確定第6號峰為朝蕾定A色譜峰，第7號峰為朝蕾定B色 譜峰，第8號峰為朝蕾定C色譜峰，第9號峰為淫羊蕾巧色譜峰，第16號峰為寶蕾巧I色 譜峰，W第9號峰為參照峰，16個色譜峰保留時間比依次為；0. 126、0. 510、0. 532、0. 570、 0. 821、0. 865、0. 907、0. 955、1. 000、1. 308、1. 363、1. 467、1. 559、1. 609、1. 618、1. 685。
[0143] 顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對 于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可W做出其它不同形式的變化或 變動。該里無需也無法對所有的實施方式予W窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或 變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。
【主權(quán)項】
1. 一種構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法，其特征在于，包括如下操作步驟： 供試品溶液的制備：精密稱定淫羊藿提取物0. 05-0. 15重量份，置錐形瓶中，精密加入 體積濃度為35%-100%的甲醇溶液15-50體積份，稱定，超聲10-50min，放涼后稱重，以體積 濃度為35%-100%的甲醇補足減失的重量，過微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：精密稱定朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I對照品 適量，用甲醇配成每1ml份含0. 05-0. 50mg的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿 苷I的溶液，作為對照品溶液； 高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動 相B為體積濃度0. 05-2%的磷酸水溶液；柱溫：20°C -40°C ;檢測波長：260nm-280nm ;流速： 0. 5-1.5ml ? min-1，進行梯度洗脫，具體梯度洗脫程序為：從O-lOmin，流動相A:流動相 B 為 15% :85% ;從 10-20min，流動相 A :流動相 B 由 15% :85% - 20% :80% ;從 20-45min，流 動相A :流動相B由20% :80% - 24% :76% ;從45-65min，流動相A :流動相B為24% :76% ;從 65-70min，流動相A :流動相B由24% :76% - 30% :70% ;從70-90min，流動相A :流動相B由 30% :70% - 40% :60% ;從 90-105min，流動相 A :流動相 B 由 40% :60% - 90% : 10% ; 樣品測定法：分別吸取供試品溶液與對照品溶液2-25 yl，注入高效液相色譜儀，測 定，即得指紋圖譜； 所述重量份與體積份的關(guān)系為g/mL的關(guān)系。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法，其特征在于，包括如 下操作步驟： 供試品溶液的制備：精密稱定淫羊藿提取物〇. 1重量份，置錐形瓶中，精密加入體積濃 度為50%的甲醇溶液25體積份，稱定，超聲15min，放涼后稱重，以體積濃度為50%的甲醇補 足減失的重量，過微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：精密稱定朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I對照品 適量，用甲醇配成每1ml份含0.1 mg的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I的 溶液，作為對照品溶液； 高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動 相B為體積濃度0. 1%的磷酸水溶液；柱溫：30°C ;檢測波長：270nm ;流速：1.0ml ? min一 S進行梯度洗脫，具體梯度洗脫程序為：從O-lOmin，流動相A :流動相B為15% :85% ;從 10-20min，流動相A :流動相B由15% :85% - 20% :80% ;從20-45min，流動相A :流動相B由 20% :80% - 24% :76% ;從 45-65min，流動相 A :流動相 B 為 24% :76% ;從 65-70min，流動相 A : 流動相 B 由 24% :76% - 30% :70% ;從 70-90min，流動相 A :流動相 B 由 30% :70% - 40% :60% ; 從 90-105min，流動相 A :流動相 B 由 40% :60% - 90% : 10% ; 樣品測定法：分別吸取供試品溶液與對照品溶液10 Ul，注入高效液相色譜儀，測定， 即得指紋圖譜。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法，其特征在于，包括如 下操作步驟： 供試品溶液的制備：精密稱定所述的淫羊藿提取物〇. 05重量份，置錐形瓶中，精密加 入體積濃度為35%的甲醇溶液50體積份，稱定，超聲lOmin，放涼后稱重，以體積濃度為35% 的甲醇補足減失的重量，過微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：精密稱定朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I對照品 適量，用甲醇配成每1ml份含0. 05mg的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I的 溶液，作為對照品溶液； 高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動 相B為體積濃度0. 05%的磷酸水溶液；柱溫：20°C ;檢測波長：260nm ;流速：0. 5ml ? min 一 S進行梯度洗脫，具體梯度洗脫程序為：從O-lOmin，流動相A :流動相B為15% :85% ;從 10-20min，流動相A :流動相B由15% :85% - 20% :80% ;從20-45min，流動相A :流動相B由 20% :80% - 24% :76% ;從 45-65min，流動相 A :流動相 B 為 24% :76% ;從 65-70min，流動相 A : 流動相 B 由 24% :76% - 30% :70% ;從 70-90min，流動相 A :流動相 B 由 30% :70% - 40% :60% ; 從 90-105min，流動相 A :流動相 B 由 40% :60% - 90% : 10% ; 樣品測定法：分別吸取供試品溶液與對照品溶液2iU，注入高效液相色譜儀，測定，即 得指紋圖譜。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法，其特征在于，包括如 下操作步驟： 供試品溶液的制備：精密稱定所述的淫羊藿提取物〇. 15重量份，置錐形瓶中，精密加 入體積濃度為100%的甲醇溶液15體積份,稱定,超聲50min，放涼后稱重，以體積濃度為 100%的甲醇補足減失的重量，過微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：精密稱定朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I對照品 適量，用甲醇配成每1ml份含0. 50mg的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I的 溶液，作為對照品溶液； 高效液相色譜條件：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；流動相A為乙腈，流動相 B為體積濃度2%的磷酸水溶液；柱溫：40°C ;檢測波長：280nm ;流速：1. 5ml ? min-1，進行 梯度洗脫，具體梯度洗脫程序為：從〇-l〇min，流動相A :流動相B為15% :85% ;從10-20min， 流動相A :流動相B由15% :85% - 20% :80% ;從20-45min，流動相A :流動相B由20% : 80% - 24% :76% ;從 45-65min，流動相 A :流動相 B 為 24% :76% ;從 65-70min，流動相 A :流動 相 B 由 24% :76% - 30% :70% ;從 70-90min，流動相 A :流動相 B 由 30% :70% - 40% :60% ;從 90-105min，流動相 A :流動相 B 由 40% :60% - 90% : 10% ; 樣品測定法：分別吸取供試品溶液與對照品溶液25 yl，注入高效液相色譜儀，測定， 即得指紋圖譜。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法，其特征在于， 所述淫羊藿提取物由如下方法提取得到： 取淫羊藿藥材粉碎，稱取1重量份，加入20-40體積份的水和/或50-95%的乙醇為溶 劑提取1-3小時，將提取液回收乙醇后濾過，通過JD-I(WLD)型或DlOl型大孔吸附樹脂柱， 然后用60-80%乙醇洗脫，當流出液顏色明顯變深時開始收集洗脫液，當洗脫液顏色變得極 淺時洗脫完畢，洗脫液回收乙醇、濃縮、干燥得到淫羊藿提取物； 所述重量份與體積份的關(guān)系為g/mL的關(guān)系。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法，其特征在于，所述淫 羊藿提取物由如下方法提取得到： 取淫羊藿藥材粉碎，稱取1重量份，加入水和/或50-95%的乙醇為溶劑提取兩次，第一 次加10-20體積份溶劑提取1小時，第二次加入10-20體積份溶劑提取1小時，將提取液合 并，回收乙醇后濾過，通過JD-I (WLD)型或DlOl型大孔吸附樹脂柱，然后用70%乙醇洗脫， 當流出液顏色明顯變深時開始收集洗脫液，當洗脫液顏色變得極淺時洗脫完畢，洗脫液回 收乙醇、濃縮、干燥得到淫羊藿提取物。
7. 由權(quán)利要求1-6任一所述方法構(gòu)建得到的淫羊藿提取物的指紋圖譜，其特征在于， 所述淫羊藿提取物指紋圖譜中有16個共有特征峰，與對照品指紋圖譜對照品出峰時間對 t匕，按出峰時間順序確定第6號峰為朝藿定A色譜峰，第7號峰為朝藿定B色譜峰，第8號 峰為朝藿定C色譜峰，第9號峰為淫羊藿苷色譜峰，第16號峰為寶藿苷I色譜峰，以第9 號峰為參照峰，16個色譜峰保留時間比依次為：0? 110-0. 140、0. 490-0. 520、0. 525-0. 555、 0. 560-0.600,0.810-0.840,0.850-0.880,0.890-0.920,0.940-0.970,1.000> 1. 290-1. 320、1. 350-1. 380、1. 450-1. 480、1. 540-1. 570、1. 595-1. 625、1. 605-1. 635、 1. 670-1. 700。
8. 權(quán)利要求1-6任一所述構(gòu)建淫羊藿提取物指紋圖譜的方法在檢測淫羊藿含量及質(zhì) 量控制領(lǐng)域的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體涉及一種淫羊藿藥材的提取物的指紋圖譜的構(gòu)建方法。本發(fā)明所述構(gòu)建淫羊藿提取物的指紋圖譜的方法針對性的開發(fā)了適用于淫羊藿提取物的構(gòu)建方法，確定其共有指紋特征，得到標準指紋圖譜。本方法簡便、穩(wěn)定、精密度高，重復(fù)性好，能有效地用于淫羊藿提取物的質(zhì)量控制。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號】CN104749306
【申請?zhí)枴緾N201310745753
【發(fā)明人】莊滿賢, 何風(fēng)雷
【申請人】廣州白云山陳李濟藥廠有限公司
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2013年12月30日