以下體積百分比計的組分組成：氧乙烯醚硫酸鈉18～22%、月桂酰二乙醇胺8～10%、正己烷22～28%、乙醇40～52%。

作為本發(fā)明進一步的方案：采用裝有雞肝酯酶同種失活酶的柱作為參比柱。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的分離柱和參比柱均采用的是Envi-18柱。

作為本發(fā)明進一步的方案：所述的提取液由以下體積百分比計的組分組成：氧乙烯醚硫酸鈉18%、月桂酰二乙醇胺8%、正己烷24%、乙醇50%。

作為本發(fā)明進一步的方案：檢測結束后，先用緩沖溶液處理，再用酸堿處理，以實現對使用后的酶柱進行載體回收。

與現有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明針對葡萄的水果品種特定屬性：大量的糖類、礦物質鈣、鉀、磷、鐵以及多種維生素B₁、維生素B₂、維生素B₆、維生素C、維生素P、多種人體所需的氨基酸等，農藥使用量大，不易清洗干凈，選用特定提取液提取，農藥殘留提取效率顯著提高。采用的檢測工具酶成本低廉、易于標準化提取，節(jié)約成本，采用的參比柱為同種失活酶，用于葡萄中農藥的實測，排除了色素干擾，提高檢測精密度，檢測結果的絕對差值不超過算術平均值的5%，陽性結果的符合率達到100%。

具體實施方式

下面將結合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例1

本發(fā)明實施例中，一種葡萄農藥殘留量的檢測方法，包括以下步驟：

（1）將葡萄連皮研磨成汁液，得葡萄汁，備用；

（2）準確稱取10g葡萄汁于100ml離心管中，加入20ml提取液，超聲提取3min，再加入3g氯化鈉，超聲提取8min；其中，所述的提取液由以下體積百分比計的組分組成：氧乙烯醚硫酸鈉18%、月桂酰二乙醇胺8%、正己烷22%、乙醇52%；

（3）將離心管放入離心機，5000r/min，離心2min；

（4）取10ml上清液，待凈化；將雞肝酯酶裝柱，得到分離柱，放入固定架上，加樣前先用10ml提取液預洗柱，下接雞心瓶，移入10ml上清液，并用20ml提取液洗滌柱，收集的提取液和洗滌液在40℃水浴中旋轉濃縮至1ml，備用；采用裝有雞肝酯酶同種失活酶的柱作為參比柱；

（4）在Envi-Carb柱中加入2cm高無水硫酸鈉，將該柱連接在Sep-Pak氨丙基柱頂部，將串聯柱下接雞心瓶放在固定架上；

（5）加樣前先用4ml提取液和甲苯預洗柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將濃縮液轉移至凈化柱上，再每次用2ml提取液和甲苯三次洗滌樣液瓶，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，并將洗滌液移入柱中；

（6）在串聯柱上加上50ml貯液器，用25ml提取液和甲苯洗滌串聯柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，收集所有流出物于雞心瓶中，并在40℃水浴中旋轉濃縮至0.5ml；

（7）每次加入5ml正己烷進行溶劑交換兩次，最后使樣液體積為1ml，加入內標，待進樣分析。

實施例2

本發(fā)明實施例中，一種葡萄農藥殘留量的檢測方法，包括以下步驟：

（1）將葡萄連皮研磨成汁液，得葡萄汁，備用；

（2）準確稱取10g葡萄汁于100ml離心管中，加入20ml提取液，超聲提取3min，再加入3g氯化鈉，超聲提取8min；其中，所述的提取液由以下體積百分比計的組分組成：氧乙烯醚硫酸鈉22%、月桂酰二乙醇胺10%、正己烷28%、乙醇40%；

（3）將離心管放入離心機，5000r/min，離心2min；

（4）取10ml上清液，待凈化；將雞肝酯酶裝柱，得到分離柱，放入固定架上，加樣前先用10ml提取液預洗柱，下接雞心瓶，移入10ml上清液，并用20ml提取液洗滌柱，收集的提取液和洗滌液在40℃水浴中旋轉濃縮至1ml，備用；

（4）在Envi-Carb柱中加入2cm高無水硫酸鈉，將該柱連接在Sep-Pak氨丙基柱頂部，將串聯柱下接雞心瓶放在固定架上；

（5）加樣前先用4ml提取液和甲苯預洗柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將濃縮液轉移至凈化柱上，再每次用2ml提取液和甲苯三次洗滌樣液瓶，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，并將洗滌液移入柱中；

（6）在串聯柱上加上50ml貯液器，用25ml提取液和甲苯洗滌串聯柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，收集所有流出物于雞心瓶中，并在40℃水浴中旋轉濃縮至0.5ml；

（7）每次加入5ml正己烷進行溶劑交換兩次，最后使樣液體積為1ml，加入內標，待進樣分析。

實施例3

本發(fā)明實施例中，一種葡萄農藥殘留量的檢測方法，包括以下步驟：

（1）將葡萄連皮研磨成汁液，得葡萄汁，備用；

（2）準確稱取10g葡萄汁于100ml離心管中，加入20ml提取液，超聲提取3min，再加入3g氯化鈉，超聲提取8min；其中，所述的提取液由以下體積百分比計的組分組成：氧乙烯醚硫酸鈉18%、月桂酰二乙醇胺8%、正己烷24%、乙醇50%；

（3）將離心管放入離心機，5000r/min，離心2min；

（4）取10ml上清液，待凈化；將雞肝酯酶裝柱，得到分離柱，放入固定架上，加樣前先用10ml提取液預洗柱，下接雞心瓶，移入10ml上清液，并用20ml提取液洗滌柱，收集的提取液和洗滌液在40℃水浴中旋轉濃縮至1ml，備用；

（4）在Envi-Carb柱中加入2cm高無水硫酸鈉，將該柱連接在Sep-Pak氨丙基柱頂部，將串聯柱下接雞心瓶放在固定架上；

（5）加樣前先用4ml提取液和甲苯預洗柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，當液面到達硫酸鈉的頂部時，迅速將濃縮液轉移至凈化柱上，再每次用2ml提取液和甲苯三次洗滌樣液瓶，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，并將洗滌液移入柱中；

（6）在串聯柱上加上50ml貯液器，用25ml提取液和甲苯洗滌串聯柱，其中提取液和甲苯的體積比為2：1，收集所有流出物于雞心瓶中，并在40℃水浴中旋轉濃縮至0.5ml；

（7）每次加入5ml正己烷進行溶劑交換兩次，最后使樣液體積為1ml，加入內標，待進樣分析。

上述實施例中，檢測時，氣相色譜/質譜儀器的工作參數如下：

色譜柱：HP-5ms石英毛細管柱（30m*0.25mm，0.25μm）；

柱溫：68℃（2min）～142℃/35℃～284℃/12℃（10min）；

載氣：He，99.999％，（1.0ml/min）；

氣化室溫度：250℃；

分流比：不分流進樣，時間為1min，進樣量為1uL；

質譜條件：EI源，70eV，源溫：200℃，掃描方式：全掃描，掃描范圍41～500質譜標準庫：NIST標準庫。

選用對比農藥：p，p′-DDD、α-六六六、林丹、艾氏劑、狄氏劑、三氯殺螨醇、五氯硝基苯、乙烯菌核利、毒死蜱、二嗪磷、敵敵畏、甲基毒死蜱、對硫磷、丙溴磷、馬拉硫磷、甲拌磷、久效磷、水胺硫磷、三唑磷、甲基異柳磷、殺螟硫磷、亞胺硫磷、聯苯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、抗蚜威、克百威、甲萘威、嘧菌酯、甲草胺、溴螨酯、噻嗪酮、委銹靈、氯硝胺、氯苯胺靈、芐氯三唑醇、溴蟲腈、三氯殺蟲酯、戊菌唑、咪酰胺、二甲戊靈、腐霉利、氟蟲腈、粉唑醇、甲霜靈、異丙甲草胺、嗪草酮、腈菌唑、增效醚、撲草凈、己唑醇、氯苯嘧啶醇、噠螨靈、吡丙醚、甲苯氟磺胺、三唑醇共58種農藥。在檢測結束后，先用緩沖溶液處理，再用酸堿處理，以實現對使用后的酶柱進行載體回收。

本發(fā)明針對葡萄的水果品種特定屬性：大量的糖類、礦物質鈣、鉀、磷、鐵以及多種維生素B₁、維生素B₂、維生素B₆、維生素C、維生素P、多種人體所需的氨基酸等，農藥使用量大，不易清洗干凈，選用特定提取液提取，農藥殘留提取效率顯著提高。采用的檢測工具酶成本低廉、易于標準化提取，節(jié)約成本，采用的參比柱為同種失活酶，用于葡萄中農藥的實測，排除了色素干擾，提高檢測精密度，檢測結果的絕對差值不超過算術平均值的5%，陽性結果的符合率達到100%。

對于本領域技術人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實現本發(fā)明。因此，無論從哪一點來看，均應將實施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權利要求的等同要件的含義和范圍內的所有變化囊括在本發(fā)明內。

此外，應當理解，雖然本說明書按照實施方式加以描述，但并非每個實施方式僅包含一個獨立的技術方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領域技術人員應當將說明書作為一個整體，各實施例中的技術方案也可以經適當組合，形成本領域技術人員可以理解的其他實施方式。