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      一種檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器及其制備方法和應(yīng)用與流程

      文檔序號:40282156發(fā)布日期:2024-12-11 13:22閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法,其特征在于,所述t1r1-vft受體蛋白的制備方法為:將含有目標(biāo)基因tas1r1-vft的質(zhì)粒pet-dest42轉(zhuǎn)染到大腸桿菌bl21中,并將預(yù)培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到200ml的lb培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng),直到600nm處的吸光度達(dá)到0.6,隨后通過添加0.5mm的異丙基β-d-1-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)目標(biāo)基因的表達(dá)并在16℃下孵育8~12h,在9500rpm/min下離心15~20min收集細(xì)菌顆粒,在pbs緩沖液中重新懸浮細(xì)菌顆粒,使用超聲波細(xì)胞破碎器在300w功率下開/關(guān)2s,對細(xì)菌顆粒進(jìn)行超聲裂解10~15min,裂解的細(xì)菌顆粒在9500rpm/min下離心20~30min,將細(xì)菌顆粒重新懸浮在50ml洗滌緩沖液中,重復(fù)上述步驟三次,將沉淀溶解在含有20mm?sds的tris-hcl緩沖液中透析8~12h,用透析膜在2l透析緩沖液中透析,溶解液離心后使用0.22μm水相膜進(jìn)行過濾,濾出液加入到平衡后的ni2+柱上,在室溫下進(jìn)行純化洗脫,在sds濃度梯度降低的溶液中重新折疊蛋白質(zhì)。

      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法,其特征在于,所述t1r1-vft溶液由t1r1-vft受體蛋白溶于ph7.2、0.01m的tbs緩沖液得到。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法,其特征在于,步驟(1)中,激活ar2g傳感探針末端胺基,步驟為:將活化液注射到96微孔板中,每個孔位注射量為200~250μl,所述ar2g探針插入到微孔板中,室溫浸泡2~3h進(jìn)行活化,活化完成后使用tbs緩沖液輕輕洗去殘留在所述ar2g探針表面的活化液。

      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法,其特征在于,所述活化液由0.8m的nhs和0.8m的edc按照體積比為1:1組成。

      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法,其特征在于,所述ar2g傳感探針與傳感托盤的相互作用經(jīng)過激活300s、封閉300s、基線60s、結(jié)合180s、解離180s五個步驟,各個步驟轉(zhuǎn)速統(tǒng)一為1000rpm?min-1,溫度為25℃,數(shù)據(jù)采集頻率選擇2hz。

      7.一種檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器,其特征在于,通過權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器的制備方法制得。

      8.權(quán)利要求7所述檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器在高通量快速檢測食品中鮮味肽與鮮味受體相互作用方面的應(yīng)用。

      9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于,


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明公開了一種檢測鮮味肽與鮮味受體相互作用的生物傳感器及其制備方法和應(yīng)用,該制備方法包括:對AR2G傳感探針激活;將鮮味肽溶液偶聯(lián)到激活后的AR2G傳感探針表面,室溫孵育8~12h;將乙醇胺溶液浸泡到孵育后的AR2G傳感探針表面,封閉其非特異性結(jié)合位點(diǎn);處理后的AR2G傳感探針表面,使用超純水清洗,得到修飾探針,與傳感托盤組成受體?配體體系,其中傳感托盤內(nèi)放置有通過異源表達(dá)并復(fù)性T1R1?VFT受體蛋白溶液。本發(fā)明具有快速準(zhǔn)確和高通量檢測特點(diǎn),能夠滿足大批量篩選與鮮味受體蛋白具有相互作用的鮮味肽,為驗(yàn)證鮮味肽與鮮味受體蛋白的相互作用提供有效手段。

      技術(shù)研發(fā)人員:劉源,姜水,余炎陽,王文利
      受保護(hù)的技術(shù)使用者:蘇州交感科技有限公司
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/10
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