技術(shù)特征：

1.一種基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（4）中，kingfisher?flex實驗方法設(shè)置如下，

3.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（4）中，完成kingfisher?flex參數(shù)設(shè)定后，在室溫下混勻磁珠，向beads?plate板中加入1mg磁珠，確保磁珠體積不超過150?μl；磁珠采用200?μl超純水洗滌2次；結(jié)合完蛋白的磁珠采用200?μl?80%的乙醇溶液，洗滌磁珠，去除表面活性劑等小分子。

4.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（5）中，向酶解板加入100?μl的蛋白酶解溶液，將beads釋放至酶解溶液中，37℃條件下酶解3h。

5.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（5）中，蛋白酶解溶液是通過向100?μl的碳酸氫銨中按照蛋白：酶=100：1的比例加入trypsin和lys?c配置而成。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（6）中，除鹽流動相是由a相：0.5%乙酸和b相：80%乙腈+0.5%乙酸組成。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（6）中，除鹽包括以下步驟：

8.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法，其特征在于：所述步驟（7）中，使用100?μl?0.1%的fa溶液復(fù)溶上述真空濃縮后的肽段，進樣500?ng。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種基于自動化前處理裝置的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)定性定量分析方法。將SP3法與自動化磁珠提取系統(tǒng)Kingfisher?Flex系統(tǒng)相結(jié)合，構(gòu)建SP3?Kingfisher?Flex磁珠純化自動化平臺。通過優(yōu)化、設(shè)置Kingfisher?Flex系統(tǒng)相應(yīng)的參數(shù)，可實現(xiàn)高通量臨床樣本的蛋白前處理，最多可同時處理96個蛋白樣本，減少大隊列樣品處理造成的人為誤差，與此同時將酶切時間從過夜縮短至3h，極大節(jié)約了時間成本。通過SP3磁珠捕獲蛋白質(zhì)和肽段，有效去除影響質(zhì)譜分析的RIPA、SDS等去垢劑，純化肽段，從而提高蛋白鑒定的數(shù)據(jù)質(zhì)量。

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技術(shù)公布日：2024/12/10