芳烴、杯[6]芳烴、杯[8]芳烴、杯[4]芳烴磺酸、杯[6]芳烴磺酸、杯[8]芳烴磺酸、杯 [4]芳烴乙酸、杯[6]芳烴乙酸、杯[8]芳烴乙酸、杯[4]芳烴羧酸、杯[6]芳烴羧酸、杯[8] 芳烴羧酸、杯[4]芳烴胺、杯[6]芳烴胺、杯[8]芳烴胺、它們的鹽等。其中，優(yōu)選杯[6]芳 烴磺酸、杯[8]芳烴磺酸、它們的鹽。應予說明，杯[6]芳烴對磺酸六鈉鹽水合物或者杯[8] 芳烴對磺酸八鈉鹽水合物可以使用同仁化學研宄所市售的產品等，從容易獲得這點看可以 優(yōu)選使用。另外，也可使用以間苯二酚為基本骨架的間苯二酚芳烴、以連苯三酚為基本骨架 的連苯三酚芳烴、以吡咯為基本骨架的杯吡咯等。這些杯芳烴類也可以并用2種以上。反 應體系中的杯芳烴類的濃度，調整到以最終濃度計優(yōu)選〇. 005?4mM、更優(yōu)選0. 005?3mM、 進一步優(yōu)選〇. 005?2. 5mM、特別優(yōu)選0. 01?2mM來使用。
[0027] 環(huán)糊精是多分子的D-葡萄糖通過a (1 - 4)糖苷鍵結合而形成環(huán)狀結構的環(huán)狀 寡糖的一種，已知有5個以上葡萄糖結合形成的物質。通常使用6到8個葡萄糖結合形成的 物質，6個結合形成的物質是a-環(huán)糊精（環(huán)己烷直鏈淀粉）、7個結合形成的物質是環(huán) 糊精（環(huán)庚烷直鏈淀粉）、8個結合形成的物質是Y_環(huán)糊精（環(huán)辛烷直鏈淀粉），但并不限 定于這些。例如，也可以利用上述的各種糊精的修飾物等，可使用環(huán)糊精的羥基的氫原子被 各種取代基取代而成的環(huán)糊精或它們的鹽。例如，可舉出被烷基取代的烷基化環(huán)糊精、被酰 基取代的?；h(huán)糊精、被羧基烷基取代的羧基烷基化環(huán)糊精、被羥基烷基取代的羥基烷 基化環(huán)糊精、被磺烷基取代的磺烷基化環(huán)糊精、或它們的鹽。另外，還可舉出環(huán)糊精的羥基 和各種酸進行了酯鍵結合的環(huán)糊精或它們的鹽，例如環(huán)糊精硫酸酯或它們的鹽（鈉鹽也稱 作硫酸環(huán)糊精）、環(huán)糊精磷酸酯或它們的鹽等。另外，可舉出構成環(huán)糊精的葡萄糖的6位羥 基和葡萄糖、麥芽糖等糖的羥基脫水縮合而成的分支狀環(huán)糊精等。
[0028] 這些環(huán)糊精之中，可優(yōu)選使用環(huán)糊精。
[0029] 反應體系中的環(huán)糊精的濃度優(yōu)選是1?400mM、特別優(yōu)選是1?lOOmM。
[0030] 上述的大環(huán)化合物中，優(yōu)選將杯芳烴類作為主成分。特別是作為測定的靈敏度增 強劑使用時，優(yōu)選使杯芳烴類在反應體系中的最終濃度為〇. 005?4mM、進一步為0. 005? 3mM、特別是0. 005?2. 5mM。另外，作為血紅蛋白影響避免劑使用時，優(yōu)選使杯芳烴類在反 應體系中的最終濃度為0. 005?3mM、進一步為0. 01?2mM。
[0031] 應予說明，在反應體系中，根據(jù)需要可以添加聚乙二醇、葡聚糖、明膠、氯化鈉、EDTA等慣用的添加劑。
[0032] 上述大環(huán)化合物，只要是存在于抗原抗體反應體系中即可，可以在抗原抗體反應 前添加到試樣中，也可以添加到含有免疫反應物質的試劑中。另外，也可以添加到反應時使 用的緩沖液中。
[0033] 吸光度的測定可以用終點法、速率分析法中的任何一種進行。應予說明，本發(fā)明的 方法并不限定于上述方法，可以根據(jù)使用的免疫學測定方法進行適當變更后實施，使用的 緩沖液、測定條件等也可以適當變更。
[0034] 本發(fā)明的方法中使用的試劑是上述方法所使用的試劑，該試劑通過含有以上述大 環(huán)化合物為主成分的測定靈敏度增強劑或血紅蛋白影響避免劑而形成。上述的試劑可以根 據(jù)免疫學測定方法的種類進行適當設定，另外也可以是由多種構成試劑形成的試劑盒，此 時只要是構成試劑中的至少1種含有上述大環(huán)化合物即可。
[0035] 作為本發(fā)明的免疫學測定方法中的pH，在4. 5?9. 5,優(yōu)選在5. 5?8. 5的范圍。 為了維持pH，優(yōu)選使用適當?shù)木彌_劑，例如磷酸緩沖液、TRIS鹽酸緩沖液、琥珀酸緩沖液、 甘氨酸緩沖液或甘氨酰甘氨酸、MES(2-(N-嗎啉基）乙磺酸）、HEPES(N-2-羥基乙基-哌 嗪-N'-乙磺酸）、TES(N-三（羥基甲基）甲基-2-氨基乙磺酸）、M0PS(3-(N-嗎啉基）丙磺 酸）、？1?￡5(哌嗪-1，4-二（2-乙磺酸））、01?50(3-"1-二（2-羥基乙基）氨基）-2-羥 基丙磺酸）、Tricine(三（羥基甲基）甲基甘氨酸）、TAPS(N-三（羥基甲基）甲基-3-氨 基丙磺酸）等優(yōu)良緩沖液。使用濃度是1?500mM、優(yōu)選是3?300mM。
[0036] 本發(fā)明的免疫反應液中也可以含有疊氮化鈉、動物血清、Y-球蛋白或對人IgG或IgM的特異抗體、白蛋白、氯化鈉及其它無機鹽類、糖類、氨基酸類、EDTA等螯合劑、DTT等SH 試劑及表面活性劑等。作為疊氮化鈉的濃度，是〇. 01?1%、優(yōu)選是〇. 03?0. 3%。動物 血清、Y-球蛋白或特異抗體及白蛋白可使用來自牛、馬、豬、羊、兔、人、大鼠等的物質，也可 選擇它們的改性物或分解物，添加濃度也可以適當選擇。氯化鈉優(yōu)選在生理食鹽濃度附近。 對于其它物質，使用濃度也可以適當選擇。
[0037] 實施例
[0038] 以下，根據(jù)實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但本發(fā)明不限定于這些實施例。
[0039] 實施例1 (可溶性纖維蛋白（SF)的測定）
[0040] (1)第一試劑的制備
[0041] 將杯[8]芳烴對磺酸八鈉鹽水合物或杯[6]芳烴對磺酸六鈉鹽水合物（同仁化學 研宄所公司制）以〇. 01?10mM(反應體系中的最終濃度為〇. 005?5mM)的濃度添加到含 有0.4%牛血清白蛋白以及0. 5M氯化鈉的30mMTRIS鹽酸緩沖液（pH8. 5)中制成第一試 劑。應予說明，作為比較例，使用不含杯芳烴類的第一試劑。
[0042] (2)第二試劑（抗可溶性纖維蛋白（SF)抗體固定化粒子懸浮液）的制備
[0043] 將用20mMTRIS鹽酸緩沖液（pH7. 5)將抗SF單克隆抗體稀釋到0. 7mg/mL從而形 成的抗體液、與平均粒徑〇. 2ym的聚苯乙烯系膠乳（SEKISnMEDICAL公司制）1 %懸浮液 等量地混合，在4°C攪拌2小時。進一步等量添加1%牛血清白蛋白、攪拌1小時后，通過離 心分離收集沉淀部分，用含有0.5%牛血清白蛋白的5mMMOPS(pH7)將其懸浮，制備成第二 試劑（抗SF抗體固定化粒子懸浮液）。
[0044] (3)試樣
[0045] 將使凝血酶與精制的纖維蛋白原作用從而制備的酸可溶性desAABB纖維蛋白，按 照各自最終濃度10. 3yg/mL添加到人檸檬酸血漿中，從而制備成可溶性纖維蛋白。應予說 明，空白試劑的測定使用生理鹽水。
[0046] ⑷測定
[0047] 在3yL試樣中加入第一試劑100yL，在37°C加溫5分鐘后，測定在加入第二試劑 100yL攪拌后1?5分鐘的主波長570nm以及副波長800nm處的吸光度變化量。將得到的 吸光度值示于表1和表2。
[0048] [表 1]
[0049]
【主權項】
1. 一種免疫學測定的靈敏度增強方法，其是采用抗原抗體反應測定生物體試樣中的測 定對象物質的膠乳凝集法或金屬膠體凝集法，其特征在于， 在大環(huán)化合物的存在下進行反應，大環(huán)化合物是杯芳姪類，杯芳姪類在反應體系中的 最終濃度是0. 005mM?4mM。
2. 如權利要求1所述的方法，其中，免疫學測定方法是使用對抗體進行了敏化的不溶 性載體的方法。
3. 如權利要求1所述的方法，其中，免疫學測定方法是膠乳凝集法或金屬膠體凝集法。
4. 如權利要求1?3中任一項所述的方法，其中，測定對象物質是蛋白抗原。
5. -種免疫學測定用試劑，其是在采用抗原抗體反應測定生物體試樣中的測定對象物 質的膠乳凝集法或金屬膠體凝集法中使用的試劑，其特征在于， 含有W大環(huán)化合物為主成分的靈敏度增強劑，大環(huán)化合物是杯芳姪類，杯芳姪類在反 應體系中的最終濃度是0. 〇〇5mM?4mM。
6. 如權利要求5所述的免疫學測定用試劑，其中，免疫學測定方法是使用對抗體進行 了敏化的不溶性載體的方法。
【專利摘要】本發(fā)明提供免疫學測定方法中的增強測定靈敏度的技術以及避免血紅蛋白影響的技術。所述免疫學測定中的增強測定靈敏度的方法以及避免血紅蛋白影響的方法，是應用抗原抗體反應測定生物體試樣中的測定對象物質的免疫學測定方法，其特征在于，在杯芳烴類等大環(huán)化合物的存在下進行反應。FERM BP-375519910320
【IPC分類】G01N33-53
【公開號】CN104535756
【申請?zhí)枴緾N201410775879
【發(fā)明人】山本光章, 鈴木明子
【申請人】積水醫(yī)療株式會社
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2009年7月3日
【公告號】CN102405412A, CN102405412B, EP2295969A1, EP2295969A4, US8722342, US20110104825, WO2010001619A1