圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明具體實施例中的5種化哇類殺菌劑結(jié)構(gòu)圖，（A.戊苯化菌胺；B.化 咪哇；C.化哇蔡菌胺；D.巧化菌胺；E.氣哇菌醜胺）； 圖2為本發(fā)明具體實施例中5種化哇類殺菌劑標準溶液巧0. 0 ng/mL)MRM色譜圖，圖 2中，（2-1)為化咪哇；（2-2)為戊苯化菌胺，（2-3)為化哇蔡菌胺；（2-4)為巧化菌胺； (2-5)為氣哇菌醜胺； 圖3為本發(fā)明具體實施例中5種化哇類殺菌劑掃描二級質(zhì)譜圖；圖3中，（3-1)為化咪 哇；（3-2)為戊苯化菌胺，（3-3)為化哇蔡菌胺；（3-4)為巧化菌胺；（3-5)為氣哇菌醜 胺； 圖4為本發(fā)明具體實施例中標準工作曲線，圖4中，（4-1)為化咪哇；（4-2)為戊苯化 菌胺，（4-3)為化哇蔡菌胺；（4-4)為巧化菌胺；（4-5)為氣哇菌醜胺。
【具體實施方式】
[0016] 下面通過實施例對本發(fā)明進行具體的描述，只用于對本發(fā)明進行進一步說明，不 能理解為對本發(fā)明保護范圍的限定，該領(lǐng)域的技術(shù)工程師可根據(jù)上述發(fā)明的內(nèi)容對本發(fā)明 作出一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整。
[0017] 實施例1 包括W下步驟： (一） 待測樣品的制備：稱取葡萄酒樣品5. Og，加入3 mL超純水混勻得到待檢液； (二） 固相萃取凈化：取HLB SPE柱，依次用甲醇和水活化SPE柱，取全部待檢液至SPE 柱，再依次用4?6mL水和4?6mL甲醇/水混合溶液（v/v, 2/3)淋洗SPE柱，將SPE柱 真空抽干，用6?8mL的甲醇對SPE柱進行洗脫，得到洗脫液，將洗脫液濃縮后，用2 mL甲 醇稀釋過微孔濾膜后得到待測樣品溶液； (H)標準溶液的配置；取戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺標準 品，用甲醇分別配制成質(zhì)量濃度為200 mg/L的單標儲備液，進行測定使用時，用甲醇稀釋上 述標準儲備液，將戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺分別配制成1. 0， 5. 0，10. 0，20. 0，50. 0，100. 0 ng/mL 的混合標準工作溶液； (四）待測樣品的檢測：將步驟(二）（H)中的待測樣品溶液和標準工作溶液在氣相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀上分別進樣，獲得W標準溶液中戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、口比 咪哇、巧化菌胺等5種化哇類殺菌劑的濃度為橫坐標，再W標準溶液中戊苯化菌胺、氣哇菌 醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺等5種化哇類殺菌劑的的峰面積為縱坐標的工作曲 線，結(jié)果表明，5種化哇類殺菌劑在1. 0-100 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，R2> 0. 99， W 10倍信噪比（S/N)為方法定量限即LOQ，經(jīng)樣品添加試驗確定5種化哇類殺菌劑的定量 限均為0.5 ng/g。還有獲得可W確定母離子的戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪 哇、巧化菌胺等5種化哇類殺菌劑的一級質(zhì)譜圖，確定母離子后，采用子離子掃描獲得二級 質(zhì)譜圖，然后從二級質(zhì)譜圖中選取定量離子和定性離子，然后用工作曲線對定量離子進行 定量計算獲得待測樣品溶液中戊苯化菌胺、氣哇菌醜胺、化哇蔡菌胺、化咪哇、巧化菌胺等5 種化哇類殺菌劑的濃度。
[001引參見表1，其為5種化哇類殺菌劑LC-MS/MS檢測條件 ?火1各個化作物I.C-MS MS憐測《件
【主權(quán)項】
1. 一種葡萄酒中吡唑類殺菌劑的固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，其特征在 于該方法包括以下步驟： 待測樣品的制備：稱取4. 7-5. 3g葡萄酒樣品，葡萄酒中加入超純水，混勻后得到待檢 液； 待測樣品的凈化：將固定相萃取柱進行預(yù)處理，將步驟(一）制備的待檢液上萃取柱，經(jīng) 水和甲醇/水溶液淋洗除去雜質(zhì)，再用洗脫溶劑洗脫固定相萃取柱上的戊苯吡菌胺、氟唑 菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺得到洗脫液，將洗脫液濃縮富集后，用甲醇溶劑稀釋 并經(jīng)0. 22 μ m微孔濾膜過濾后得到待測樣品溶液； 待測樣品的檢測：配制戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺溶液階 梯濃度的混合標準工作溶液（1.0，5.0，10.0，20.0，50.0，100.0 ng/mL)，將步驟(二） 中的待測樣品溶液和混合標準工作溶液在氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀上分別進樣，獲得以標準 溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺的濃度為橫坐標，再以混合 標準工作溶液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺的峰面積為縱坐 標的工作曲線，還有獲得可以確定母離子的戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、 呋吡菌胺的一級質(zhì)譜圖，確定母離子后，采用子離子掃描獲得二級質(zhì)譜圖，然后從二級質(zhì)譜 圖中選取定量離子和定性離子，然后用工作曲線對定量離子進行定量計算獲得待測樣品溶 液中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、批唑萘菌胺、批咪唑、呋吡菌胺的濃度。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葡萄酒中吡唑類殺菌劑的固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì) 譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(二）中的固定相萃取柱為Waters Oasis HLB SPE柱， 并通過甲醇、水對Waters Oasis HLB SPE柱進行活化處理。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葡萄酒中吡唑類殺菌劑的固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì) 譜檢測方法，其特征在于：所述步驟(二）中的淋洗溶劑為水和體積比為2/3的甲醇水混合 溶液，洗脫溶劑為甲醇。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種葡萄酒中吡唑類殺菌劑的固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì) 譜檢測方法，其特征在于：所述的步驟(三）中氣相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜的參數(shù)條件如下： 色譜柱：SGE 公司 BPX35 ;30 mXO. 25 mmXO. 25 μπι 流速：1. 〇ml/min高純氦 儀器：Agilent 7890A-7000B 碰撞氣：高純氮：1. 5ml/min，粹滅流量：2. 25ml/min高純氦 升溫程序：50°C (Imin)-290°C (8min)40°C/min 多模式進樣口（MMI) :50°C (0· lmin)-300°C ;600°C /min 1分鐘打開分流閥，流量60ml/min 離子化：EI源。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種葡萄酒中吡唑類殺菌劑的固相萃取-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，本發(fā)明能夠同時測定葡萄酒中樣品中戊苯吡菌胺、氟唑菌酰胺、吡唑萘菌胺、吡咪唑、呋吡菌胺5種吡唑類殺菌劑。在葡萄酒樣品中加入超純水稀釋得到待檢液，待檢液經(jīng)HLB固相萃取柱凈化，使用C18反相柱分離；目標分析物在多反應(yīng)監(jiān)測模式下以保留時間和離子對信息比較進行定性分析，外標法定量，本方法分析速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性和準確度好，為評價葡萄酒樣品質(zhì)量提供了新的檢測方法。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號】CN104569271
【申請?zhí)枴緾N201510013362
【發(fā)明人】韓超, 陳祥準, 夏碧琪, 周永芳, 劉濱, 劉翠平
【申請人】韓超
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月9日