本發(fā)明屬于化學(xué)檢測(cè)，具體涉及一種同時(shí)測(cè)定黑參不同部位原型及次生皂苷的含量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

1、人參( panax?ginseng?c.a.?mey.)為五加科植物，具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智的功效。由于生長(zhǎng)環(huán)境和栽培方式的不同，人參在各種環(huán)境條件、生長(zhǎng)方式和生長(zhǎng)周期下，其葉、莖、根部位的性狀和化學(xué)成分都會(huì)存在差異。這些化學(xué)成分上的差異可能導(dǎo)致人參不同部位在藥理方面展現(xiàn)出不同的功效。

2、根據(jù)炮制方法可將人參分為鮮參、生曬參、紅參和黑參等，目前市場(chǎng)上主要流通生曬參和紅參，因此相關(guān)研究也較為全面、透徹，而對(duì)于黑參的相關(guān)研究較少，其物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。黑參是通過對(duì)鮮參進(jìn)行多次反復(fù)蒸制和烘干而得到人參炮制品，已有研究表明，黑參經(jīng)過炮制后的稀有人參皂苷含量變高，使得人參在抗腫瘤、降血糖、抗氧化、抗炎等方面表現(xiàn)出更強(qiáng)的活性。

3、原型人參皂苷是人參主要的藥理活性成分，也是評(píng)價(jià)人參品質(zhì)的主要指標(biāo)，根據(jù)苷元的不同，原型人參皂苷可分為原人參二醇型（ppd）、原人參三醇型（ppt）及齊墩果酸型（oa）。原型人參皂苷是由苷元和糖基相連構(gòu)成的三萜類皂苷，為自然界天然存在的人參皂苷，主要存在于人參初級(jí)炮制品中，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間蒸制和干燥后會(huì)使苷元母核或側(cè)鏈集團(tuán)結(jié)構(gòu)改變而生成次生人參皂苷，次生人參皂苷因其含量極低且難以從人參中提取，因此被稱為稀有皂苷，導(dǎo)致人參與其各種炮制品在生物活性上存在差異。

4、黑參是人參的炮制品，其采用的炮制工藝是傳統(tǒng)方法“九蒸九曬”，然而，目前對(duì)于炮制前后中主要活性成分的變化情況有待深入的分析和研究。本發(fā)明基于uplc-ms/ms技術(shù)測(cè)定人參炮制前后人參皂苷的含量，并比較人參不同部位（包括其葉、莖、蘆頭、主根、須根部位）炮制前、后人參皂苷含量并分析其在不同人參樣品中的變化情況，為人參及黑參的綜合相關(guān)研究提供了參考。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、人參( panax?ginseng?c.a.?mey.)為五加科植物，具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智的功效。由于生長(zhǎng)環(huán)境和栽培方式的不同，人參在各種環(huán)境條件、生長(zhǎng)方式和生長(zhǎng)周期下，其葉、莖、根部位的性狀和化學(xué)成分都會(huì)存在差異。這些化學(xué)成分上的差異可能導(dǎo)致人參不同部位在藥理方面展現(xiàn)出不同的功效。

2、根據(jù)炮制方法可將人參分為鮮參、生曬參、紅參和黑參等，目前市場(chǎng)上主要流通生曬參和紅參，因此相關(guān)研究也較為全面、透徹，而對(duì)于黑參的相關(guān)研究較少，其物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。黑參是通過對(duì)鮮參進(jìn)行多次反復(fù)蒸制和烘干而得到人參炮制品，已有研究表明，黑參經(jīng)過炮制后的稀有人參皂苷含量變高，使得人參在抗腫瘤、降血糖、抗氧化、抗炎等方面表現(xiàn)出更強(qiáng)的活性。

3、原型人參皂苷是人參主要的藥理活性成分，也是評(píng)價(jià)人參品質(zhì)的主要指標(biāo)，根據(jù)苷元的不同，原型人參皂苷可分為原人參二醇型（ppd）、原人參三醇型（ppt）及齊墩果酸型（oa）。原型人參皂苷是由苷元和糖基相連構(gòu)成的三萜類皂苷，為自然界天然存在的人參皂苷，主要存在于人參初級(jí)炮制品中，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間蒸制和干燥后會(huì)使苷元母核或側(cè)鏈集團(tuán)結(jié)構(gòu)改變而生成次生人參皂苷，次生人參皂苷因其含量極低且難以從人參中提取，因此被稱為稀有皂苷，導(dǎo)致人參與其各種炮制品在生物活性上存在差異。

4、黑參是人參的炮制品，其采用的炮制工藝是傳統(tǒng)方法“九蒸九曬”，然而，目前對(duì)于炮制前后中主要活性成分的變化情況有待深入的分析和研究。本發(fā)明基于uplc-ms/ms技術(shù)測(cè)定人參炮制前后人參皂苷的含量，并比較人參不同部位（包括其葉、莖、蘆頭、主根、須根部位）炮制前、后人參皂苷含量并分析其在不同人參樣品中的變化情況，為人參及黑參的綜合相關(guān)研究提供了參考。

5、進(jìn)一步的，在步驟s2中，所述色譜的條件包括：流動(dòng)相流速為0.3ml/min，a相為0.1%甲酸水溶液，b相為乙腈，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為1μl，具體洗脫梯度如下：

6、 時(shí)間 a% b% 0 72.0 28.0 1.0 72.0 28.0 11.0 60.0 40.0 13.0 15.0 85.0 15.0 5.0 95.0 17.0 5.0 95.0 17.01 72.0 28.0 23.0 72.0 28.0

7、。

8、進(jìn)一步的，所述色譜的條件包括：色譜柱為watersacquity?uplc?acquity?beh色譜柱，規(guī)格為100mm×2.1mm，粒徑為1.7μm。

9、進(jìn)一步的，在步驟s2中，所述質(zhì)譜的條件包括：esi離子源；掃描模式為正負(fù)離子切換，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)；霧化氣流量3.0l/min；干燥氣流量10.0l/min；加熱氣流量10l/min；接口溫度300℃；去溶劑管溫度250℃；加熱塊溫度400℃；碰撞誘導(dǎo)解離電壓270kpa。

10、本發(fā)明有益效果在于：

11、本發(fā)明基于uplc-ms/ms技術(shù)開發(fā)檢測(cè)人參及其炮制品中原型皂苷和次生皂苷，并比較人參不同部位（包括其葉、莖、蘆頭、主根、須根部位）炮制前、后人參皂苷含量。已有研究數(shù)據(jù)表明，人參的葉、莖、根等部位的性狀和化學(xué)成分存在差異，不同的炮制品其有效成分也存在差異，本發(fā)明研究了人參及其炮制品中20個(gè)人參皂苷的檢測(cè)方法，比較人參不同部位（包括其葉、莖、蘆頭、主根、須根部位）炮制前、后人參皂苷含量，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過炮制后，人參皂苷含量在五個(gè)部位中發(fā)生了顯著變化，經(jīng)過炮制后黑參中人參皂苷含量及種類顯著升高，具體表現(xiàn)為炮制后稀有人參皂苷含量升高，其中炮制前樣品中未檢出（小于檢測(cè)限）或檢出痕量（小于定量限）稀有人參皂苷rg5、rk1、rk3，而原型人參皂苷含量降低；通過對(duì)比黑參中幾種人參皂苷含量，發(fā)現(xiàn)地上部分re、f4和rk1的含量較高，而地下部分則是rb1、rk1和rg5的含量較高。這些發(fā)現(xiàn)為從不同部位提取和篩選特定的人參皂苷成分提供了有價(jià)值的指導(dǎo)，進(jìn)一步提高和完善人參及黑參相關(guān)研究開發(fā)提供參考依據(jù)。

12、雖有文章對(duì)黑參的含量測(cè)定進(jìn)行報(bào)道，但人參炮制前后成分差異以及各部位差異尚未見報(bào)道。通過方法學(xué)驗(yàn)證可知本發(fā)明建立的方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、易行，并且所建立的方法多達(dá)20種人參皂苷，其檢測(cè)范圍可包含了人參皂苷中極性及非極性皂苷，適用性廣；同時(shí)本發(fā)明研究并比較了人參及黑參中的藥用部位（干燥根和根莖）及非藥用部位（葉、莖）的人參皂苷含量，為提取和篩選特定的人參皂苷成分提供了有價(jià)值的指導(dǎo)，提高人參及黑參的綜合利用價(jià)值。