1.一種登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,包括步驟為:
(1)將三羥甲基氨基甲烷、蔗糖、海藻糖和牛血清白蛋白溶于水并定容,調(diào)節(jié)pH值至8-9,得到重懸液,將海藻糖溶于pH值為7-8的磷酸鹽緩沖溶液中得到包被基液;
(2)膠體金中加入碳酸鉀后調(diào)節(jié)pH,再依次加入登革病毒抗原、牛血清白蛋白溶液,離心得到第一沉淀,所述第一沉淀用步驟(1)得到的重懸液重懸得到登革病毒抗原免疫金;膠體金中加入碳酸鉀后調(diào)節(jié)pH,再依次加入鼠IgG、牛血清白蛋白溶液,離心得到第二沉淀,所述第二沉淀用步驟(1)得到的重懸液重懸得到鼠IgG免疫金;
(3)往登革病毒抗原免疫金中加入鼠IgG免疫金,再用步驟(1)得到的重懸液重懸,得到登革病毒IgM/IgG抗體檢測免疫金;
(4)用步驟(1)得到的包被基液和無水乙醇稀釋抗人IgM抗體得到抗人IgM抗體檢測線包被液;用步驟(1)得到的包被基液和無水乙醇稀釋抗人IgG抗體得到抗人IgG抗體檢測線包被液;用步驟(1)得到的包被基液和無水乙醇稀釋羊抗鼠IgG多抗得到對照線包被液;
(5)用步驟(3)得到的所述登革病毒IgM/IgG抗體檢測免疫金對金墊噴金得到免疫金墊,用步驟(4)得到的所述抗人IgM抗體檢測線包被液、所述抗人IgG抗體檢測線包被液、對照線包被液分別在硝酸纖維素膜上劃線,得到反應(yīng)膜;
(6)將步驟(5)得到的反應(yīng)膜放置,再放入膜封閉液中浸泡后取出瀝干粘貼于聚氯乙烯底板上干燥得到貼膜的聚氯乙烯底板,其中膜封閉液是將聚乙二醇20000、三羥甲基氨基甲烷、曲拉通100溶于水中得到;
(7)將樣品墊、免疫金墊、貼膜的聚氯乙烯底板和吸水紙組裝在一起得到登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述三羥甲基氨基甲烷、所述蔗糖、所述海藻糖、所述牛血清白蛋白、所述定容后的總體積的比例為0.24g:10g:5g:1g:100mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述重懸液的pH值采用1M鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.4;所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值為7.4;所述磷酸鹽緩沖溶液為0.01M。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(2)的具體步驟是:往攪拌的膠體金中加入0.2M碳酸鉀,調(diào)節(jié)pH并攪拌10min,加入登革病毒抗原或鼠IgG并攪拌15min,再加入10%牛血清白蛋白溶液,攪拌15min,在4℃、轉(zhuǎn)速為10000r/min的條件下離心20分鐘得到第一沉淀或第二沉淀,所述第一沉淀或第二沉淀用所述重懸液重懸至離心前總體積的1/20,其中攪拌過程是置于磁力攪拌器上實(shí)現(xiàn)的。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(2)中所述碳酸鉀為0.2M,所述0.2M碳酸鉀和所述登革病毒抗原的比例為8uL/mL:4μg/mL,所述0.2M碳酸鉀和所述鼠IgG的比例為6uL/mL:11μg/mL;所述10%牛血清白蛋白溶液的加入體積為所述膠體金體積的1/10。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(3)中所述鼠IgG免疫金的加入體積為所述登革病毒抗原免疫金體積的14%;所述重懸液的體積為步驟(2)中標(biāo)記登革病毒抗原時使用的膠體金體積的1/10減去步驟(3)中登革病毒抗原免疫金體積和鼠IgG免疫金體積。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(4)中所述抗人IgM抗體檢測線包被液中所述抗人IgM抗體的濃度為0.15mg/mL;所述抗人IgG抗體檢測線包被液中所述抗人IgG抗體的濃度為0.5mg/mL;所述對照線包被液中所述羊抗鼠IgG多抗的濃度為1.0mg/mL;所述無水乙醇的加入體積為所述抗人IgM抗體檢測線包被液、所述抗人IgG抗體檢測線包被液或所述對照線包被液總體積的2.5%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(5)中所述噴金過程通過點(diǎn)膜噴金設(shè)備實(shí)現(xiàn);所述金墊采用玻璃纖維膜。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(6)中所述反應(yīng)膜的放置是在2-8℃下放置4h;所述浸泡時間為30min;所述膜封閉液是將比例為2g:1.21g:0.1mL的聚乙二醇20000、三羥甲基氨基甲烷、曲拉通100溶于水中并定容至100 mL,再稀釋10倍后用于浸泡所述反應(yīng)膜;所述膜封閉液的pH值調(diào)節(jié)至8.0。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙的制備方法,其特征在于,步驟(7)中所述樣品墊采用玻璃纖維膜,在使用前用樣品墊處理液對所述樣品墊浸泡10min后干燥,其中所述樣品墊處理液是將比例為0.1g:1.21g:0.5mL:10mg的酪蛋白、三羥甲基氨基甲烷、吐溫80和鼠抗人紅細(xì)胞抗體溶于水中定容至100 mL,pH值調(diào)節(jié)至8.0;所述登革病毒IgM/IgG抗體檢測試紙是組裝后切割得到的。