本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜的檢測(cè)方法、指紋圖譜的建立方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、兒感退熱寧制劑是一種由青蒿、連翹、桔梗、板藍(lán)根、菊花、苦杏仁、薄荷、甘草等8味藥材制成的中藥制劑，在臨床上經(jīng)多年觀察發(fā)現(xiàn)其對(duì)小兒急性上呼吸道感染退熱穩(wěn)定，能明顯改善咳嗽、氣急、咽部充血、肺部體征等癥狀，主要用于小兒外感風(fēng)熱、內(nèi)郁化火、發(fā)熱頭痛、咳嗽、咽喉腫痛等疾病的治療，具有療效確切，見效快、復(fù)發(fā)率低、且未見任何毒副作用的特點(diǎn)。

2、眾所周知，藥品的質(zhì)量是保證臨床用藥安全有效的前提，兒感退熱寧制劑中含有大量的皂苷類、酚酸類、苯丙素類成分，對(duì)臨床療效具有極大的作用。目前藥典收載對(duì)兒感退熱寧制劑的質(zhì)量控制方法僅針對(duì)甘草酸銨成分進(jìn)行控制，未對(duì)兒感退熱寧制劑中的物質(zhì)基礎(chǔ)成分進(jìn)行研究控制。另外，目前現(xiàn)有技術(shù)中針對(duì)兒感退熱寧制劑未采用液相色譜峰展現(xiàn)物質(zhì)化學(xué)成分。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜的檢測(cè)方法、指紋圖譜的建立方法及其應(yīng)用，該方法結(jié)果準(zhǔn)確、分離度較高、穩(wěn)定性良好。

2、為達(dá)到此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜的檢測(cè)方法，包括：

4、將兒感退熱寧制劑待測(cè)液進(jìn)行高效液相色譜分析，得到待測(cè)液的色譜圖；

5、所述高效液相色譜法的色譜條件為：

6、色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；

7、流動(dòng)相流速為0.8～1.5ml/min；流動(dòng)相采用梯度洗脫；

8、流動(dòng)相a為乙腈；流動(dòng)相b為0.1vol％的磷酸溶液；

9、柱溫采用30～40℃；進(jìn)樣量采用10～20μl；檢測(cè)波長(zhǎng)采用201～210nm。

10、優(yōu)選地，以體積百分比計(jì)，所述梯度洗脫的程序?yàn)椋?/p>

11、0～5min，流動(dòng)相a為12％；

12、5～14min，流動(dòng)相a為12％～20％；

13、14～21min，流動(dòng)相a為20％～22％；

14、21～29min，流動(dòng)相a為22％～23％；

15、29～39min，流動(dòng)相a為23％～28％；39～48min，流動(dòng)相a為28％～42％；48～68min，流動(dòng)相a為42％～60％；68～70min，流動(dòng)相a為60％～12％；70～72min，流動(dòng)相a為12％；

16、或

17、0～15min，流動(dòng)相a為20％～28％；15～23min，流動(dòng)相a為28％～32％；23～36min，流動(dòng)相a為32％；36～38min，流動(dòng)相a為32％～34％；38～40min，流動(dòng)相a為34％～35％；40～43min，流動(dòng)相a為35％～36％；43～48min，流動(dòng)相a為36％～37％；48～50min，流動(dòng)相a為37％～39％；50～60min，流動(dòng)相a為39％～50％；60～70min，流動(dòng)相a為50％～80％；70～71min，流動(dòng)相a為80％～20％；71～75min，流動(dòng)相a為20％；

18、或

19、0～5min，流動(dòng)相a為12％；

20、5～10min，流動(dòng)相a為12％～18％；10～21min，流動(dòng)相a為18％～22％；21～27min，流動(dòng)相a為22％～23％；27～40min，流動(dòng)相a為23％～25％；40～45min，流動(dòng)相a為25％～40％；45～46min，流動(dòng)相a為40％；46～70min，流動(dòng)相a為40％～54％；70～73min，流動(dòng)相a為54％～12％；73～75min，流動(dòng)相a為12％；

21、或

22、0～5min，流動(dòng)相a為12％；

23、5～10min，流動(dòng)相a為12％～18％；10～36min，流動(dòng)相a為18％～23％；36～47min，流動(dòng)相a為23％～26％；47～53min，流動(dòng)相a為26％～40％；53～55min，流動(dòng)相a為40％；55～70min，流動(dòng)相a為40％～54％；70～73min，流動(dòng)相a為54％；

24、73～75min，流動(dòng)相a為54％～12％；

25、75～80min，流動(dòng)相a為12％；

26、或

27、0～5min，流動(dòng)相a為12％；

28、5～10min，流動(dòng)相a為12％～18％；

29、10～45min，流動(dòng)相a為18％～23％；

30、45～56min，流動(dòng)相a為23％～26％；

31、56～65min，流動(dòng)相a為26％～40％；

32、65～66min，流動(dòng)相a為40％；

33、66～78min，流動(dòng)相a為40％～60％；

34、78～85min，流動(dòng)相a為60％～12％；

35、或

36、0～5min，流動(dòng)相a為12％；

37、5～10min，流動(dòng)相a為12％～20％；

38、10～27min，流動(dòng)相a為20％～23％；

39、27～40min，流動(dòng)相a為23％～26％；

40、40～49min，流動(dòng)相a為26％～40％；

41、49～70min，流動(dòng)相a為40％～60％；

42、70～71min，流動(dòng)相a為60％；

43、71～73min，流動(dòng)相a為60％～12％；

44、73～75min，流動(dòng)相a為12％。

45、優(yōu)選地，所述色譜柱采用gl?inertsil?ods-3色譜柱；流速采用1.0ml/min；柱溫采用30℃；進(jìn)樣量采用10μl；檢測(cè)波長(zhǎng)采用201nm。

46、優(yōu)選地，所述兒感退熱寧制劑待測(cè)液由兒感退熱寧制劑稀釋得到。

47、優(yōu)選地，所述稀釋的溶劑采用水；所述稀釋的倍數(shù)為5～12.5倍。

48、優(yōu)選地，所述檢測(cè)方法還包括制備混合對(duì)照品：

49、將苦杏仁苷、連翹酯苷a、東莨菪內(nèi)酯、連翹苷、木犀草素和甘草酸銨與100vol％甲醇混合，制成混合對(duì)照品；

50、將所述混合對(duì)照品進(jìn)行高效液相色譜分析，得到混合對(duì)照品的色譜圖。

51、優(yōu)選地，所述混合對(duì)照品中分別含0.2～0.3mg/ml的苦杏仁苷、連翹酯苷a、東莨菪內(nèi)酯、連翹苷、木犀草素和甘草酸銨；

52、根據(jù)所述混合對(duì)照品在色譜圖中的保留時(shí)間以及待測(cè)液中與苦杏仁苷、連翹酯苷a、東莨菪內(nèi)酯、連翹苷、木犀草素和甘草酸銨相對(duì)應(yīng)的成分在待測(cè)液色譜圖中的保留時(shí)間，得到兒感退熱寧制劑中的苦杏仁苷、連翹酯苷a、東莨菪內(nèi)酯、連翹苷、木犀草素和甘草酸銨有效成分的保留時(shí)間。

53、優(yōu)選地，所述苦杏仁苷對(duì)應(yīng)的3號(hào)峰，保留時(shí)間為12.390min；所述連翹酯苷a對(duì)應(yīng)的8號(hào)峰，保留時(shí)間為20.513min；所述東莨菪內(nèi)酯對(duì)應(yīng)的10號(hào)峰，保留時(shí)間為23.109min；所述連翹苷對(duì)應(yīng)的15號(hào)峰，保留時(shí)間為39.403min；所述木犀草素對(duì)應(yīng)的17號(hào)峰，保留時(shí)間為47.316min；所述甘草酸銨對(duì)應(yīng)的19號(hào)峰，保留時(shí)間為54.570min。

54、優(yōu)選地，所述兒感退熱寧制劑是以青蒿、板藍(lán)根、菊花、苦杏仁、桔梗、連翹、薄荷和甘草為有效成分原料制成的。

55、優(yōu)選地，所述兒感退熱寧制劑的劑型為顆粒劑、片劑、膠囊劑、粉劑、丸劑、混懸劑或口服液制劑。

56、第二方面，本發(fā)明提供一種兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜的建立方法，其采用上述兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜的檢測(cè)方法，得到兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜。

57、第三方面，本發(fā)明提供一種上述檢測(cè)方法得到的指紋圖譜或根據(jù)上述建立方法得到的兒感退熱寧制劑中化學(xué)成分的指紋圖譜在兒感退熱寧制劑質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

58、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：

59、本發(fā)明采用高效液相色譜法對(duì)兒感退熱寧制劑中的化學(xué)成分開展檢測(cè)，克服了現(xiàn)有技術(shù)對(duì)兒感退熱寧制劑質(zhì)量控制技術(shù)的不足，可有效的分離兒感退熱寧制劑中的化學(xué)成分，使其質(zhì)量控制更加完善和科學(xué)，達(dá)到控制兒感退熱寧制劑質(zhì)量進(jìn)而監(jiān)控藥品安全生產(chǎn)的目的，保證臨床用藥的安全有效。同時(shí)，本發(fā)明通過(guò)控制檢測(cè)波長(zhǎng)，篩選合適的流動(dòng)相體系，確定合適的流動(dòng)相梯度，提升了指紋圖譜中化學(xué)成分定位結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)實(shí)現(xiàn)分離度佳，穩(wěn)定性良好。