20% ;80% ;從20-45min，流動(dòng)相A ;流動(dòng)相B由 20〇/〇 ;80% - 24% ;76% ;從 45-65min，流動(dòng)相 A ;流動(dòng)相 B 為 24% ;76% ;從 65-70min，流動(dòng)相 A : 流動(dòng)相 B 由 24% ;76% - 30% ;70% ;從 70-90min，流動(dòng)相 A :流動(dòng)相 B 由 30% ;70% - 40% ;60〇/〇 ; 從 90-105min，流動(dòng)相 A ;流動(dòng)相 B 由 40% ;60% - 90% ;10〇/〇 ;
[0030] 樣品測(cè)定法；分別吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液25 y 1，注入高效液相色譜儀，測(cè) 定，即得指紋圖譜。
[0031] 檢測(cè)所得淫羊蕾提取物指紋圖譜中有16個(gè)共有特征峰，與對(duì)照品指紋圖譜對(duì)照 品出峰時(shí)間對(duì)比，按出峰時(shí)間順序確定第6號(hào)峰為朝蕾定A色譜峰，第7號(hào)峰為朝蕾定B色 譜峰，第8號(hào)峰為朝蕾定C色譜峰，第9號(hào)峰為淫羊蕾巧色譜峰，第16號(hào)峰為寶蕾巧I色 譜峰，W第9號(hào)峰為參照峰，16個(gè)色譜峰保留時(shí)間比依次為；0. 138、0. 518、0. 550、0. 585、 0. 835、0. 880、0. 915、0. 965、1. 000、1. 315、1. 380、1. 475、1. 565、1. 625、1. 635、1. 695。
[0032] 本發(fā)明所述的淫羊蕾提取物由如下方法提取得到：取淫羊蕾藥材粉碎，稱取1重 量份，加入20-40體積份的水和/或50-95%的己醇為溶劑提取1-3小時(shí)，將提取液回收己 醇后濾過(guò)，通過(guò)JD-1 (WLD)型或D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用60-80%己醇洗脫，當(dāng)流出 液顏色明顯變深時(shí)開(kāi)始收集洗脫液，當(dāng)洗脫液顏色變得極淺時(shí)洗脫完畢，洗脫液回收己醇、 濃縮、干燥得到淫羊蕾提取物；所述重量份與體積份的關(guān)系為g/mL的關(guān)系。
[0033] 進(jìn)一步的，所述淫羊蕾提取物由如下方法提取得到：取淫羊蕾藥材粉碎，稱取1重 量份，加入水和/或50-95%的己醇為溶劑提取兩次，第一次加10-20體積份（g/mL)溶劑提 取1小時(shí)，第二次加入10-20體積份（g/mL)溶劑提取1小時(shí)，將提取液合并，回收己醇后濾 過(guò)，通過(guò)JD-1 (WLD)型或D101型大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用70%己醇洗脫，當(dāng)流出液顏色明 顯變深時(shí)開(kāi)始收集洗脫液，當(dāng)洗脫液顏色變得極淺時(shí)洗脫完畢，洗脫液回收己醇、濃縮、干 燥得到淫羊蕾提取物。
[0034] 優(yōu)選的，所述淫羊蕾提取物由如下方法提取得到：取淫羊蕾藥材粉碎，稱取1重量 份，加水提取兩次，第一次加15體積份（g/mL)提取1小時(shí)，第二次加入10體積份（g/mL)提 取1小時(shí)，將兩次提取液合并，濾過(guò)，通過(guò)JD-1 (WLD)型大孔吸附樹(shù)脂柱分離，然后用70% 己醇洗脫，當(dāng)流出液顏色明顯變深時(shí)開(kāi)始收集洗脫液，當(dāng)洗脫液顏色變得極淺時(shí)洗脫完畢， 洗脫液回收己醇、濃縮、干燥得到淫羊蕾提取物。
[00巧]優(yōu)選的，所述淫羊蕾提取物由如下方法提取得到：取淫羊蕾藥材粉碎，稱取1重量 份，加50%己醇提取兩次，第一次加20體積份（g/mL)提取1小時(shí)，第二次加入10體積份 (g/mL)提取1小時(shí)，將兩次提取液合并，回收己醇后濾過(guò)，通過(guò)D101型大孔吸附樹(shù)脂柱分 離，然后用70%己醇洗脫，當(dāng)流出液顏色明顯變深時(shí)開(kāi)始收集洗脫液，當(dāng)洗脫液顏色變得極 淺時(shí)洗脫完畢，洗脫液回收己醇、濃縮、干燥得到淫羊蕾提取物。
[0036] 優(yōu)選的，所述淫羊蕾提取物由如下方法提取得到：取淫羊蕾藥材粉碎，稱取1重量 份，加95%己醇提取兩次，第一次加10體積份（g/mL)提取1小時(shí)，第二次加入20體積份（g/ mL)提取1小時(shí)，將兩次提取液合，回收己醇后濾過(guò)，通過(guò)JD-1 (WLD)型大孔吸附樹(shù)脂柱分 離，然后用70%己醇洗脫，當(dāng)流出液顏色明顯變深時(shí)開(kāi)始收集洗脫液，當(dāng)洗脫液顏色變得極 淺時(shí)洗脫完畢。洗脫液回收己醇、濃縮、干燥得到淫羊蕾提取物。
[0037] 本發(fā)明還提供了根據(jù)上述方法提取得到的淫羊蕾提取物。
[0038] 本發(fā)明還公開(kāi)了上述構(gòu)建淫羊蕾提取物指紋圖譜的方法在檢測(cè)淫羊蕾含量及質(zhì) 量控制領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0039] 本發(fā)明所述構(gòu)建淫羊蕾提取物的指紋圖譜的方法，W淫羊蕾提取物為檢測(cè)對(duì)象， 針對(duì)性的開(kāi)發(fā)了適用于該提取物的指紋圖譜的構(gòu)建方法，獲得了較為全面的圖譜信息，且 能夠結(jié)合指紋圖譜中多個(gè)色譜峰的信息，更加全面反映淫羊蕾提取物的質(zhì)量，區(qū)別于現(xiàn)有 技術(shù)中從單獨(dú)一個(gè)或者數(shù)個(gè)化學(xué)成分來(lái)判定淫羊蕾提取物整體整理的片面性的問(wèn)題，能夠 更加有效、合理的對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)控。同時(shí)，本發(fā)明所述構(gòu)建指紋圖譜的方法具有穩(wěn)定性 高、精密度高，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。
[0040] 本發(fā)明所述的淫羊蕾提取物優(yōu)選由水和/或體積濃度為50-95%的己醇提取并經(jīng) 由JD-1 (WLD)型或D101型大孔吸附樹(shù)脂柱分離而得，所獲得的指紋圖譜的信息更為全面 有效。
[0041] 實(shí)驗(yàn)例淫羊蕾提取物指紋圖譜的建立實(shí)驗(yàn)
[0042] 1、儀器與試藥
[004引 1. 1儀器
[0044] BS110S 型電子天平（Made by Sartorius, d=0.1 mg);
[0045] CP22抓型精密電子天平（Made by Sartorius, d=0.0 lmg);
[0046] Agilentl200型高效液相色譜儀(帶DAD檢測(cè)器）；
[0047] Agilent ZORBAX XDB-Cis (250X4. 6mm，5 y m)色譜柱；
[0048] SB-5200DTD超聲波處理器(寧波新芝生物科技股份有限公司）。
[0049] 1. 2 試藥
[0050] 朝蕾定A (批號(hào)100723,購(gòu)自成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，純度>98%);
[0051] 朝蕾定B (批號(hào)100806,購(gòu)自成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，純度>98%);
[0052] 朝蕾定C (批號(hào)100412,購(gòu)自成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司，純度>98%);
[0053]淫羊蕾巧（批號(hào)110737-200312,中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；
[0054] 寶蕾巧 I (批號(hào) 113558-15-9,購(gòu)自 SHANGHAI TAUT0 BIOTECH C0.，LTD,純度 >98%)；
[0055] 己膳，色譜純讀國(guó)Dikma公司）；
[0056] 水為屈臣氏純凈水；
[0057] 其他試劑為分析純。
[005引 1.3樣品
[0059] 所述淫羊蕾提取物樣品由如下方法得到；取淫羊蕾藥材lOg，粉碎，加水提取兩 次，第一次加150ml提取1小時(shí)，第二次加入100ml再次提取1小時(shí)，將兩次提取液合并，濾 過(guò)，并通過(guò)JD-1 (WLD)型大孔吸附樹(shù)脂柱，然后用70%己醇洗脫，當(dāng)流出液顏色明顯變深時(shí) 開(kāi)始收集洗脫液，當(dāng)洗脫液顏色變得極淺時(shí)洗脫完畢，洗脫液回收己醇、濃縮、干燥得到淫 羊蕾提取物。
[0060] 將上述得到的提取物依次編號(hào)為Sl-S12(批號(hào)依次為11016、11025、11036、11040、 11045、12004、12012、12022、12036、12040、12051、12060)進(jìn)行檢測(cè)。
[0061] 2、方法與結(jié)果
[0062] 2.1對(duì)照品溶液的制備
[0063] 精密稱定朝蕾定A、朝蕾定B、朝蕾定C、淫羊蕾巧、寶蕾巧I對(duì)照品適量，置25血量 瓶中，用甲醇配成每1ml含0.1 mg的朝蕾定A、朝蕾定B、朝蕾定C、淫羊蕾巧、寶蕾巧I對(duì)照 品溶液，即得。
[0064] 2. 2供試品溶液的制備
[0065] 稱取上述干燥后的淫羊蕾提取物0.1 g，精密稱定，精密加入體積濃度為50%的甲 醇溶液25mL，稱定，超聲lOmin，放涼后稱重，W體積濃度為50%的甲醇溶液補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，過(guò)0. 45 y m濾膜，取續(xù)濾液，即得。2. 3色譜條件
[006引 色譜柱；Agilent Z0RBAX XDB-Cis (250X4. 6mm，5 y m)色譜柱；流動(dòng)相；W 己膳為 流動(dòng)相A，W體積濃度為0. 1%的磯酸水為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序如下；流速為 Iml/min ;柱溫；3(TC ;檢測(cè)波長(zhǎng)；270皿;梯度洗脫程序：
[0067] 0-10分鐘，流動(dòng)相A為15%，流動(dòng)相B為85% ;
[006引 10-20分鐘，流動(dòng)相A從15%變?yōu)?0%，流動(dòng)相B從85%變?yōu)?0% ;
[0069] 20-45分鐘，流動(dòng)相A從20%變?yōu)?4%，流動(dòng)相B從80%變?yōu)?6% ;
[0070] 45-65分鐘，流動(dòng)相A為24%，流動(dòng)相B為76%;
[0071] 65-70分鐘，流動(dòng)相A從24%變?yōu)?0%，流動(dòng)相B從76%變?yōu)?0%;
[007引70-90分鐘，流動(dòng)相A從30%變?yōu)?0%，流動(dòng)相B從70%變?yōu)?0%;
[0073] 90-105分鐘，流動(dòng)相A從40%變?yōu)?0%，流動(dòng)相B從60%變?yōu)?0%。2. 4樣品測(cè)定 法
[0074] 分別吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液lOy 1，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，按供試品 記錄圖譜，其中所述對(duì)照品溶液的圖譜見(jiàn)圖1，檢測(cè)樣品的圖譜見(jiàn)圖2?？梢?jiàn)各個(gè)特征峰清 晰得到分離。
[00巧]2. 5方法學(xué)考察
[0076] 2. 5. 1精密度試驗(yàn)
[0077] 取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，所得指紋圖譜疊加圖見(jiàn)附圖3。采用《中藥色 譜指紋圖譜評(píng)價(jià)分析系統(tǒng)》（2004年A版)對(duì)其指紋圖譜進(jìn)行分析，與生成的對(duì)照指紋圖譜 相比，6份樣品的相似度均大于0. 950。W 9號(hào)峰淫羊蕾巧峰為參照峰，其共有峰的相對(duì)保 留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于5%，表明儀器穩(wěn)定，精密度良好，符合指紋圖譜技術(shù)的要 求。
[007引2. 5. 2重復(fù)性試驗(yàn)
[0079] 取同一批號(hào)供試品，按供試品制備方法平行制備6份，進(jìn)樣，所得指紋圖譜疊加圖 見(jiàn)圖4。采用《中藥色譜指紋圖譜評(píng)價(jià)分析系統(tǒng)》（2004年A版）對(duì)其指紋圖譜進(jìn)行分析， 與生成的對(duì)照指紋圖譜相比，6份樣品的相似度均大于0. 950。W 9號(hào)峰為參照峰，其共有 峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于5%，表明重復(fù)性良好，符合指紋圖譜技術(shù)的 要求。
[0080] 2. 5. 3穩(wěn)定性試驗(yàn)
[0081] 取同一供試品溶液，分別于0、2、8、12、16、24、48小時(shí)時(shí)進(jìn)樣，所得指紋圖譜疊加 圖見(jiàn)圖5。采用《中藥色譜指紋圖譜評(píng)價(jià)分析系統(tǒng)》（2004年A版)對(duì)其指紋圖譜進(jìn)行分析， 與生成的對(duì)照指紋圖譜相比，6份樣品的相似度均大于0. 950。W 9號(hào)峰淫羊蕾巧峰為